蜂蜜中抗菌素的检验

检验抗菌素(链霉素、四环素、新霉素和红霉素),要根据琼脂扩散原理(微生物抑制法)使用不同的试验菌、培养基和缓冲液来测定是否有抗菌素存在。 1.检验链霉素需: 枯草溶菌(Bac.subtilis)的芽孢,菌株6633。培养基:胰腺水解肉汤(含氨基氮、磷酸二氢钠和琼脂)pH7.8～8.0。缓冲液:1/15M磷酸盐溶液,pH7.8～8(由11.612克Na_2HPO_4加9.03克NaH_2—PO_4配制)。也可用钾盐。每1份分别溶于     

脂肪酶产生菌的筛选、诱变及产酶条件的研究

从长春市油脂厂采集的土壤样品中分离到1株脂肪酶活力较高的白地霉1522(其发酵液酶活力为35U/mL)。以此为出发菌株,经紫外线、氯化锂、盐酸羟胺、亚硝基胍等诱变筛选后,获得1株高活力脂肪酶产生菌N79(其发酵液酶活力达80U/mL)。对诱变株N79最适培养条件的研究表明,其最适培养基组成为:蛋白胨4%,山梨醇0.75%,橄榄油0.5%,MgSO4·7H2O 0.1%;产酶最适发酵条件是,培养液起始pH为6.0～6.5,发酵温度为26～30℃,通气量为每250mL三角烧瓶中盛培养液30mL,发醇时间为32～36h。在量适培养条件下,其发酵液酶活力可达到105-115U/mL。白地霉N79的发酵液经硫酸铵盐析制得脂肪酶粗制品,它在聚乙烯醇橄榄油乳化液系统中,水解橄榄油的最适pH为7.8,最适温度为42℃,在pH4-8、4℃下存放24h及pH7.5、40℃下保温15min,酶活力不变。     

高效液相色谱法检测鸡血浆中IgY含量

文章建立了高效液相色谱(HPLC)检测鸡血浆中免疫球蛋白(IgY)含量的方法,检测用柱为蛋白G柱。通过优化缓冲液流速和调节离子强度,获得最佳参数为:结合缓冲液0.02M、pH7.0PBS(流速0.2mL/min);洗脱缓冲液0.1M、pH2.7Gly-HCl(流速0.4mL/min)。     

蟹源地衣芽孢杆菌培养条件的优化

以牛肉膏蛋白胨培养基为初始培养基,探讨了不同培养时间、初始pH值、温度、盐度(NaCl浓度)和转速对中华绒螯蟹源地衣芽孢杆菌ESB3生长的影响。结果表明:菌株ESB3产最大活菌数的培养条件为培养时间20h,初始pH为7.8,温度为30℃左右,盐度为1.5%(m/V),转速为190r/min。采用单因子试验和正交试验优化了种子培养基的组成,结果表明,最佳种子培养基:可溶性淀粉(2%)(m/V)、胰蛋白胨(2%)(m/V)、K2HPO4(0.3%)(m/V),此条件下菌株ESB3活菌数达11.09×108CFU/mL。     

枯草芽孢杆菌诱变株发酵羽毛工艺条件的研究

通过对枯草芽孢杆菌紫外线和亚硝酸钠复合诱变菌株FUN30.2的发酵培养基及发酵条件的优化,得到最优的发酵培养基成分为:羽毛粉5.5%,青贮玉米秸秆粉0.8%,K+浓度0.018mol/L,Mg2+浓度0.065mol/L,Ca2+浓度0.072mol/L,Fe2+浓度0.010mol/L,Na+浓度0.088mol/L。最优的发酵条件为:培养温度33℃,培养时间72h,摇床转速170r/min,接种量6%,装液量100mL/500mL,菌体生长适宜的培养基初始pH值是7.0,菌体产酶的最适宜pH值为7.5～8.0。60h菌体产酶活力最高达1.267U/mL;发酵时间72h,羽毛降解率为69.61%;发酵液的氨基酸含量达22.66mg/mL。     

