转基因八棱海棠与苹果品种亲和性的微嫁接早期鉴定

用微嫁接法鉴定嫁接亲和性的结果表明,不同培养基和培养方法对嫁接成活率和生根率有较大影响,生根 愈伤同步的方法可以同时获得较高的嫁接成活率和生根率。转番茄铁载体蛋白基因八棱海棠(Malus micromalus)与 苹果(Malus pumila)品种富士,嘎拉以及新红星嫁接成活率分别为93.33％,92.86％,73.34％。嫁接后15 d左右,接穗 新叶开始生长;嫁接后2个月,嫁接苗移栽成活率分别为73.07％,73.91％和55％;移栽后3个月,3种嫁接苗的茎杆 粗度均匀,无大小脚现象。初步结果显示,转基因八棱海棠与富士、嘎拉均具良好的嫁接亲和性,而与新红星的嫁接 亲和性稍差。     

苹果无病毒砧穗组合苗木矮化栽培表现初报

以5种苹果无病毒砧穗组合苗木进行矮化栽培,采取大规格苗木密植,行内起垄、行间生草、柱形整形、乔化砧穗树和矮化中间砧穗树进行化学控制等措施,比较各砧穗组合树的生长结果表现。结果表明,乔化砧穗树烟富3／海棠、矮化中间砧穗树烟富3／M26／海棠、烟富3／M9／海棠3种砧穗组合树施用促花剂Pt2011后均树体矮化、早果丰产。矮化早果丰产效果以矮化自根砧穗树烟富3／M9、红富士／f1337好于矮化中间砧穗树烟富3／M26／海棠、烟富3／M9／海棠,更好于乔化砧穗树烟富3／海棠。5种砧穗组合树均可进行宽行密植,简化栽培,高效生产。以矮化自根砧穗树栽植建因为首选。     

影响转基因苹果试管微嫁接苗成活的因子

以转基因苹果组培苗嘎拉、王林、富士和乔纳金为试材,研究了影响转基因苹果试管微嫁接苗成活的几个因素。结果表明,以继代培养30d左右、生长健壮的组培苗嫁接成活率较高。适当提高嫁接苗所在培养基中BA质量浓度有利于嫁接成活率的提高,其中以MS+BA1.0mg/L+NAA0.05mg/L培养基中嫁接成活率最高。接穗以带2～4片叶片为宜。同时研究发现,不同转基因品种对嫁接成活率影响不显著。     

干旱胁迫下不同中间砧嫁接苹果苗的导水特性

 以基砧为八棱海棠的4 种不同中间砧嫁接的苹果幼苗长富2 号/八棱海棠、长富2 号/M9、长 富2 号/M26、长富2 号/SH6 为试验材料,研究干旱胁迫对其导水特性的影响。结果表明：在干旱胁迫下, 4 种中间砧木嫁接苗的整体、冠层、茎干、根系叶比导水率均有减小,各器官叶比导水率基本趋势是乔 化 > 半矮化 > 矮化,其中矮化中间砧的变化幅度最大,乔化中间砧的变化最小。中间砧嫁接口导水阻 力表现为矮化砧比半矮化、乔化砧高,在正常水分条件下,八棱海棠、M9、M26 和SH6 中间砧嫁接区域 导水阻力在植株总体导水阻力中所占的比率分别为4.07%、6.60%、4.97%和5.11%,当受到干旱胁迫后, 嫁接区域所占比率均有不同程度减小。由于矮化苗有效导水率长期低下,根系吸水和运输水分的能力下 降,导致地上部分水分供给减少,从而影响树体的生长。     

转基因苹果组培苗铁蛋白基因在转录水平上的表达

以转菜豆铁蛋白基因的嘎拉苹果4个株系的试管苗为材料,通过定量RT-PCR的方法检测外源和内源铁蛋白基因的转录表达量,结果表明苹果转基因植株外源铁蛋白基因的转录表达量与其插入的拷贝数没有明显的关系,可能受插入位点的影响;同时在铁诱导的条件下,外源铁蛋白基因与内源的铁蛋白基因的转录表达特性一致,转录水平受铁的调控,随着铁诱导时间的延长,其mRNA表达水平逐渐增加。对转基因植株的根、茎、叶3个部位铁蛋白基因的转录表达量研究结果表明,外源菜豆铁蛋白基因与内源苹果铁蛋白基因的mRNA含量均在根部最高,茎次之,叶片最低。     

