几种玉兰亚属植物的RAPD亲缘关系分析

 以玉兰亚属的20个材料(含种和品种)为研究对象，用RAPD技术对其亲缘关系进行分析。从55个随机引物中筛选出15个，对所有供试材料进行扩增，共获得274条DNA谱带，其中262条为多态性带。建立的基于RAPD结果的亲缘关系树形图显示玉兰亚属的基因背景非常复杂，类群划分较为困难，说明中国的玉兰亚属种质资源非常丰富。     

石斛属植物遗传多样性RAPD分析

应用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术,对石斛属植物16个种进行了基因组DNA多态性分析.从82个随机引物中筛选出20个多态性好的引物进行RAPD扩增,扩增DNA片段数据用UPGMA聚类法构建系统发育树.20条引物共扩增出142条带,多态性带118条,约占总数的83.1%.聚类结果显示RAPD分子标记构建的系统发育树与经典分类系统一致.RAPD标记可为石斛属植物的系统分类研究提供分子生物学依据.     

利用分子标记对桃、李、杏、梅、樱类植物系统发育的分析

采用RAPD技术，利用从200个10碱基随机引物中筛选的22个随机引物对桃、李、杏、梅、樱类植物中的223个试材进行了DNA扩增分析。结果表明：每个随机引物都能在桃、李、杏、梅、樱类植物的DNA扩增带中找到多态，但每类植物没有能区别其他类别的共有特征带。对22个随机引物180个位点上的RAPD带进行聚类分析，结合前人从形态学、细胞学、孢粉学和酶学的研究结果，认为桃、李、杏、梅、樱类植物可划分为桃属、李属、杏属和樱属。     

李属植物DNA提取及RAPD反应体系的优化

以1号李,6号李和公主红为试材,对李属植物DNA提取方法进行改良并进行RAPD反应体系的优化.结果表明:改良CTAB(3%)法提取的DNA产量高,可满足RAPD扩增的需要.25 μL反应体系中,DNA聚合酶、Mg2 、引物、模板DNA和dNTPs 5种主要成分的适宜浓度或用量分别是:1.0 U、2.0mmol/L、10 pmol/L、20 ng和1.0mmol/L.     

美人蕉种质资源的RAPD分析

 利用RAPD技术对美人蕉属4个种和52个品种的亲缘关系进行研究, 从125个随机引物中筛选出27个多态性较高的引物, 扩增出223条DNA带, 其中140条为多态带, 占62.78% , 平均每个引物扩增的DNA带数为8.26条。3个种和7个品种具有特异的位点, 可作为种质鉴定的依据。根据RAPD扩增结果建立美人蕉UPGMA聚类图, 在0.11处将56份种质划分为4类。分子聚类结果与形态分类结果基本一致, 4个种分属4个类群, 52个品种分为大花美人蕉和兰花美人蕉。对美人蕉品种分类和品种演化进行了初步探讨。     

栗属中国特有种—板栗、茅栗、锥栗RAPD分析

对中国栗属特有种板栗(CastaneamollissimaBl.)、茅栗(C.seguiniiDode.)、锥栗(C.henryiRehd.&Wils.)10个样品进行了RAPD分析,24个引物共获得158条谱带,其中102条为多态性谱态。利用UPGMA法构建遗传关系聚类图,以相似性系数0.62为阈值,板栗与茅栗为一个聚类组,锥栗为另一个聚类组,表明板栗与茅栗的亲缘关系较近,两者与锥栗的亲缘关系相对较远。     

24个大果沙棘品种的RAPD分析

为了解沙棘种质资源的遗传多样性和品种间的亲缘关系,以24个大果沙棘品种为材料,利用随机扩增多态性DNA(RAPD)方法进行沙棘的遗传多样性分析。从120个随机引物中筛选出多态性丰富的18个引物用于扩增反应,在24个大果沙棘品种中检测到171个RAPD位点,其中多态性DNA带112条,多态位点百分比为65.5%,表明大果沙棘品种具有丰富的遗传多样性;在RAPD分析的基础上,对大果沙棘品种进行了聚类分析,结果表明,以相似系数0.58处作为分界,可将供试的24份大果沙棘种质分为4类。     

辽宁地区五种野生软枣猕猴桃RAPD遗传多样性分析

以CTAB法提取的5种野生软枣猕猴桃基因组DNA为模板,应用RAPD方法随机扩增多态性DNA,分析其亲缘关系。结果表明:5种软枣猕猴桃均表现出各自不同的多态性RAPD标记,5条单个引物分别扩增出一般为4～6条RAPD条带,其分子量约在250～2000bp之间。依据这些多态性标记计算其种间遗传相似性,建立了亲缘关系树形图。     

