甘蔗基因组DNA提取方法的研究

甘蔗是重要的糖料及能源作物之一。甘蔗基因组DNA的提取是甘蔗分子生物学研究的前提。试验以甘蔗的嫩叶为材料,通过对前人的CTAB提取方法进行改良,建立了甘蔗基因组DNA的CTAB提取方法Ⅲ。该方法具有成本低、操作简单、省时和量多等特点,并且得到的DNA经核酸蛋白质分析仪测得A260/A280值处于1.673～1.929之间、A260/A230集中处于1.903～2.358,经琼脂糖凝胶电泳检测各样品具有一条分子量大于23.37kb的明亮主带并无拖尾现象,经RAPD-PCR检测各样品均能扩增出清晰而多态性丰富的条带,说明方法Ⅲ提取得到的DNA完整性好,纯度高,可以直接用于各种分子标记。     

甘薯薯块DNA提取方法研究

甘薯薯块富含淀粉、酚类等物质,不利于DNA提取。为了研究甘薯薯块DNA提取的最佳方法,采用经典CTAB法、改良CTAB法一、改良CTAB法二和SDS提取法,对甘薯薯块总DNA提取效果进行比较,以试剂盒法提取结果作对照。结果表明:采用经典CTAB提取法和SDS提取法获得的薯块DNA含有较多杂质,且降解严重,样品质量低;CTAB改良法一能降低DNA样品中多糖等物质的含量,但DNA存在一定程度降解,且耗时较长;CTAB改良法二提取效果最佳,杂质含量低且DNA降解少,与试剂盒提取效果最接近,是一种较为理想的甘薯薯块DNA提取方法。     

枸杞DNA的提取方法研究

[目的]寻求高质量枸杞DNA的有效提取方法,为开展我国枸杞种质资源准确的分子鉴定评价提供试验基础。[方法]针对枸杞组织中多糖严重干扰基因组DNA提取质量的问题,比较了常规十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）法和改良CTAB法的处理效果。[结果]常规CTAB法提取DNA难以除去多糖类杂质,溶液极黏稠,致使移液枪吸取困难,取量不准;改良CTAB法提取DNA产率高,无明显降解,杂质少,OD260nm／OD280nm比值在1．80左右,表明DNA纯度高,污染少。通过基因组DNA—AFLP指纹图谱分析,改良CTAB法完全满足试验要求。并对改良CTAB法的关键步骤作了分析讨论。[结论]为枸杞DNA的有效提取提供了方法依据。     

提取蕨类植物DNA方法比较

[目的]研究蕨类植物DNA提取的方法,为进一步的遗传多样性以及分类学的研究提供基础。[方法]通过改变试剂的用量以及操作方法对CTAB法提取DNA方法进行了改进。[结果]改良的CTAB提取法能够提取出高质量的蕨类植物的DNA。[结论]改良了蕨类植物DNA提取的方法。     

中药材附子基因组DNA提取方法研究

[目的]为研究附子的遗传多样性、种质鉴定和指纹图谱的构建提供基本保证。[方法]以中药材附子药源植物的幼嫩叶片和块根为试材,分别采用SDS法、CTAB法和改良CTAB法从中药材附子药源植物中提取基因组DNA,比较不同方法的提取效果。[结果]对于新鲜叶子,采用SDS法提取DNA的A260/A280值最接近1.80,其次为改良CTAB。采用改良CTAB法从新鲜附子提取DNA的A260/A280值最接近1.80,表明改良CTAB法的除杂效果优于SDS法。SDS法适于杂质含量较低的试材。采用SDS法提取的DNA浓度最高,改良CTAB法次之,CTAB法最低;从鲜材料提取基因组DNA浓度比干材料高。[结论]3种方法均能提取到中药材附子药源植物的基因组DNA,SDS法对新鲜叶子提取的基因组DNA效果最佳,改良CTAB法对新鲜附子进行DNA提取的效果最好。     

雷公藤总DNA提取方法的研究

由于雷公藤叶片富含多糖及酚类物质,要获得高质量的DNA有一定难度。本研究以雷公藤植物叶片为材料,对传统提取方法进行改进、优化,比较了4种不同的提取方法,最终获得了一种以CTAB法为基础,试剂盒纯化的获得高质量DNA的方法。试验结果表明,使用该方法从雷公藤叶片中分离的DNA,纯度高、杂质少,且相对于其他方法,试验成功率明显提高,适用性强。     

金针菇DNA提取方法比较

[目的]筛选有效的金针菇DNA提取方法。[方法]以培养的金针菇菌丝体为材料,分别采用CTAB法和试剂盒法提取金针菇DNA,并用琼脂糖凝胶电泳法和分光光度法检测所提取DNA样液的浓度与纯度。[结果]分光光度结果及电泳鉴定表明CTAB法提取的DNA产量较大但杂质多,试剂盒法提取的DNA产量小但杂质少。[结论]CTAB法和试剂盒法均可用于金针菇DNA的提取,如后续试验对提取的DNA纯度没有特别要求,可用CTAB法替代试剂盒法。     

甘薯叶片基因组DNA提取方法

针对甘薯叶片富含多糖、多酚、色素等物质的特点,以新鲜幼嫩甘薯叶片为材料,采用改良CTAB法提取基因组DNA,并对DNA进行电泳检测和AFLP分析.结果表明:使用改良CTAB法从32份甘薯叶片中提取基因组DNA,其纯度高、质量好、相对分子量大,多糖和多酚类等杂质去除比较完全,且OD<,260>/OD<,230>值>2.0...     

