核盘菌和三叶草核盘菌的生态特性与致病性比较

在调查核盘菌和三叶草核盘菌发生为害的基础上，以核盘菌菌株Ｒａｐ－１和三叶草核盘菌菌株ＣＭＶ－２为代表，比较了温度及降雨等因子对菌丝生长及菌核萌发的影响。在１５￣２８℃下Ｒａｐ－１菌丝生长较ＣＭＶ－２快，但在８℃下则相反；Ｒａｐ－１菌核在自然条件下萌发期间的温度较ＣＭＶ－２菌核萌发时温度高，两者菌核萌发呈现出明显的先后秩序。春季降雨的波动导致２种核盘菌的菌核萌发出现波动。离体致病性测定结果表明，核盘     

核盘菌菌核田间存活初探

菌核是核盘菌(Sclerotinia sclerotorum(Lib。)deBary)在土壤中越冬越夏的结构,同时也是构成油莱等作物菌核病的初侵染源。前人的研究结果表明,土壤生物因素是影响菌核存活的主要因素,尤其是夏季高温的环境。因此作者选择了两块油菜后作旱地,考察菌核在其中的存活及其同菌核相关的其他生物类群,现初报如下。1 材料与方法1.1 供试菌核来源以灭菌(121℃/30分钟)的胡萝卜片培养核盘菌菌核,培养4星期之后取出,水洗后置于室温下风干。     

核盘菌子囊盘形成的影响因子

观察比较营养，温度，干燥，土壤深度等因素对核盘菌萌发子囊盘，形成了囊孢子的影响。结果表明：ＰＤＡ不适合培养菌核萌发子囊盘；该菌的不同菌株对低温处理和不同温度的反应有所不同；所试菌株经干燥处理后，不能萌发子囊盘；该菌菌核的子囊盘萌发率随着土壤深度的增加而下降。     

人参核盘菌菌核分泌液致病性及生物学特性研究

为明确人参核盘菌菌核分泌液致病性及其生物学特性,利用离体接种法比较人参核盘菌菌丝及其分泌液对人参根组织的侵染特性,运用3,5-二硝基水杨酸法测定人参核盘菌菌丝及其分泌液中细胞壁降解酶种类及活性差异,采用平板培养法分析了不同培养基、碳源、氮源和pH值对人参核盘菌菌丝生长、产核及分泌液形成的影响。结果表明:接种病菌分泌液和菌丝均能导致人参根部产生坏死状病斑,且接种分泌液的病斑出现时间早于接种菌丝,但分泌液持续侵染能力比菌丝弱。分泌液和菌丝中均含有PG酶和Cx酶,分泌液中的PG酶活性高于菌丝,Cx酶活性低于菌丝,PMG酶仅在菌丝中检测到,分泌液和菌丝中均不含β-葡萄糖苷酶。病菌在SDA培养基中生长速度最快,在V8培养基中菌核产生数量最多,在MEA培养基中菌核鲜重和干重最重,在PDA培养基中,供试菌株分泌液产生量最大。以蔗糖与葡萄糖为碳源时,供试菌株菌丝生长速率最快,以葡萄糖酸钠为碳源时,菌核产量最多,以果糖为碳源时,菌核鲜重和干重值最大,以葡萄糖为碳源时,菌核分泌液产生量最大。以蛋白胨、牛肉膏和酵母浸粉为氮源时,供试菌株菌丝生长速率最快,以酵母浸粉为氮源时,菌核产量、鲜重、干重和分泌液产生量...     

磷酸二酯酶通过cAMP-PKA途径调控核盘菌菌核原基的形成

在PDA培养基中添加不同浓度的磷酸二酯酶（PDEs）抑制剂阿托品,检测其对核盘菌生长发育的影响,并采用qRT-PCR方法检测PDEs主效基因及cAMP-PKA通路中相关基因的表达情况,研究核盘菌PDEs在cAMP-PKA通路中的作用,为开发以PDEs为靶标的新型杀菌剂提供理论基础。结果表明,当阿托品添加浓度为4 mmol/L时,核盘菌菌丝生长速率和菌核形成均受到影响。从核盘菌基因库中检索出了8个PDEs,qRT-PCR结果显示,PDE1/2在核盘菌菌核形成过程中表达量较高。添加PDEs抑制剂后,cAMP-PKA通路中PDEs上游基因AC和RAS表达量上调,但PDE1、PDE2和下游因子PKA表达量均下降。由此可知,PDEs在核盘菌菌核形成方面具重要作用,PDEs抑制剂通过抑制PDE1/2的表达使得下游因子PKA表达量下降,进一步影响菌核原基的形成。     

