桐粕脂溶性粗毒素测定方法的建立

采用乙醇溶液对桐粕进行脱毒，再用乙酸乙酯溶液对脱出毒素溶液进行提取、分离，然后用紫外分光光度计对其进行测定，建立了桐粕脂溶性粗毒素测定方法。该方法简单、快速、准确度较高，相对偏差小于5％。     

脱毒桐饼(粕)蛋白质溶解度测定的适宜条件

通过研究脱毒桐饼 (粕 )不同重量和粒度、碱溶液的浓度及 p H值、搅拌时间与离心时间以及离心速度等对蛋白质溶解度的影响 ,确定了测定脱毒桐饼 (粕 )蛋白质溶解度的适宜条件。结果表明 ,其适宜的条件是 :脱毒桐饼(粕 )样品 1.5 g(± 0 .0 0 1) ,需置于 75 m l的 p H值为 13.8的 3% (w/ v) KOH溶液中 ,经磁力搅拌 30 min,取搅拌液5 0 ml于离心机内离心 10 min,转速为 30 0 0转 / min(Rpm) ,再取离心上清液 15 m l,通过凯氏半微量定 N法测定其蛋白质含量 ,最后计算脱毒桐饼 (粕 )蛋白质溶解度     

油茶籽粕提取物中抑菌活性物质的分离纯化研究

以油茶籽粕正丁醇萃取物为原料,通过大孔树脂柱层析、正相硅胶柱层析、高效液相色谱等分离纯化技术将较强抑菌活性的物质进行分离.结果表明,采用60％乙醇进行大孔树脂柱层析,然后以乙酸乙酯、甲醇、甲酸体积比分别为9∶1∶0.1、8∶2∶0.1、7∶3∶0.1进行正相硅胶梯度洗脱,以30％甲醇作流动相进行高效液相色谱纯化,油茶籽粕正丁醇萃取物能分离出纯度非常高的抑菌活性物质.     

油茶籽粕提取物中抑菌活性物质的分离纯化研究

以油茶籽粕正丁醇萃取物为原料,通过大孔树脂柱层析、正相硅胶柱层析、高效液相色谱等分离纯化技术将较强抑菌活性的物质进行分离。结果表明,采用60%乙醇进行大孔树脂柱层析,然后以乙酸乙酯、甲醇、甲酸体积比分别为9：1：0.1、8：2：0.1、7：3：0.1 进行正相硅胶梯度洗脱,以30%甲醇作流动相进行高效液相色谱纯化,油茶籽粕正丁醇萃取物能分离出纯度非常高的抑菌活性物质。     

鸭肝蛋白酶的分离纯化及其部分性质研究

经Tris-HCl缓冲液抽提、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析、Sephacryl S-200凝胶过滤层析,得到鸭肝蛋白酶电泳纯制品．纯化倍数为650.16倍,回收率为19.23%．经SDS-PAGE和凝胶过滤测得该酶的分子量为35kD．该酶在pH6.0～11.0,温度低于25℃稳定,当温度上升到55℃时活性迅速下降．该酶在pH10和60℃时达到最高活性．进一步研究得知：Cu^2＋离子对该酶有明显促进作用,而Mn^2＋却使酶几乎失活．以酪蛋白为底物,在pH10.0、37℃时测得米氏常数Km值为1.33%．     

鸭肝碱性磷酸酶的分离纯化及其部分性质研究

经过匀浆、正丁醇除脂、硫酸铵分级分离、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换柱层析、Sephacryl S-200凝胶过滤等步骤,从鸭肝中分离纯化出电泳纯的碱性磷酸酶,该酶纯化倍数达58．3倍,比活为337．4U／mg．经SDSPAGE和凝胶过滤测得该酶的全分子量为121．0kD,亚基分子量为60．5kD．以磷酸苯二钠为底物,测得该酶的最适pH为9．0,最适温度为40℃．Na^＋、K^＋、Li^＋等一价离子对该酶活性基本无影响,Mg^2＋、Mn^2＋对该酶活性有激活作用,Cd^2＋对该酶活性有抑制作用．米氏常数Km为1．28mmol／L．     

无花果蛋白酶的分离纯化及其理化性质研究

以无花果良种布兰瑞克和紫果１号为材料，其匀浆滤汁经有机溶剂沉淀、超滤等方法处理，得到无花果蛋白酶粉。酶比活力为１５．３４ｕ／ｍｇ·ｐｒｏｔｅｉｎ，纯化倍数为１１．６８％，酶产率为１．５％，酶活力回收率为２７．４％，酶最适ｐＨ为８．０，在ｐＨ５￣１０范围内处理０．５ｈ活性稳定，酶最适温度为４０℃，在温度５０℃以内活性稳定。酶具有巯基蛋白酶特性，能被半胱氨酸和ＥＤＴＡ激活，而被ＨｇＣｌ２抑制。     

