猪金属硫蛋白抗体的制备

以自猪肝提取的金属硫蛋白（MT）与牛备清白蛋白（BSA）偶联物为抗原,免疫昆明小鼠以制备多克隆抗体。结果表明：加强免疫间隔时间10d，MT首次免疫量保持在16-32μg／只，加强免疫时用量依次加倍，其免疫效果最佳，可使大部分小鼠抗血清效价达到1：16以上。随后．将这部分抗血清IgG提纯并达到电泳纯，经直接ELISA鉴定其确为猪MT的特异性抗体．表明可用于酶标记方法检测猪MT。     

金属硫蛋白在动物营养学上的应用

综述了金属硫蛋白（MT）在动物的健康、疾病以及生长性能等方面的重要作用。MT能参与畜禽体内微量元素Cu、Zn等的代谢，可利用MT来评价动物机体Zn的营养状态；MT具有抗应激的作用，MT有重金属解毒作用，在高铜、高锌日粮的促生长机理中发挥重要作用；MT促进动物机体生长发育，此外．MT在Se对动物机体的各种生理作用中发挥重要作用。     

金属硫蛋白在动物营养学上的应用

综述了金属硫蛋白(MT)在动物的健康、疾病以及生长性能等方面的重要作用。MT能参与畜禽体内微量元素Cu、Zn等的代谢,可利用MT来评价动物机体Zn的营养状态;MT具有抗应激的作用;MT有重金属解毒作用,在高铜、高锌日粮的促生长机理中发挥重要作用;MT促进动物机体生长发育;此外,MT在Se对动物机体的各种生理作用中发挥重要作用。     

金属硫蛋白应用研究进展

金属硫蛋白是一类低分子质量、高巯基含量、能结合金属离子具有独特性能的蛋白质。金属硫蛋白具有强烈的消除自由基的作用,可作为营养添加剂单独使用,或与GSH、VC、VE等配合使用,同时具有抑制脂质过氧化损伤、保护细胞、降低血液粘度、改善血液循环和提高机体免疫等多种生物功能。文章主要阐述了MT在吸收及动力学、医学、化妆品、保健食品中的应用研究。     

海州香薷金属硫蛋白(EhMT1)的原核表达和纯化及其多克隆抗体的制备

为研究耐铜植物海州香薷的金属硫蛋白(EhMT1)的结构与功能,运用分子生物学方法构建了pGEX-2T-EhMT1重组表达载体,经转化大肠杆菌BL21(DE3)后表达得到大小为33×103左右的融合蛋白GST-EhMT1,与预期结果一致.对融合蛋白诱导表达的温度、时间、IPTG诱导浓度等条件进行了优化,成功构建了能大量表达可溶性GST-EhMT1的优良原核表达体系.诱导表达的融合蛋白经GST-Sepharose亲和层析纯化后,每升菌液获得的可溶性融合蛋白高达70 mg.用纯化的融合蛋白免疫新西兰雄兔,制备的抗血清经间接ELISA检测到较高的多克隆抗体效价.蛋白质印迹结果显示,纯化的蛋白质与兔抗血清可以特异性结合.     

金属硫蛋白的检测方法及其应用

金属硫蛋白(MT)是一种普遍存在、富含金属和半胱氨酸的低分子量蛋白质,主要包括Ag、Au、Bi、Cd、Hg、Zn等硫蛋白,MT具有在体内可被金属和其他因素诱导合成的生物学特性。ELISA以其灵敏度高、特异性强且测定相对迅速、方便、无需特殊昂贵的仪器设备、无放射性同位素的污染等特点成为MT定量检测的理想方法。MT在与金属有关的动物机体的生理学研究、某些微量元素营养性缺乏症的诊断、治疗以及保护环境等方面起着重要作用,随着对MT研究的日益深入,不断对ELISA方法的改进,利用ELISA检测MT有着广阔的前景。     

柽柳金属硫蛋白基因的克隆及分析

应用生物信息学技术从柽柳cDNA文库中分离出了一种金属硫蛋白全长cDNA序列,去除PolyA后该基因全长517bp。其中,5′非翻译区31bp,3′非翻译区267bp,开放读码框(ORF)长219bp,编码72个氨基酸,含13个半胱氨酸Cys,分布在蛋白质的N端和C端,呈CXC形式排列,基因编码蛋白的分子量为7.1kD,等电点为4.71。疏水性分析表明,蛋白的30～50个氨基酸之间有较强的疏水性,经过Pfam15.0(St.Louis(USA))分析证明,为金属硫蛋白家族基因。金属硫蛋白基因参与了植物的发育、胚胎发生、抵抗逆境胁迫等多种生理过程,是一种重要的功能基因。此基因的Genbank登录号为AY620987(基因),AAT39518(蛋白)。     

金属硫蛋白及其生物学功能

金属硫蛋白能够清除体内自由基、缓解动物应激、调控体内微量元素代谢及重金属解毒、调控机体发育。文章介绍了金属硫蛋白的理化性质、主要功能及其应用。     

植物金属硫蛋白的提取及检测

在综合动物金属硫蛋白的提取方法上,摸索了一种用于玉米金属硫蛋白的提取方法.以玉米幼苗叶片为材料,通过本研究所述方法提取了玉米金属硫蛋白(metallothionein,MT)的粗提液,该粗提液的特征吸收峰在290 nm处,且经脱金属处理后其290 nm处特征吸收峰明显降低,经SDS-PAGB检测,在分子量14 Kda附近有单一条带,表明所获粗提液中含有玉米金属硫蛋白.     