恩拉霉素预混剂含量测定方法的改进

对《进口兽药质量标准》中收载的恩拉霉素预混剂的含量测定方法进行了适当的改进，将pH4．0的醋酸盐缓冲液改为pH7．8的磷酸盐缓冲液，将贮备液浓度由1000单位／mL降低为200单位／mL，提取时间延长至2—3h，优化了检测条件，能充分提取样品中的恩拉霉素，使检测数据更准确可靠。     

好食脉孢菌植酸酶的固态发酵条件优化

试验以玉米浆和麸皮为原料经好食脉孢菌固态发酵生产植酸酶,以植酸酶活力为指标,经单因素和正交试验对培养基和培养条件进行优化。结果显示:培养基由玉米浆(浓度25 g/L) 0.75 mL、麸皮8 g和蒸馏水21.25 mL组成,培养基初始pH值5.5、接种量10%(v/m)、28℃培养72 h条件下,植酸酶活力为79.49 U/g,较优化(26.24 U/g)前提高3.03倍。研究表明,通过优化有效提高好食脉孢霉发酵玉米浆和麸皮产植酸酶的产量。     

一株枯草芽孢杆菌产抗菌肽培养基筛选及发酵工艺优化的研究

试验旨在对一株产抗菌肽枯草芽孢杆菌BL0006的发酵培养基和发酵条件进行优化,以提高发酵液中抗菌肽的效价。首先通过单因子试验筛选出培养基的最适碳源、氮源与无机盐分别为葡萄糖、蛋白胨和K_2HPO_4;在此基础上采用最陡爬坡路径逼近最大响应区域,再利用Box-Behnken试验设计及响应面分析法得到培养基最佳配方:通过摇瓶单因素试验对发酵条件、温度、接种量、转速进行了优化,优化后的发酵培养基为葡萄糖47.7 g/L、蛋白胨29.0 g/L、K_2HPO_4 3.3 g/L,摇瓶发酵工艺为接种量30 mL/L、初始pH 7.5、摇床转速220 r/min、培养温度37℃。优化后抗菌肽的效价提高到了4.25×10~4 U/mL,是优化前的3.51倍。综合试验结果,本研究筛选的培养基和优化后的发酵工艺可达到高产、降低成本、缩短发酵时间的效果。     

拟康氏木霉固态发酵产纤维素酶系的研究

以稻草秸秆为主要原料,利用拟康氏木霉3.3002(Trichoderma pseudokoningii 3.3002)固态发酵生产纤维素酶,对培养条件进行了优化,并系统地测定了各种纤维素酶的酶活.结果表明,最优产酶培养基组成为:稻草秸秆和麸皮的混合比例为4:1,最佳氮源为2.5%(NH4)2SO4,最佳发酵时间120 h,培养温度35℃,接种量15%,pH 5.0,培养基含水率50%.在此条件下,该菌株产纤维素酶系中羧甲基纤维素酶(Cx)酶活力达4700 U/mL,葡聚糖外切酶(Cb)酶活力达3440 U/mL,葡萄糖内切酶(C1)酶活力达到1620 U/mL,滤纸酶(FPA)酶活力达到1935 U/mL.     

水浴法测定饲用植酸酶耐热性方法的研究

试验研究不同条件对植酸酶水浴耐热性的影响。分别稀释4种植酸酶酶活力40、20、10、2 U/mL,测定80℃和85℃水浴5 min的耐热性。结果表明,稳定性强的植酸酶受酶浓度的影响较小,稳定性较差的植酸酶受影响较大,当处理液酶活力低时,耐热性结果较高。取3种植酸酶样品,分别使用缓冲液Ⅰ、缓冲液Ⅱ、水为耐温稀释缓冲液,测定85℃水浴5 min耐热性,结果表明:缓冲液Ⅰ作为稀释缓冲液测定的耐热性结果最高,其次是缓冲液Ⅱ,水作为稀释缓冲液时测定的耐热性结果最低。取3种植酸酶样品,分别在pH值5.5和5.0缓冲体系中测定85℃水浴5 min耐热性,结果表明,植酸酶在与最适pH值相近的条件下进行耐热性处理,测定的耐热性结果相对较高。研究表明,本试验的3种条件对水浴法测定植酸酶耐热性的结果均有影响,制定检测标准时需要明确测定条件。     