枇杷属植物及其近缘属植物亲缘关系的RAPD分析

利用RAPD分子标记技术对中国20份枇杷属植物种质资源及其近缘属植物(石楠和石斑木)进行了遗传亲缘关系及分类研究。从300条10碱基随机引物中筛选出24条引物对20份枇杷种质资源的基因组DNA进行扩增,共产生232条谱带,全部为多态性谱带(多态率为100%),表明枇杷属植物种质之间具有丰富的多态性。各种质间的相似性系数为0.33~0.77,并根据相似性系数,利用UPGMA构建了亲缘关系树状图。在相似性系数为0.485时,20份枇杷属植物及其近缘属可分为3大类:所有的枇杷属植物聚在一起构成第1类,而石楠和石斑木分别构成其余2类,这与传统的分类方法一致;但18份枇杷属种质可分为5个亚类,这与枇杷属植物的传统分类法有所不同。初步推论,开花时间和老叶叶背的茸毛可能不是判断枇杷属植物亲缘关系的必要条件,而且枇杷属植物的进化与其生存的地理环境的变迁有着密切联系。     

利用DNA扩增片段序列对樱桃种质资源的遗传分析

 从130个任意寡核苷酸引物中筛选出48个引物, 对8个樱桃种及2个种间杂交种的总DNA进行PCR扩增, 产生的多态性用于遗传分析。利用两种距离法进行系统发育分析, 并构建出种间及品种间亲缘关系的聚类图。结果表明, 扩增位点总数为840个; 23个甜樱桃品种及4个酸樱桃品种各自聚为一类, 多态位点数分别为569和247个, 多态位点百分率分别为67.74%和29.40%。毛樱桃、草原樱桃(变种) 与欧李聚为单一组群; 中国樱桃与寇尔特亲缘关系较近, 聚为另一单一组; 甜樱桃、酸樱桃等其他种在亲缘关系上分歧较大; 樱桃种群间的遗传距离在0.0623 ～ 0.2719之间, 并且从分子水平上可以鉴别。聚类图聚类分析结果总体上与李属分类标准相一致。除甜樱桃‘红灯’品种外, 均扩增出了1个以上的特有RAPD标记, 据此可以进行品种鉴定或杂种优良性状预选。     

与枣核性状相关联的RAPD标记的筛选

用 ３４０个随机引物，对枣有核池和无核池进行了扩增，共扩增出 ３ ３４８条 ＤＮＡ带，选出 １１个多态性引物，进一步用这１１个引物进行个体验证，发现只有引物 Ｓ１５４在金丝小枣的 １６个类型中（占供试有核类型 ８８．２１％）扩增出一条８２０ ｂｐ的特异带，而无核小枣的６个类型中（占供试无核类型８５．７１％）无此特异带。综合分析初步认为，Ｓ１５４８２０是与枣有核性状相关的分子标记，该标记需进一步验证。     

Development of sex-associated RAPD markers in wild Pistacia species

Summary

Marker assisted selection may greatly facilitate pistachio rootstock breeding as well as cultivar improvement, because of the long juvenile period of Pistacia species. Early diagnosis of seedling sex type would assist breeding and nurserymanagement in these dioecious species. We searched for RAPD markers linked to sex in P. atlantica, P. terebinthus and P. eurycarpa, the main wild species in Turkey that are used as rootstocks for P. vera. For this purpose, leaf samples were collected from male and female individual trees from each species and sex-pooled DNA samples were prepared by mixing the DNA of ten male and ten female individuals, to screen for sex associated RAPD bands. A total of 472 primers have been screened so far and two bands, amplified by primers BC156 and BC360, appeared to be sex assocaited in P. eurycarpa. The bands were tested in 30 male and 37 female individuals. Band BC156 (1300) was present in all, except one, female trees and was absent from all the male trees. Band BC360 (500) was amplified in 31 out of 37 females and was absent from all the males. In P. atlantica, one primer, OPAK09, amplified a femaleassociated band (850 bp), that was present in all 46 female individuals tested and absent in all the 38 male trees tested. It is likely that these markers are linked to sex-determining loci. The sex determination mechanism has not been characterized in Pistacia and segregating populations from controlled crosses are required to elucidate such mechanism and also to measure the genetic distance of our markers from the putative sex loci.     