核盘菌几丁质酶基因家族分析与表达特性研究

核盘菌菌核以子实体形式萌发是作物菌核病病害循环中关键性的一环,研究菌核子实体萌发分子机理将为菌核病的安全控制提供线索.该研究通过生物信息学方法对核盘菌几丁质酶基因家族进行分析,并利用实时荧光RT-PCR对其在菌核子实体萌发阶段的表达进行探讨.生物信息学分析表明核盘菌中共有12个基因编码假定的几丁质酶,它们均具有GH18结构域,部分蛋白还具有几丁质结合结构域和纤维素结构域;除SS1G_11212外其余蛋白均为亲水性蛋白;亚细胞定位预测表明其中10个假定几丁质酶位于胞外,其余2个分别位于细胞核和细胞质中.通过构建系统发育树分析发现假定几丁质酶可以分为2大类,其中3个与酵母几丁质酶CTS1归为一类,其余9个与CTS2归为另一类.除SS1G_00773外,其余11个几丁质酶基因在核盘菌菌核子实体萌发过程中表达量均有变化,推测几丁质酶家族蛋白可能参与核盘菌菌核子实体萌发过程.     

cAMP抑制核盘菌菌核形成的差异基因表达分析

【目的】探究核盘菌响应环磷酸腺苷（cyclic adenosine monophosphate,cAMP）处理的转录组学特征,挖掘调控核盘菌菌核形成的关键基因,为靶向杀菌剂的研发提供参考。【方法】以接种在PDA培养基上生长至菌核原基形成时期的核盘菌作为CK1,开始形成黑色素时期的核盘菌作为CK2,以接种在PDA+5 mmol/L cAMP培养基上生长相同时间(5,7 d)的核盘菌作为试验组,依次命名为M1 和M2,对这4组样品进行转录组测序（RNA-seq）比较,阐释cAMP影响菌核形成的调控途径,挖掘菌核原基及菌核黑色素形成中的差异表达基因（differentially expressed genes,DEGs）。【结果】外源添加的cAMP主要在M1前期影响胞内的cAMP含量。差异表达基因分析结果显示,M1和CK1之间共有681个差异表达基因;KEGG富集分析显示,这些基因主要参与各类氨基酸代谢、脂肪酸代谢、MAPK信号通路等,且通路中的大部分基因都呈上调表达模式,而MAPK及其下游作用因子钙调磷酸酶B亚基（calcineurin B subunit,CnB）和热休克蛋白70（heat shock 70 ku protein,HSP70）则明显下调。M2和CK2之间共筛选到4 490个差异表达基因,主要参与各类氨基酸代谢、抗原加工提呈以及cAMP、MAPK等信号通路和自噬途径,通路中的大部分基因呈上调表达模式,且自噬相关因子ATG2、ATG20、ATG22、ATG23、ATG27和ATG29也大量上调表达,而与蛋白质和脂类合成相关的磷酸酶B（phosphatase B,PTPB）和酰基辅酶A氧化酶（acyl coenzyme A oxidase,ACO）的表达量则明显下调。在M1和M2时期,相关基因的qRT-PCR与RNA-seq差异表达分析结果趋势相同,说明转录组测序数据准确。【结论】核盘菌可通过吸收胞外高浓度的cAMP抑制菌核形成菌丝,其抑制作用主要通过影响相关蛋白质及脂类物质的合成而对菌丝形态及信号传递造成障碍。     

核盘菌转代培养后生理特性变异初探

来自向日葵上的核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum(Lib.)de·Bary)菌株Sun-1P经多次转代培养及冰箱保存后对有机氮(牛肉汁、蛋白胨、酵母膏)及淀粉的利用能力发生了显著改变。其中转代株Sun-1M对有机氮的利用与pH值及速效糖(葡萄糖)的存在有关系。离体致病性测定表明:Sun-1M对油菜、莴苣、向日葵及蚕豆等寄主仍具有致病性。     

