产纤溶酶菌株的分离筛选

以脱脂奶粉作为初筛底物,纤维蛋白作为复筛底物,透明圈作为筛选标记,从肉联厂,污水沟等地筛选出产纤溶酶的菌株40株,从中筛选出产酶活力最高的2号菌株,将其编号为ZLW-2,并采用改进的紫外分光光度法测酶活,提高了酶活测定的精确性,对提高纤溶酶产生菌的筛选效率有重要意义。菌株ZLW-2的发酵过程研究表明,纤溶酶是在菌体大量生长以后酶活力才开始增加。     

雷竹林存留有机覆盖物高效降解菌株分离及产酶条件优化

 有机覆盖物林地大量存留是雷竹Phyllostachys violascens林退化的主要原因之一。为人工促进有机覆盖物高效腐解,为有机覆盖物促腐制剂研制提供前期研究基础,采用稀释涂平板法和富集培养法从雷竹林地覆盖有机材料（砻糠、稻草）和雷竹林土壤中,初选出具有较强纤维素酶活力的菌株7株,其中,真菌4株,放线菌3株,复选出有机覆盖物高效降解菌株1株（菌株2.1）。经菌落形态和生物学特性分析,菌株2.1属青霉属Penicillium,最佳产酶条件为起始pH 5.0,培养温度30 ℃,培养时间5 d,碳源为稻草秸秆粉25.00 g·L^－1,氮源为牛肉膏2.50 g·L^－1,无机盐为氯化铁（FeCl₃）0.01 g·L^－1和磷酸二氢钾（KH₂PO₄）1.50 g·L^－1。图4表3参20     

海洋产几丁质酶菌株的筛选及发酵条件优化

通过透明圈法初筛、DNS复筛,从大连近海海域的海泥中分离出一株高产几丁质酶的菌株,经初步鉴定为扩展短杆菌(Brevibacterium linens).采用不同碳源、氮源、温度、pH值等对培养条件进行了优化及正交试验.结果表明:该菌产酶最适条件是在28℃、pH7.0、蛋白胨1g/L、胶体几丁质10g/L、NaCl 20g/L条件下,几丁质酶活力可达0.508 U/mL,比优化前其产酶活力提高了9倍.     

产纤维素酶菌株C真3的筛选

对19株产纤维素酶菌株进行摇床发酵试验，并对其产生的纤维素酶进行滤纸酶活、CMC酶活、β-葡萄糖苷酶活测定，初步筛选出1株产纤维素酶活力较高的菌株C真3。     

高产β-葡萄糖苷酶菌株的筛选及产酶条件优化

通过七叶苷平板法从腐殖质土壤中筛选得到高产β-葡萄糖苷酶的2个菌株(H_2和H_5),并利用单因素法对这2个菌株的产酶条件进行了优化。经形态学特征初步鉴定,菌株H_2和H_5均为黑曲霉(Aspergillus niger)。H_2的最优发酵条件为:以蔗糖为碳源,以硫酸铵+尿素(1∶1)为氮源,培养5 d,培养温度28℃,初始pH 4.0。H_5的最优发酵条件为:以红糖为碳源,以硫酸铵+硝酸铵(1∶1)为氮源,培养5 d,培养温度28℃,初始pH 4.5。在优化的各因素中,以培养温度对菌株H_2和H_5所产β-葡萄糖苷酶活力的影响最大。     

高产β-葡萄糖苷酶菌株的筛选及产酶条件优化

通过七叶苷平板法从腐殖质土壤中筛选得到高产β-葡萄糖苷酶的2个菌株(H_2和H_5),并利用单因素法对这2个菌株的产酶条件进行了优化。经形态学特征初步鉴定,菌株H_2和H_5均为黑曲霉(Aspergillus niger)。H_2的最优发酵条件为:以蔗糖为碳源,以硫酸铵+尿素(1∶1)为氮源,培养5 d,培养温度28℃,初始pH 4.0。H_5的最优发酵条件为:以红糖为碳源,以硫酸铵+硝酸铵(1∶1)为氮源,培养5 d,培养温度28℃,初始pH 4.5。在优化的各因素中,以培养温度对菌株H_2和H_5所产β-葡萄糖苷酶活力的影响最大。     

中温木聚糖酶高产真菌菌株筛选及产酶条件

利用以木聚糖作为惟一碳源的基础盐培养基,在30℃培养条件下,从新乡周边土样及腐殖质中筛选到1株β-木聚糖酶高产真菌菌株(Fusarium sp.FLH28).该菌株在20～40℃生长良好,最适生长温度30℃.产酶培养条件优化结果表明,在培养温度为30℃,培养基初始pH 6.0,以玉米芯为碳源,以蛋白胨、酵母粉和玉米浆为有机氮源,发酵4d,木聚糖酶活性达562,6 U/mL,木聚糖酶最适pH和温度分别为6.5和40℃.     