兔肝金属硫蛋白提取工艺研究

研究提取液Tris-HCl的浓度、pH、加热温度和时间对兔肝金属硫蛋白提取的影响,并用正交试验优选出最适提取条件,为兔肝金属硫蛋白的研究提供一种新的提取技术。结果表明,Tris-HCl的浓度对金属硫蛋白的提取效果影响最大,pH和加热时间次之,温度对其影响最小。金属硫蛋白的合适提取条件为Tris-HCl的浓度0.01mol/L,pH 8.2,热处理温度80℃,加热时间8min。     

植酸酶鼠源多克隆抗血清的制备

 【目的】制备灵敏性高、特异性强的植酸酶多克隆抗体。【方法】将初步纯化的麸皮植酸酶蛋白经凝胶电泳鉴定纯度后,按50 μg蛋白/只?次免疫Balb/C小鼠,共免疫4次,每次间隔4周,最后一次免疫60 d后,摘眼球取血,制备抗血清。利用间接ELISA方法测定抗血清效价,间接竞争ELISA测定敏感性和特异性。【结果】凝胶电泳的麸皮植酸酶只有一个条带;血清植酸酶抗体效价达1×104;半数抑制浓度达148.87 ng?mL-1。此抗血清对市售的普通微生物植酸酶、市售包被微生物植酸酶及浓缩的微生物植酸酶的半数抑制浓度分别达到165.59 、163.80和166.51 ng?mL-1,交叉反应率分别为89.85%、90.88%和89.41%。100℃煮沸5 min后的麸皮、市售普通微生物植酸酶、市售包被微生物植酸酶及浓缩酶半数抑制浓度分别为2 871.34、5 208.85、7 914.12和5 804.24 ng?mL-1,交叉反应率分别为5.18%、2.86%、1.88%及2.56%。【结论】制备出了具有高效价、高灵敏度和特异性的鼠源植酸酶多克隆抗体,为植酸酶单克隆抗体制备及植酸酶ELISA检测试剂盒研制奠定了基础。     

Cd Pb单一及复合污染沉积物对铜锈环棱螺肝胰脏SOD和MT的影响

以实验室培养的铜锈环棱螺(Bellamya aeruginosa)为测试生物,采用28d沉积物生物毒性测试研究了Cd、Pb单一及复合污染沉积物对铜锈环棱螺肝胰脏超氧化物歧化酶(SOD)活性和金属硫蛋白(MT)含量的影响,并分析了Cd和Pb对SOD和MT的联合作用特征。结果表明,Cd、Pb单一污染沉积物均对肝胰脏SOD活性具有显著的促进作用,且SOD活性随胁迫浓度的增加而升高,中、高浓度Pb胁迫下的SOD活性显著高于相应浓度的Cd胁迫。低浓度Cd、Pb单一胁迫对MT没有影响,中、高浓度Cd胁迫引起MT水平显著升高,而中、高浓度Pb胁迫导致MT水平显著下降。低、中和高浓度Cd-Pb复合胁迫均对肝胰脏SOD活性具有显著的促进作用,且SOD活性随胁迫浓度的增加而升高,但低于Cd、Pb单一胁迫下的SOD活性。低浓度Cd-Pb联合胁迫对MT没有影响,中、高浓度Cd-Pb联合胁迫导致MT含量显著升高。SOD对Cd-Pb联合胁迫的敏感性高于MT。析因分析表明,Cd-Pb对SOD的联合作用表现为拮抗作用;中、高浓度Cd-Pb对MT的联合作用表现为相加作用,其交互作用机理有待进一步研究。     

T2毒素人工抗原的合成及鼠源多克隆抗血清的制备

合成并鉴定T 2毒素人工抗原,通过动物免疫制备敏感性高、特异性好的鼠源T 2毒素多克隆抗血清。采用琥珀酸酐法将T 2毒素活化为T 2HS,T 2HS在碳二亚胺(EDC)作用下与牛血清白蛋白(BSA)或卵清白蛋白(OVA)偶联,合成免疫抗原T 2 BSA和检测抗原T 2OVA,经鉴定后,分别按30、50μg/只的剂量免疫BALB/c小鼠,共免疫4次,每次间隔4周,最后1次免疫10d后,断尾采血,制备多抗血清。利用间接ELISA方法测定抗血清效价,间接竞争ELISA测定其敏感性和特异性。结果表明,免疫的6只小鼠效价均达到了1∶104以上,2号小鼠多抗血清的敏感性最好,其半数抑制质量浓度(IC50)为324ng/mL,且具有良好的特异性。成功合成了T 2毒素人工抗原,制备了多克隆抗体血清,为T 2毒素单克隆抗体的制备及其免疫学快速检测方法的建立奠定了基础。     