不同嫁接方式对苹果矮化中间砧苗成苗率的影响

以岳华/GM256、岳阳红/GM256、望山红/SH40 3个砧穗组合的矮化中间砧苗为试材,研究分段嫁接法与二重枝接法对其成苗率的影响。结果表明:以3年生山定子为基砧的矮化中间砧苗,采用二重枝接法的苗木成活率、一级苗率、一级苗高度均高于分段嫁接法;以2年生山定子为基砧的矮化中间砧苗,各砧穗组合的苗木成活率、一级苗率、一级苗高度、一级苗粗度等指标表现不同,但二重枝接法在选择品种及砧穗组合方面较分段嫁接法有更大的灵活性。因此,以2~3年生山定子为基砧的苹果矮化中间砧苗,均宜采用二重枝接法嫁接。     

3种嫁接方法对‘寒富’苹果矮化中间砧苗生长的影响

调查了采用常规嫁接法、二重枝接嫁接法和"两头忙"嫁接法繁育的‘寒富’苹果矮化中间砧苗木情况。结果表明,二重枝接嫁接的‘寒富’矮化中间砧苗高度、粗度和一级苗比率最高。     

乙肝表面抗原大蛋白(S1S2S)基因在转基因苹果中表达

构建了乙肝表面抗原大蛋白基因PRS-S1S2S的表达载体pYF9616,通过根癌农杆菌介导法首次将该基因导入苹果品种红爱佳中,得到了抗卡那霉素的GUS阳性转化植株。随机取3株GUS染色阳性的转基因苹果植株经PCR扩增及RT-PCR检测证实该基因已整合入转基因苹果的基因组,并在转录水平得到了表达,ELISA检测证明在苹果植株中正确表达了乙肝表面抗原大蛋白基因。     

转基因防褐变苹果有望在美国上市

澳大利亚科学家利用转基因技术培育出一种具有抗氧化性能的苹果。以前的苹果被切开后很快就会变成棕褐色，很不美观，令人食欲大减，但有了这种转基因苹果后，苹果切开后果肉褐变的现象将一去不复返。 这种苹果目前正在美国试验田里试种，等待美国农业部的批准，也开始公开接受公众评价。这种苹果有望获批。     

转基因苹果研究进展

十多年来,转基因技术以其独特的魅力在苹果上得到了迅速发展。目前,农杆菌介导法是苹果上应用的主要转化方法,叶片再生不定芽途径是被广泛应用的受体系统。影响这一受体系统的主要因素有基因型、外植体的来源、叶片发育阶段及生理年龄、培养条件以及抗生素等。而菌株的类型、侵染时间、共培养的时间和条件、酚类物质及转化植株的选择方式等则影响基因的转化。已有多种标记基因和目的基因转入苹果中,且遗传分析表明外源基因能够稳定遗传。但依然存在转化效率不高、外源基因表达强度不够、可转化的目的基因有限及对转化植株的选择不够重视等诸多问题。综合有关文献对上述问题进行了讨论并对转基因苹果的前景进行了展望。     

抗菌肽MB39基因导入‘皇家嘎啦’苹果及其四倍体植株的培育

 采用农杆菌介导法, 将抗菌肽MB₃₉基因转入‘皇家嘎啦’苹果, 获得了7 个转基因株系。通过秋水仙素诱变染色体组工程育种技术, 由转化体叶片获得了20 个四倍体植株。经PCR 检测和Southern Blotting 杂交证明, 抗菌肽MB₃₉基因已经整合到皇家嘎啦苹果的染色体组中。转基因株系TR21、TR23 提高了对火疫病的抗性。采用流式细胞技术( Flow Cytometry) 确定植株为四倍体。     

苹果组织培养再生技术研究进展

苹果组织培养再生技术已取得了较大的进展。从器官、组织、原生质体及遗传转化植株的获得等方面综述了有关方面的研究进展,其中着重介绍了不同水平上植株再生研究的技术方法。     