不同的培养条件对向日葵核盘菌次生菌核形成的影响

向日葵菌核病是由核盘菌引起的向日葵的一种主要病害,由菌丝特化形成的菌核在向日葵菌核病的侵染循环过程中扮演着非常重要的角色。本研究以向日葵上采集的菌核为材料,研究了培养基不同的碳源、不同的p H值、不同培养温度以及不同培养基种类对核盘菌次生菌核形成的影响。结果表明使用乳糖、可溶性淀粉、麦芽糖、鼠李糖、甘露醇作为培养基的碳源有利于核盘菌次生菌核的成熟,其中含有甘露糖的培养基有利于产生数量较多的菌核;培养基的p H介于3~5利于快速形成较多数量的菌核,而且菌核的形成容易导致培养基中PH值不同程度的降低;20℃~25℃培养条件不仅有利于菌核快速形成而且还有利于形成大粒的数量较多的菌核;不同的培养基种类对次生菌核形成的影响结果表明燕麦培养基有利于产生的均匀,大粒的菌核,而查氏培养基上产生的菌核较小,但数量最多。     

核盘菌致病性测定方法研究

[目的]探讨核盘菌致病性测定的方法。[方法]研究了菌丝圆片活体叶片接种法、菌丝圆片离体叶片接种法、菌丝圆片活体茎杆接种法和带菌牙签活体茎杆接种法4种方法（9种处理）对核盘菌致病性测定结果的影响。[结果]各方法（处理）都能根据病斑大小区分出菌株间致病性的差异,但用菌丝圆片在离体叶片上不穿刺接种是最为简便易行、快速可靠的测定方法。[结论]为菌核病的防治及抗病品种的选育提供了理论依据。     

5种碳源对核盘菌丝生长及菌核形成的影响

[目的]探究5种碳源对核盘菌菌丝生长和菌核形成的影响。[方法]设固体培养条件下5种碳源(葡萄糖、淀粉、甘油、甘露醇、乙醇)和空白对照,3次重复,观测不同浓度(2%、4%、8%、16%、20%)碳源对核盘菌的菌丝生长和菌核产生的影响。[结果]碳源种类及浓度对核盘菌的菌丝生长和菌核形成均有较大影响。葡萄糖和淀粉是核盘菌的适宜的碳源,既适合于菌丝营养生长也适合于菌核形成,但菌丝生长和菌核形成的最适浓度不一致;甘油、甘露醇和乙醇3种碳源适宜于菌丝营养生长,但抑制菌核的形成。[结论]该研究为找到可以控制核盘菌生长或菌核形成的靶标位点提供了依据。     

核盘菌菌核重寄生菌的分离筛选

从云南、四川、甘肃、陕西、山西、湖南、河北、北京、黑龙江、吉林、辽宁、内蒙古等12个省市(区)采集土样103份,采用室内菌核诱捕的方法分离得到了148个真菌菌株,分别属于12个属。其中黏帚霉属(Gliocladium spp.)77个菌株,包括4个种,占全部分离菌的52.03%,为优势种群;其次为青霉菌(Penicillium spp.)21个菌株,分离率为14.19%;镰刀菌(Fusarium spp.)16个菌株,占10.81%;木霉菌(Trichoderma spp.)13个菌株,占8.78%;轮枝菌(Verticillium spp.)8个,占5.41%。对其中寄生率较高的菌株进行回接,结果表明,黏帚霉和木霉寄生核盘菌(Sclerotiniasclerotiorum)菌核的能力强,接种1周后导致菌核腐烂,但不同菌株之间存在差异;而镰刀菌、轮枝菌对菌核的寄生能力较差。并且,首次用菌核诱捕的方法从云南省玉溪市烟草田土壤中分离获得了一株能寄生菌核的捕食线虫丝孢菌,经鉴定为椭圆单顶孢[Monacrosporium ellipsosporum(Preuss)Cooke&Dickinson]。     