高产纤维素酶菌株的筛选及其产酶条件研究

为了得到高产纤维素酶菌株和确定其最优生产发酵工艺,采用比色法对供试的Z1、Z2、Z3、W2、W5、FG10、FG209、H8和A8等9株真菌进行筛选,对筛选出的高产纤维素酶菌株进行初步鉴定,并对其最佳产酶条件进行了研究。结果表明,FG10和FG20为高产纤维素酶菌株;FG10的最适产酶条件为豆粕0.3 g/kg,pH 4.8,35℃培养48 h;FG20的最适产酶条件为油渣0.2 g/kg,pH 4.4,35℃培养48 h;2株菌均属曲霉属,其中菌株FG10为烟曲霉,菌株FG20为米曲霉。     

产芽孢纤维素降解细菌XN-13菌株筛选及酶活力测定

为筛选对纤维素具有降解作用的产芽孢细菌,以牛粪为原料分离到217株降解细菌,采用刚果红平板法对其进行初筛,对其发酵液测定酶活进行复筛,其中XN-13具有显著的降解活性,酶活力达1700U/ml.对XN-13进行了菌体形态、菌落特征的观察及一系列生理生化试验和16S rDNA的序列测定,结合XN-13菌株的形态特征和生理生化特征综合考察,初步判断XN-13为一株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis).产纤维素酶芽孢杆菌的获得对菌剂的大工业生产及菌剂的商品化具有重要意义.     

条斑紫菜褐斑病原褐藻酸降解菌的筛选与鉴定

对分离自条斑紫菜(Porphyrae yezoensis L.)褐斑病的1株能够分解褐藻酸的假交替单胞菌(Pseudoalteromonas sp.)Z2进行了致病性、形态特征、生理生化特性及16 S rRNA与gyrB基因序列的系统发育学分析等研究.结果表明,该菌能够使条斑紫菜出现红斑,为革兰氏染色阴性杆菌,有动力,氧化酶阳性,严格需氧,生长需要Na+,大小约在(1.0～1.2)μm×(2.0～2.5)μm;其16 S rRNA和gyrB基因序列通过Blast检索均与假交替单胞菌属(Pseudoalte romonas)细菌具有较高的同源性,gyrB基因序列与产黑假交替单胞菌(Pseudoalteromonas nigrifaciens)同源性在99％,综合分离菌的形态、生理生化特性及16 S rRNA和gyrB两种基因的分子鉴定,确认分离菌为假交替单胞菌,且初步认为其可导致紫菜发生褐斑病.     

芘降解菌株的筛选及降解条件的研究

为了筛选高效多环芳烃芘的降解菌株并研究其降解条件,为生物修复多环芳烃污染土壤提供科学依据和实验材料,从长期受石油污染土壤中分离筛选得到一株芘降解菌B4,初步鉴定为假单胞菌属(Pseudomonassp.)。并采用室内培养方法,研究了该菌株降解芘的特性及各种环境条件对降解效能的影响。结果表明,菌株B4在28℃振荡培养条件下,对50mg.L-1的芘降解率为91.70%,芘的降解与细菌数量的增长呈正相关关系。加入水杨酸(50mg.L-1)作为共代谢底物,降解率可达到95.55%。当pH为4、盐浓度高于5%时,菌株B4不生长。对菌株B4在重金属离子胁迫下对芘的降解研究发现,在一定浓度下,Pb2 与Zn2 的存在对B4的降解效能影响较小,Cu2 对菌株的生长具有一定的抑制作用,Cd2 对菌株B4有毒性。     

产异淀粉酶嗜热菌选育及产酶条件的研究

以嗜热脂肪芽孢杆菌为初始菌种,经过诱变筛选,得到产异淀粉酶的突变菌株UM761,酶活在原始菌种产酶水平的基础上提高了2~3倍。对UM761的产酶条件进行了优化,结果表明:最适产酶菌株培养条件为以1%葡萄糖作为碳源,牛肉膏、蛋白胨和酵母粉的混合物作为氮源,温度44~46℃,培养时间48~64 h,培养基初始pH值6.2~6.5。金属离子Co2+、Mg2+、Ca2+对异淀粉酶有较强的激活作用,而Fe3+、Fe2+对酶则有较强的抑制作用。     

一株降解PCBs嗜盐菌的筛选及产酶条件研究

从深海底泥中提取出一株生长盐度在15％的降解PCBs的嗜盐菌,并将其命名为B2．6。此菌株能以PCBs为惟一碳源和能源生长．72h的降解率可达90％以上。对其进行了形态观察、革兰氏染色及各项生理生化指标鉴定,并和Biolog细菌鉴定系统鉴定的结果进行了比对。研究结果表明,菌株B2．6合成PCBs降解酶的模式为延续合成型;主族的一价离子Na^＋．K^＋能够提高PCBs降解酶的酶活,过渡金属离子Co^2＋, Mn^2＋, Cu^2＋, Fe^2＋和Fe^3＋酶活则有一定程度的抑制;此酶的最适温度和pH值分别为25～35℃和pH6-8。     

苯胺降解菌的筛选及降解特性分析

采用富集培养法从污水处理厂浓缩污泥中获得一株能够高效降解苯胺的菌株AD-3,通过单因素试验和正交试验,得到苯胺降解最佳务件为温度30℃、初始pH 7.0、培养时间48 h和苯胺最大耐受浓度2 500 mg/L,此时的苯胺降解率达99.7％;重金属离子对该菌株降解苯胺有一定的抑制作用,其中Ag+和Hg2+的抑制作用较明显.     