一株枯草芽孢杆菌产抗菌肽培养基筛选及发酵工艺优化的研究

试验旨在对一株产抗菌肽枯草芽孢杆菌BL0006的发酵培养基和发酵条件进行优化,以提高发酵液中抗菌肽的效价。首先通过单因子试验筛选出培养基的最适碳源、氮源与无机盐分别为葡萄糖、蛋白胨和K_2HPO_4;在此基础上采用最陡爬坡路径逼近最大响应区域,再利用Box-Behnken试验设计及响应面分析法得到培养基最佳配方:通过摇瓶单因素试验对发酵条件、温度、接种量、转速进行了优化,优化后的发酵培养基为葡萄糖47.7 g/L、蛋白胨29.0 g/L、K_2HPO_4 3.3 g/L,摇瓶发酵工艺为接种量30 mL/L、初始pH 7.5、摇床转速220 r/min、培养温度37℃。优化后抗菌肽的效价提高到了4.25×10~4 U/mL,是优化前的3.51倍。综合试验结果,本研究筛选的培养基和优化后的发酵工艺可达到高产、降低成本、缩短发酵时间的效果。     

1株产碱性木聚糖酶的芽胞杆菌的分离鉴定及其相关研究

分离到1株产碱性木聚糖酶的革兰氏阳性菌株,通过菌落形态及16srDNA序列同源性分析,确定该菌株为短小芽孢杆菌。生长条件和产酶条件研究结果显示,最适温度和pH分别为50℃和pH8·0。培养基优化试验显示在有机和无机混合氮源条件下(NH4NO30·57%;牛肉膏1%;蛋白胨0·5%;酵母提取物0·5%;木聚糖0·5%)木聚糖酶产量达到最高(180U/mL)。酶学试验表明最适反应条件为50℃,pH8~9;在pH9的条件下,孵育120min时仍具有75%的活力,表明该酶具有较强的碱耐受性。     

产β-甘露聚糖酶菌株的筛选及产酶条件优化的研究

采用筛选培养基透明圈法从土壤中筛选到1株高效分泌β-甘露聚糖酶的细菌,经形态和生理生物化学鉴定,确定为枯草芽孢杆菌.试验对该菌株的液体摇瓶产酶发酵条件进行单因素的优化,优化后的产酶发酵条件:碳源为2.5％魔芋精粉,氮源为0.5％硝酸钠,在250 mL三角瓶中装料量为30 mL,起始pH为7.3 ～7.5,接入1 mL种龄为20 h的种子液,190 r/min,35℃下培养48 h.在此条件下,β-甘露聚糖酶酶活可达375 U/mL.     

高效毛细管电泳法测定兽用注射用青霉素钾的含量

研究测定兽用注射用青霉素钾含量的高效毛细管电泳方法,优化了高效毛细管电泳法检测青霉素的电泳条件,缓冲液为pH7.8（6mol/LHCL调节）的30mmol/L硼砂溶液,在分离电压为18kV、温度为25℃条件下青霉素峰形尖锐,浓度与峰面积在40-200μg/mL范围内线性良好,相关系数为0.9971,回收率范围为99.3%-101.5%,日内及日间变异系数均小于4%。     

好食脉孢霉液态发酵产木聚糖酶的研究

试验以豆渣和麸皮为主要原料,研究了好食脉孢霉菌株产木聚糖酶的液态发酵条件。以木聚糖酶的催化活力为指标,确定液态发酵培养基由麸皮、豆渣和蛋白胨组成,初始pH值5.0、培养温度28℃、摇床转速150 r/min,培养72 h后木聚糖酶活力可达到476 U/ml。     