利用原核表达的衣壳蛋白制备马铃薯x病毒的抗血清

本研究构建了含马铃薯x病毒（pvx）衣壳蛋白（cp）基因的原核表达载体,利用在大肠杆菌内表达的马铃薯x病毒cp制备了效价为1∶1 600的抗血清。该血清可用于马铃薯、番茄、辣椒和烟草等作物携带pvx情况的检测。     

盐酸金霉素人工抗原的合成及鼠源多抗血清的制备

采用碳二亚胺法将金霉素(chlortetracyline,CTC)偶联到载体蛋白BSA(牛血清白蛋白)和OVA(鸡卵清蛋白)上,形成免疫原BSA-CTC与包被原OVA-CTC。通过紫外分光光度法和聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行抗原鉴定,用间接ELISA测定多抗血清(pAb)效价,阻断ELISA鉴定其敏感性。结果表明,在UV下出现了明显特征峰,BSA-CTC的峰与BSA、CTC相比均发生改变,表明半抗原与载体成功偶联。共免疫了5只小鼠,pAb效价均达到1×10-3,其中3号小鼠多抗血清抑制效价最低,IC50(半数抑制质量浓度)为71.47ng/mL。由此得出,获得了高效价、强特异的盐酸金霉素多抗血清,为盐酸金霉素单抗的制备奠定了基础。     

水稻新型MT 基因的鉴定及其基因家族分子特征分析

[目的]探讨水稻MT基因家族各成员在基因结构上的差异及相互间的进化关系。[方法]从经重金属处理的水稻幼苗中分离到3个新的植物MT,对其进行RT-PcR和Northem杂交分析以及水稻和拟南芥MT基因家族的序列比对和进化分析。[结果]RT-PCR和Northern杂交分析表明,水稻中3个MT基因的表达均受重金属的诱导,在幼苗根部进行特异性表达。由水稻和拟南芥biT基因家族的序列比对提出植物MT的新分类方式。水稻I类OsMT基因家族的所有10个成员,定位到6条染色体上。同一类型的OsMT有高度的氨基酸序列保守性,相似的Cys排列方式。新发现的3个OsMT家族在单子叶植物水稻中独有,属4型MT。[结论]水稻和拟南芥biT基因家族进化分析显示,植物MT至少发生在种子植物出现前,而4型MT可能发生于单子叶植物和双子叶植物分离后。     

羊初乳免疫球蛋白IgG稳定性的研究

研究了酸、碱、胃蛋白酶、胰蛋白酶对羊初乳中免疫球蛋白IgG稳定性的影响。结果表明,IgG在pH 值为5．0～10．0时十分稳定,在pH值低于5．0的条件下,随pH值降低,变性率急剧上升;正交试验结果表明,胃蛋白酶对IgG的影响因素为pH值>作用时间>酶液浓度;最佳条件为pH 4．0,作用时间1 h,胃蛋白酶的质量浓度为0．5 mg／mL;胰蛋白酶对IgG活性的影响相对较小。     

小西葫芦花叶病毒(ZYMV)抗血清制备及检测技术研究

从小西葫芦黄化花叶病毒(ZYMV)免疫的母鸡蛋卵黄和兔抗血清中分别提取免疫球蛋白IgY和IgG,用多种血清学方法进行检测。结果表明,免疫鸡和兔25d后,鸡蛋卵黄IgY和兔抗血清的效价分别达到1/64和1/512。在琼脂扩散试验中,当抗体稀释28倍时,与抗原反应无明显沉淀线。在胶乳凝集试验中,抗体稀释210倍时,与抗原反应无明显凝集物。ELISA法以辣根过氧化酶标记抗体IgY和IgG,用双抗夹心法成功地检测出了ZYMV,当抗体稀释106倍时,与抗原反应仍呈阳性。免疫电镜方法检测ZYMV,较一般血清学方法可多捕捉50倍的病毒颗粒。     

拟南芥2-甲基-6-叶绿基-1,4-苯醌甲基转移酶启动子在转基因烟草中的表达特性分析

通过对报告基因GUS产物的分析进行了拟南芥2-甲基-6-叶绿基-1,4-苯醌甲基转移酶(MPBQMT)启动子在转基因烟草中的表达特性的初步研究。构建含该启动子和GUS报告基因的植物表达载体,通过农杆菌介导转化烟草,对转基因烟草进行GUS组织化学染色和GUS荧光定量分析该启动子表达特性。GUS在转基因烟草的根和种子中基本不表达,茎上有一定表达,叶上表达量最高,约是茎的4.7～10.9倍。结果表明MPBQMT基因启动子主要在烟草绿色组织中特异性高表达。