大豆菌核病(Sclerotinia sclerotiorum)接种技术研究综述

开展大豆品种对大豆菌核病的抗性研究,对控制该病害的发生和流行具有重要的意义。综述了大豆品种对大豆菌核病的抗性评价中所采用的各种人工接种技术和田间自然诱发鉴定等方法。对人工接菌技术所涉及的病原菌的萌发及培养方法等相关性研究也加以阐述,并展望了今后的发展趋势。     

向日葵菌核病菌接种方法试验

采用纯培养菌丝块、向日葵立枯型菌丝和子囊孢子等材料及伤口和非伤口2种方法接种,对向日葵菌核病菌的田间接种材料和接种方法进行了试验。结果表明：用立枯型菌丝茎秆制成菌丝签接种效果最佳,子囊孢子接种效果最差。     

川芎菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)的生物学特性

对川芎菌核病菌的生物学特性进行了初步研究,结果表明:川芎菌核病菌在PSA和麦麸培养基上生长最好,在麦麸培养基上产菌核数量最多;菌落生长最适温度25℃,最适pH 7~8。菌丝能对各种形式的碳氮源加以利用,最适碳源为蔗糖,氮源为硝酸钠,胰蛋白胨产菌核最好,光照对菌丝生长影响较小。子囊孢子的萌发适温10~30℃p、H 7,菌核和子囊孢子的致死温度分别为70℃和50℃。不同地理来源的菌核萌发产盘率受到温度及覆土深度的影响。菌核和子囊孢子的致死温度分别为70℃和50℃。     

向日葵菌核病菌毒素的生产及其生物活性的测定

首次报道了向日葵核病菌[Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary]在离体，活体培养条件下均能产生草酸毒素，研究表明，在扫描电镜下，Ca^2 离子结晶可形成草酸钙晶体，且多分布在孔及表皮毛周围；该菌的培养滤波及粗毒素对种子萌发胚轴伸长和幼草生长等都有毒害或抑制作用。     

油菜菌核病菌致病性分化及弱毒现象

对湖南省常德、益阳两地的196个油菜菌核病菌株进行分离纯化,采用离体叶片法测定它们的致病力,发现两地区油菜菌核病菌的致病力明显分化。运用纤维素吸附法提取19个弱致病力菌的ds RNA,其中3个菌株含有ds RNA,菌株CY019菌丝稀疏,菌核量少。进一步利用尖端脱毒获得不含ds RNA的菌株CY019VF,通过活体茎秆接种,发现其致病力得到恢复,表明CY019致病力下降可能与其所携带的ds RNA病毒有关。     

5种除草剂对核盘菌生长的初步测定

在实验室条件下研究了不同浓度莠去津、百草枯、农达、2．4-D丁酯和灭草松对核盘菌菌丝生长、菌核萌发和菌核生长的影响。结果表明：5种化学除草剂均不抑制或促进核盘菌菌核的萌发；核盘菌在含有生产上推荐使用浓度的莠去津、农达和2．4-D丁酯的基本培养基上菌丝生长速度与对照相比差异不显著，而在含有推荐使用浓度的百草枯和灭草松的基本培养基上菌丝生长速度与对照相比受到极显著的抑制；推荐浓度的农达、莠去津和百草枯不影响菌核成熟，推荐浓度的2．4-D丁酯完全抑制菌核生长，而推荐浓度的灭草松部分抑制菌核生成。认为在杂草综合治理中，若使用核盘菌作为生物除草剂，可以配合使用农达和莠去津。     

不同杀菌剂对油菜菌核病菌的室内毒力测定

[目的]为防治油菜菌核病的有效药剂及复配剂的筛选、研发和应用提供试验依据。[方法]采用菌丝生长速率法,测定了速克灵、百菌清、世高、施灰乐、多菌灵和安泰森6种杀菌剂对油菜菌核病菌的室内毒力和EC50值。[结果]结果表明,速克灵、百菌清、世高、施灰乐、多菌灵和安泰森6种药剂的EC50值分别为0.472 6、1.799 4、1.867 4、6.935 3、88.191 8和119.579 9 mg/L。[结论]速克灵、百菌清、世高和施灰乐4种药剂对油菜菌核病菌均有显著的抑制作用,多菌灵和安泰森毒力的抑菌效果不佳,速克灵的室内毒力最强,可在生产中试验应用。