Identification of persimmon (Diospyros kaki) cultivars and phenetic relationships between Diospyros species by more effective RAPD analysis

Randomly amplified polymorphic DNA (RAPD) markers were used to identify cultivars of persimmon (Diospyros kaki Thunb.) and to estimate the phenetic relationships between Diospyros species. Long random primers (15 and 20 bases) were used to increase the effectiveness of recognizing polymorphism. Twenty-five of 34 (74%) long random primers amplified polymorphic bands of 25 persimmon cultivars, indicating that the effectiveness improved compared with RAPD analysis using 10-base primers. The 25 primers amplified a total of 444 polymorphic bands, which distinguished all 25 cultivars. RAPD markers (133) clarified the phenetic relationship between the six species and subspecies of Diospyros: D. lotus, D. lotus subsp. glabbra and D. taitoensis formed one group (lotus group), and persimmon was related in order of closeness to the lotus group, D. oleifera, and D. rhombifolia.     

核桃早实性状相关联的RAPD标记

运用RAPD技术进行核桃早实性状相关的分子标记研究,用180个随机引物,共扩增出1600条DNA带,选出5个多态性引物,进一步用这5个引物进行单株确认,发现只有引物OPG15在早实类群的8个个体中扩增出一条710bp的特异带,而晚实类群的8个个体中无此特异带。初步分析认为,OPG15710可能是与核桃早实性状相关的分子标记,该标记需进一步确定。     

应用RAPD分析新疆主要梨品种的遗传关系

利用RAPD分析了新疆18个梨品种间的亲缘关系。从160个随机十聚体引物中筛选出12条RAPD引物。18份材料共扩增133条带,平均每条引物扩增约11条带,其中14条带为所有材料的共有带,有119个多态性位点,占总带数的89.47%,Nei相似系数为0.5～0.923。用PHYLIP构建MP树,认为(1)对选用的形态学经典分类已较明确的新疆梨、白梨、砂梨、西洋梨、秋子梨,RAPD分析数据完全与其相符;(2)几个芽变品种间高度相似;(3)杂种新梨1号与砀山梨、杂种新梨6号与香梨、杂种早酥梨与苹果梨分别并类;(4)苹果梨独立于供试的5个种之外;(5)库尔勒香梨归属于新疆梨。     

31份野生树莓资源的RAPD分析

用RAPD技术分析了31份野生树莓资源的亲缘关系,从100个A系列随机引物中选出了15个多态性高、分辨能力强的引物。将这15个引物应用于31份野生树莓材料,共扩增出182条谱带,其中170条为多态性标记(占93.41%),平均每个引物扩增多态性谱带12.13条,表明不同树莓资源基因型间存在着极为丰富的遗传多样性。基于RAPD的扩增结果建立UPGMA聚类分析树状图,31份野生树莓资源在遗传距离0.5100处被划分为4个类群。从分子水平研究了树莓属资源的亲缘关系,为树莓种质资源的保存和利用及其杂交亲本的选配提供了依据。     

部分芍药种质资源的RAPD分析

 对5种野生芍药和26个栽培芍药品种的亲缘关系进行了RAPD分析。17条引物在所有供试样本中共扩增出153条反应带，其中多态带149条。对RAPD扩增结果采用UPGMA法进行聚类分析，在遗传相似度0.32处，块根芍药(Paeonia anomala)被单独分为一类，其它30份材料归为另一类；在遗传相似度0.54处，川赤芍(P.veitchii)、草芍药(P.obovata)和美丽芍药(P.mairei)3个野生种先后从30份材料中分别单独分离出来，而野生种芍药(P. lactiflora)则与所有的栽培品种聚为一类。该结果表明26个品种间的遗传背景相对一致，并与野生种芍药的遗传基础最为近密，与其它4种野生芍药的遗传差异则较大。按照与栽培品种亲缘关系由近到远的次序，4个野生近缘种依次排布为：美丽芍药、草芍药、川赤芍和块根芍药。研究结果从分子水平揭示出中国芍药品种群遗传背景狭窄，利用野生近缘种改良现有品种尚具有广阔空间。     

红掌根腐病病原鉴定及其PCR 检测方法

 利用真菌通用引物ITS1 和ITS4 扩增红掌根腐病菌转录间隔区并进行序列测定,通过序列 比较,设计了1 对红掌根腐病菌的特异引物SF1/SR2,对30 个红掌根腐病病原菌、8 种其它真菌和2 种 细菌基因组DNA 进行PCR 扩增。结果表明,只有红掌根腐病菌获得572 bp 的特异带。使用引物SF1/SR2 对华丽腐霉进行PCR 扩增,其检测灵敏度在DNA 水平上可达1 pg。运用设计的引物从红掌根腐病菌基 因组DNA 以及人工接种和自然发病的红掌植株中扩增到572 bp 的特异片段,实现了对红掌根腐病菌的快 速可靠的检测。