棉花黄萎病菌致萎毒素的分离纯化方法

利用快速蛋白质液相色谱技术（Fast Protein Liquid Chromatography,FPLC)，对棉花3个黄萎病菌（Verticillium dahliae)菌系外泌毒素的某些理化性质进行了分析，结果显示，黄萎病菌毒素有两个致萎峰，大分子峰I毒蛋白致萎力较弱，致萎症状属黄斑型，分子峰Ⅱ毒蛋白其致萎力极强，致萎症状属青枯型，透析试验表明，可透8000－10000Da的透析袋会使小分子峰Ⅱ丢失，热稳定试验表明，峰I，峰II毒蛋白皆可耐100℃高温水浴热煮而不发生沉淀，并保持致萎活性，根据以上研究结果，本文提出了黄萎病毒分离纯化新方法。     

猪凝血酶的分离纯化及部分性质研究

经等电点沉淀,ＤＥＡＥ离子交换纤维素柱层析和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００分子筛层析从猪血浆中纯化得到到猪凝血酶,酶比活力为２０００Ｕ／ｍｇ,纯化倍数为１００,酶活力回收为５６％,酶反应的最适ＰＨ和温度分别为７．０和３７℃,ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００层析测得酶分子量为３６０００。猪凝血酶的稳定性较差,４０℃保温２７ｈ,酶活力下降８４％。高浓度的盐对酶稳定性有较大的影响,在２ｍｏｌ＝／ＬＮａＣｌ下放置３     

莲藕过氧化物酶的分离纯化及性质研究

经40%-85%硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析、Sephacryl S-200凝胶过滤层析纯化,得到莲藕过氧化物酶（POD）电泳纯制品.该酶纯化倍数为39.77倍,回收率为11.76%.酶学性质和动力学性质研究表明,该酶最适pH为5.0;最适温度为35℃;以不同浓度的过氧化氢与莲藕POD在25℃、pH5的条件下反应,测得其Km值为9mmol/L.CuSO4和ZnSO4对莲藕POD活性有激活作用;BaCl2、MgCl2及SDS对其活性影响不大;Na2SO4、Li2SO4、KCl和NaCl对POD活性有一定的抑制作用;MnSO4和FeSO4对POD活性有较强的抑制作用;ASA能完全抑制POD的活性.     

桐粕降解菌DBTM1培养条件的优化

对桐粕粗蛋白降解菌DBTM1的培养条件进行了优化.采用单因素试验法对DBTM1发酵的主要影响因素温度、转速、初始pH值等进行了研究,通过正交试验对其发酵培养基在摇瓶培养阶段进行了优化.并在优化后的条件下绘制了该茼的生长曲线.结果表明,该菌株适合的种子培养基各成分质量分数为玉米粉1.50%、蛋白胨0.75%、NaCl 0.50%,最适生长温度为35℃,最适初始pH值为6.5,最适转速为210 r·min-1;DBTM1生长影响因素的大小次序为蛋白胨＞温度＞转速＞玉米粉.     

抗生素分离纯化技术

从发酵液中分离纯化抗生素,是抗生素新药研发的难点。根据抗生素性质的差异建立的分离纯化方法各不相同,因此采用合理有效的分离纯化技术路线是新型抗生素研究成功与否的关键。本文综述了抗生素分离纯化常采用的技术手段,并且报道了一些国内外最近研制出的新型抗生素的分离纯化方法。     

嗜水气单胞菌重组Aer毒素的纯化和抗原性分析

对原核表达的重组嗜水气单胞菌Aer毒素进行初步纯化,比较了它与天然Aer毒素的抗原性,为建立检测该毒素的免疫学方法奠定了基础。将原核表达的重组Aer毒素经SDS-PAGE后,切下目的蛋白,利用电洗脱法将蛋白洗脱出来,后经透析、PEG8000浓缩、定量,对獭兔进行免疫,采集血清,提纯IgG,在W estern b lotting试验中可与天然Aer毒素起反应,说明,体外表达的重组Aer毒素保留了天然Aer毒素所具有的抗原性。同时,将嗜水气单胞菌AHCS02菌接种于兔鲜血平板,30℃、培养15 h后,将具有β-溶血的单菌落于LB液体培养基中培养后,用饱和硫酸铵法提取上清液中的天然Aer毒素,用甲醛脱毒后,以同样免疫方法免疫獭兔,免疫结束后,采集血清提取IgG,在W estern b lotting试验中,可以检测到重组Aer毒素。试验说明:原核表达的重组Aer毒素和天然Aer毒素诱导獭兔产生的血清IgG抗体可以互相识别重组Aer毒素和天然Aer毒素,重组Aer毒素和天然Aer毒素有相似的抗原性。     