硅藻土共固定化淀粉酶和糖化酶的研究

以糖化酶和α-淀粉酶为双酶体系、硅藻土为载体,用吸附法同时固定了这两种酶,得到的最适的共固定化条件为硅藻土(g):糖化酶(U):淀粉酶(U)=1:100:160,pH值4.5～5.0,温度5～15℃左右,缓冲液为柠檬酸缓冲液。共固定化酶的性质为:最适pH值为5.0;最适温度为55℃;米氏常数Km=16.830mg/ml;最大反应速率Vmax=1.500mg(/ml·min),其稳定性良好。     

好食脉孢菌固体发酵产植酸酶条件的优化

为了扩大植酸酶的来源、优化植酸酶的廉价生产方法,试验以醋糟为培养基的主要成分,以植酸酶活性为测定指标,通过单因素和正交试验确定好食脉孢菌固体发酵产植酸酶的培养基组成和培养条件。结果表明:250 mL三角瓶装干醋糟5 g,添加8%麸皮,料水比为1∶3,培养基初始pH值为5.5,接种量为每克干物质基础接入2×10~5个孢子,培养温度为28℃,培养时间为72 h,优化后植酸酶活性达到127.13 U/g,较优化前(47.59 U/g)提高了约3倍。     

大熊猫粪便中纤维素降解菌的筛选及其产酶条件的优化

本试验旨在从大熊猫粪便中筛选出能够降解纤维素的菌株,并对该菌株进行鉴定和产酶条件的优化。利用羧甲基纤维素钠(CMC-Na)为唯一碳源的培养基,结合碘液染色法、滤纸分解试验和纤维素酶活力测定,从大熊猫粪便中筛选得到1株纤维素降解菌DL。结合形态学观察、生理生化特征和16S rDNA基因序列同源性分析,初步鉴定该菌株为Paenibacillus cookii LZ033,它是一种产芽孢且好氧的革兰氏阳性菌。为确定菌株DL的最佳产酶条件,选取培养基初始pH、培养温度、摇床转速以及装液量4个因素,在单因素试验结果的基础上,利用正交试验,确定菌株DL的最佳产酶条件为培养基初始pH为6、培养温度为35℃、摇床转速为125 r/min、250 mL三角瓶装液量为100 mL,在此条件下纤维素酶活力(以滤纸酶活力表示)为102.3 U/mL。     

产果胶酶枯草芽孢杆菌的鉴定、发酵条件优化及产物酶学性质的研究

以果胶为唯一碳源筛选到1株产果胶酶的菌株JLSP-13,通过菌落形态观察、生理生化指标试验和16SrDNA保守序列分析,鉴定JLSP-13为枯草芽孢杆菌,命名为Bacillus subtilis JLSP-13。采用响应面法(RSM)优化其产酶条件,并系统研究产物酶学性质。结果表明:B.subtilis JLSP-13的最佳发酵时间为25.02 h,添加可溶性淀粉和果胶的最佳浓度分为0.61%和0.042%,B.subtilis JLSP-13果胶酶(BpgA)活性最大预测值达38.8 U/mL,验证值为37.6 U/mL,是基础培养基的2.6倍。BpgA的最适温度为60℃,Tm为82.9℃,其热稳定性较好;最适pH为6.0,在pH 6.0～8.0范围内较稳定;Km和Vmax分别为5.128 mg/mL、12.92 mg(/mL.min),BpgA能快速降低果胶底物的黏度。     

缫丝废水发酵产蛋白酶的菌种筛选及发酵工艺优化

试验旨在研究筛选菌株发酵缫丝废水生产蛋白酶。试验从自然环境取样,筛选得到能利用缫丝废水发酵产蛋白酶的菌株Z416,形态学观察和分子生物学鉴定该菌株为硝基愈创木胶类节杆菌(Paenarthrobacter nitroguajacolicus),并通过单因素和正交设计试验优化了该菌株的产酶条件组合。结果显示,发酵液乳糖添加量4%、发酵培养基初始pH值7.5、接种量16%、摇床转速180 r/min、发酵温度33 ℃、发酵时间84 h为最优发酵方案。在此条件下,菌株Z416酶活力达到17.89 U/mL,是优化前酶活(3.21 U/mL)的5.57倍。研究表明,该蛋白酶具有应用到禽和猪饲料中的潜力,可以改善畜禽的生长性能。