产蛋白酶海洋细菌的筛选及产酶工艺优化

[目的]筛选产蛋白酶的海洋细菌资源。[方法]分别采用2216E培养基和酪蛋白固体培养基,对采自宁波洋沙山和象山海域的海水进行微生物的分离与纯化,采用平板透明圈法初筛和酶活力测定法复筛,采用16S r DNA序列分析进行菌株鉴定,并进行产酶工艺优化研究。[结果]纯化出15株产蛋白酶海洋细菌,从中筛选出1株产蛋白酶活力最高的菌株PB02,经鉴定为交替假单胞菌(Pseudoalteromonas sp.)。该菌株最适培养温度为20℃,最适装液量为10%,最适接种量为0.5%,最适转速为100 r/min,最适培养基pH为7。酶促反应最适温度为40℃,最适pH为10。[结论]该研究为蛋白酶高产菌株的改造和定向进化奠定了资源基础。     

假单胞杆菌BS1培养条件的研究

为了明确假单胞杆菌BS1的适宜培养条件,采用单因素筛选方案对其最适碳源、接种量、温度、pH值、盐浓度和培养基装液量进行研究,发现假单胞杆菌BS1生长的最佳碳源为液体石蜡,生长最适接种量为3%,温度30℃,pH 7.0,NaCl浓度0%,250 mL三角瓶中培养基装量为130 mL。在此优化的培养条件下,假单胞杆菌BS1生长曲线是0~48 h为菌体生长延滞期,48~156 h为菌体快速生长繁殖期,156~240 h为菌体生长稳定期,240 h后为菌体衰亡期。通过对假单胞杆菌BS1的最佳培养条件研究,将为工业化生产提供技术参数。     

乳品污水蛋白降解细菌及其产酶条件的筛选

从乳品污水中筛选出一株蛋白降解细菌,经鉴定为短小芽孢杆菌(Bacilluspumilus)。其蛋白酶反应的最适温度为38℃,最适pH值为7.0。最佳产酶条件为30℃,150r·min-1,种龄18h,接种量5%,250mL三角瓶中装液量90mL,发酵周期64h。在此条件下,菌株产生的中性蛋白酶活力最高达到52U·mL-1。     

中度嗜盐菌Nesterenkonia sp.DF-1产淀粉酶发酵条件优化的研究

[目的]摸索出Nesterenkoniasp．DF-1菌种的产淀粉酶的优化发酵条件,为发酵工业中淀粉酶的大规模生产提供理论依据。[方法]采用单因素和多因素正交试验的方法,考察发酵时间、温度、初始pH、盐度、碳源和氮源的改变对发酵产淀粉酶的影响。[结果]在装液量100ml／250ml条件下,得到产淀粉酶最佳条件为：玉米粉1％,酵母膏2％,初始pH8．O、NaCl浓度3％、37．5℃、160r／min振荡培养72h。[结论]该研究找到了产淀粉酶的最佳发酵条件。     

鹅膏菌产抑菌物质培养条件优化及安全性分析

经前期试验验证鹅膏菌菌株AV对杨树烂皮病病原菌金黄壳囊孢菌有抑制作用,通过比色法和生物量测定结果得出其抑菌物质产生的最佳营养条件。在供试营养物质中,乳糖为最佳碳源,蛋白胨为最佳氮源,方差分析结果表明,碳源是鹅膏菌AV生物量及其抑菌物质产生的最主要影响因素,与其他营养元素差异显著(α=0.05)。培养基最佳组合为:①乳糖30.0 g/L,蛋白胨0.5 g/L,MgSO41.5 g/L,KH2PO44.5 g/L;②乳糖10.00 g/L,蛋白胨0.50g/L,MgSO40.75 g/L,KH2PO44.50 g/L;③乳糖30.0 g/L,蛋白胨2.0 g/L,MgSO41.50 g/L,KH2PO43.0 g/L。液体发酵培养时,菌株AV产生抑菌活性物质的最适培养条件为:pH值5～6,温度25℃,接种量1.25%,装液量50%,摇床转数180 r/min,培养时间20 d。当温度超过75℃,pH大于9或小于4时,或者紫外照射时间超过4 h都会使抑菌物质活性降低。小鼠毒性试验结果表明,小鼠饲喂菌株AV菌丝体,LD50为418.70 mg/kg,95%可信限为453.11～386.90 mg/kg,抑菌物质控制在2 g/L以内对小鼠无影响,因此,在进行病原菌防治时,为减少对环境中其他生物的影响,菌株AV抑菌物质质量浓度应低于2 g/L。