番茄红素分离纯化研究

以5%番茄红素粉为原料,研究了应用不同型号树脂对番茄红素进行分离纯化的效果。结果表明,不同型号树脂对番茄红素的分离纯化效果不同,其分离纯化效果顺序为X-5AB-8S-8离子交换树脂,最适静态吸附样液浓度为0.03 g/L、最适静态解吸时间为1 h、最适动态上样速度为2 BV/h、最适洗脱剂为乙酸乙酯。番茄红素经X-5吸附后,以乙酸乙酯为洗脱剂,可将番茄红素浓缩5.9倍,具有良好的富集纯化效果。     

油桐主要种实性状遗传参数的研究

本文用17个家系连续4年的观测值,系统地估算了油桐果重、果径、果高、果形指数、单果含籽数、单粒籽重、出籽率、出仁率、出油率和单株产籽量等10个性状的遗传力、遗传相关和重复力。结果表明,单粒籽重、果形指数、单株产籽量和出油率的遗传力较大,h_f~2依次为0.719,0.555,0.583和0.564,单果含籽数的遗传力最低,只有0.032;果重与单粒籽重、出籽率、单株产籽量,果形指数与出籽率、出油率,每果含籽数与单粒籽重,单粒籽重与出仁率,出油率与单株产籽量的遗传相关紧密,r_A依次为0.90,-0.74,0.80,-0.70,0.86,-0.96,-0.84和-0.73;单粒籽重、果径、果高、果形指数和果重的重复力较大,t_I依次为0.682,0.665,0.563,0.527和0.515,单株产籽量重复力最低,只有0.190.     

水生栖热菌FL-03海藻糖合酶的分离纯化及特性研究

将从水生栖热菌FL-03中获得的海藻糖合酶粗酶液经硫酸铵分级沉淀、DEAE Sepharose CL-6B离子交换层析S、ephacryl S-200HR凝胶过滤层析后,纯化68.48倍,产率为18.4%。研究表明:该酶分子量约为101 kD,最适反应温度为60℃,最适pH为7.0,在40~80℃、pH 6.0~9.0范围内具有较高的反应活性和稳定性。Fe3 对该酶具有一定的激活作用,Cu2 、Tris、Zn2 对该酶具有较强的抑制作用。该酶具有高度的底物特异性,只能专一地将麦芽糖转化为海藻糖。在40℃4、8 h条件下,麦芽糖转化为海藻糖的转化率最大可达到79%。     

育亨宾生物总碱的分离与纯化

本实验旨在将低含量的育亨宾生物碱纯化、富集,并分离其多种成分。选用8.00%育亨宾盐的粗品,先用酸溶碱沉和有机物萃取的提取方法得到较高含量的育亨宾生物碱,即纯化的育亨宾生物碱。然后用紫外分光光度法粗略的测定纯化的育亨宾生物碱的含量,再通过超高效液相色谱法精确的测定纯品的育亨宾生物碱含量。其分离可通过配置合适的洗脱液,过碱性氧化铝的柱子实现。最终获得纯度较高的育亨宾生物碱,并收集到其在柱层析过程分离开的各条带,即育亨宾生物碱的各种同分异构体,将其各种成分成功的分离开。经过碱性氧化铝的柱层析,将纯化的育亨宾生物碱分离为两条色谱带。     

石楠拟盘多毛孢致病毒素的初步分离纯化

为了获得引起草莓根腐病的石楠拟盘多毛孢(Pestalotiopsis photiniae)产生的致病毒素组分,利用中压硅胶柱层析、高效液相C-18制备柱层析和sephadex LH-20层析对粗毒素进行了分离纯化,以离体叶盘针刺法检测分离所得组分的致病活性。结果显示:经中压硅胶柱层析和高效制备液相色谱得到了FrⅢ1和FrⅢ2两个组分,其中FrⅢ1有较强活性;用sephadex LH-20对FrⅢ1进一步纯化后又得到了两组活性组分FrⅣ1-2和FrⅣ3-4,其中组分FrⅣ3-4的活性明显强于组分FrⅣ1-2;HPLC分析发现这两组组分又分别含有2个和5个组分,7个组分均在C-18柱层析过程中出峰时间较早,说明该毒素的极性较大。     

辣椒疫霉菌致病毒素的纯化及其致病性的研究

通过硫酸铵沉淀法提取到疫霉菌的原始毒素。采用甜椒叶片注射法检测毒素的活性。采用两种方法对原始毒素进行纯化,用连续Bio-gel P-100柱层析法纯化能将毒素提至层析纯。在离子交换一分子筛层析法中,原始毒素依次经DEAE52-cellulose→CM32-cellulose→Sephadex G-75柱层析纯化后,经电泳检测为单一条带,说明达到电泳纯。采用SDS—PAGE法测定毒素的分子量为41．9ku。对毒素的组分进行了测定,结果表明毒素中蛋白质含量为70．4％,糖含量为29．6％。毒素经蛋白酶K和胰蛋白酶处理后活性均下降,而用β-葡萄糖苷酶处理后活性变化不大,说明蛋白质亚基在P.capsici毒素活性中起着主要作用。