苹果离体茎尖超低温保存方法的比较

 以苹果离体茎尖为试材，对4种超低温保存方法(两步降温法、玻璃化法、包埋干燥法和小滴冰冻法)从操作程序、存活率、再生率及恢复生长速度等方面进行比较，确定包埋干燥法为最佳保存方法。     

油菜种子特异启动子Napin控制外源EGFP基因在芥菜中的表达

为研究油菜种子特异启动子Napin在芥菜中的表达特性,以增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因为报告基因,将其置于来自油菜的Napin启动子下游,并经根癌农杆菌介导转入芥菜。对转基因芥菜种子及其T1代幼苗的EGFP检测表明：随着转基因植株的种子逐渐发育成熟,EGFP基因在种皮、子叶、胚根中的表达强度逐渐增强|在转基因种子发芽过程中,幼苗根、子叶、下胚轴中EGFP的表达逐渐降低,直至不能检出绿色荧光。结果表明Napin启动子驱动的外源基因表达在芥菜中表现出较为严格的种子表达特异性。     

苹果离体叶片培养直接体细胞胚胎发生研究

在ＭＳ＋ＢＡ１０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ５０ｍｇ／Ｌ＋２，４＿Ｄ０＼＾５ｍｇ／Ｌ＋蔗糖２０ｇ／Ｌ的固体培养基上，苹果品种嗄拉试管苗叶片经７天暗培养产生胚性细胞。将具有胚性细胞的叶片转入ＭＳ＋ＢＡ１０ｍｇ／Ｌ＋蔗糖２０ｇ／Ｌ的培养基上暗培养４０天，６５％的叶片直接发生体细胞胚，体细胞胚在同种培养基上萌发，长成小植株。     

人乳铁蛋白基因在番茄中的优化表达

 采用农杆菌介导法, 将表达载体pB I121LF中的人乳铁蛋白(LF) 基因(根据植物偏好密码子人工合成) 导入番茄, 经卡那霉素筛选, 获得了再生植株。经PCR和Southern鉴定, 证明部分番茄基因组中已经整合了lf基因。Western检测表明, 基因在果实中得到了表达。     

提高苹果基因转化效率的研究

采用根瘤农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）强株系ＥＨＡ１０５（ｐ３５ｓＧＵＳ－ｉｎｔｒｏｎ）研究了影响‘皇家嘎拉’苹果（Ｍａｉｎｓ ｄｏｍｅｓｔｉｃａ Ｂｏｒｋｈ．）外植体的β-葡萄糖醛酸酶（ＧＵＳ）基因的瞬时、稳定表达水平和转基因植株的再生。证明在培养基生长素（ＩＢＡ、ＮＡＡ）存在的条件下,外植体的ＧＵＳ基因的瞬时表达水平提高了３－４倍,而共培养两周后稳定表达水平提高２倍以上,产生９．８个ＧＵＳ愈伤组织表达区域。白化处理促进外植体的基因转化,白化处理的新梢顶端第一节间外植体ＧＵＳ表达区域比常用的叶片外植体高４倍。在生长素存在的条件下 ２％外植体获得了转基因植株。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ　ＢｌｏｔＤＮＡ杂交和组织化学染色分析证明ＧＵＳ基因已整合到苹果的染色体上,并得以表达。     

苹果apetala2同源基因的克隆和转化研究

 利用同源克隆的方法从苹果的花芽中分离出apetala2的同源基因MAP2。MAP2全长2 212 bp,编码549个氨基酸。分析表明, MAP2具有AP2家族典型的结构域, 是苹果的AP2同源基因。Southern杂交结果表明, MAP2在基因组中以低拷贝形式存在。采用RT-PCR的方法分析MAP2在不同组织中的表达,结果显示, MAP2在苹果营养组织、花芽以及不同花器官中均有表达, 与拟南芥的AP2、矮牵牛的PhAP2A的表达模式一致。为确定MAP2在苹果中的生物学功能, 构建了35S∶MAP2正义表达载体, 并对‘皇家嘎啦’苹果进行了农杆菌介导的遗传转化。