棉花DNA提取方法的探讨

就提取棉花基因组DNA的两种基本方法及其相应的改进方法作了系统比较研究.结果表明:改进的SDS法和CTAB法分别优于原SDS法和CTAB法,两种改进方法提取棉花基因组DNA效果一致.DNA的得率与提取方法有关,还与棉花的取材部位有关.改进的CTAB法DNA得率高于改进的SDS法;采用改进的CTAB法提取棉花不同部位基因组DNA,其DNA得率的高低依次为花药>花瓣>叶片>纤维.由改进方法提取的棉花基因组DNA能完全双酶切,能满足SSR和AFLP等后续分子生物学研究的需要.     

羌活基因组DNA提取方法

[目的]探索一种用于RAPD分析的羌活基因组DNA提取方法。[方法]分别采取CTAB法S、DS法和改良的CTAB法提取羌活基因组DNA,通过紫外分光光度法、琼脂糖凝胶电泳和RAPD分析对提取的DNA进行检测。[结果]3种方法均能有效地从羌活中获得较高产量的DNA,以改良的CTAB法所得的DNA纯度最高,此法提取的羌活基因组DNAOD260/OD280为1.8~2.0,DNA干重得率约为0.235μg/mg。[结论]改良的CTAB法更适于羌活基因组DNA的提取,可以完全满足RAPD扩增的需要。     

中药材白术初加工技术研究

[目的]研究白术初加工技术.[方法]通过考察药材质量、操作时长等因素,比较传统与现代初加工方法的优劣.[结果]2种加工方法的药材质量均符合药典及其他相关标准,无显著差异.[结论]现代初加工方法效率高、品质均一,比传统初加工方法优.     

白术碱溶性多糖提取工艺研究

[目的]优化白术（Atractylodes macrocephala Koidz）碱溶性多糖提取工艺。[方法]以白术水提残渣为原料,采用碱溶液进行提取。在单因素试验基础上,选取碱浓度、提取时间和料液比进行正交试验,对其碱溶性多糖的最佳提取工艺进行探讨。[结果]碱溶性白术多糖的最佳提取工艺条件为：碱浓度0.9 mol/L,提取时间5 h,料液比1∶30（W∶V）。在该工艺条件下,碱溶性粗多糖得率为8.38%。[结论]该研究可为白术碱溶性多糖的开发利用提供科学依据。     

抑芽丹对白术的抑蕾效果研究

[目的]探索白术化学除蕾方法,确定抑芽丹（芽敌）30.2%水剂在不同时期与不同浓度的抑蕾效果。[方法]用抑芽丹对白术在不同时期与不同浓度进行系统的化学抑蕾效果研究。[结果]喷施抑芽丹完全可代替手工摘蕾,能够达到省工增产增效的目的。药剂浓度越高,抑制白术花蕾开花的效果越明显,施药时期越早对白术花蕾开花的抑制效果越好;药剂浓度、施药时间与植株高度具有相关性,浓度越高植株越矮,施药越迟植株越高;但过早施用和高浓度会造成白术减产。[结论]在白术现蕾期采用50.0~62.5倍的药剂喷施,能达到增产增效的目的。     

白术根腐病发病影响因素研究

研究了温度、湿度,土壤pH值、质地、含菌量和接种方式对白术根腐病的影响.结果表明:土壤含菌量从103个/mL孢子浓度开始发病,达107个/mL时,发病率达100%;白术根茎伤口有利于根腐病的发生;白术根腐病的最适温度范围为20~25℃;土壤湿度低于40%时,白术几乎不发病;白术根腐病能够发生最适pH值为6.5;土壤质地对白术根腐病具有较大影响,粘土的发病率最高,发病率为70.0%,砂土发病率最低,为36.6%.     

白术种苗繁育及高产栽培技术

通过多年生产实践,总结了贵州地区白术的种苗繁育技术和高产栽培技术,以期为贵州白术的规范化种植提供一定参考。     

6种培养基对不同来源白术白绢病菌培养的影响

6种培养基对不同来源白术白绢病菌培养的影响研究结果表明,6种培养基上,4个不同来源地菌株菌丝生长和菌核产量存在一定的差异,尤其是菌株LA20,在几种供试培养基上长势均较其他3个菌株差,产核量也最少。比较几种培养基上供试菌株生长状况和产核量的关系发现,供试4个菌株产菌核量与菌丝的生长状况呈一定的正相关关系,即在同一个培养基上菌株菌丝生长越好,产核量也越多。     

白术根腐病菌分离及致病性研究

在同一地块通过对白术根腐病的发病情况进行调查,确定白术根腐病分为湿腐和干腐2种症状,湿腐为主要症状类型,在田间所占比例达69.68%.通过对30个病株样本进行病原分离,共分离得到131个菌株,12种分离菌中有7种对白术具有致病力,其中尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)和茄病镰刀菌(F.solani)能产生白术根腐病的典型症状.尖孢镰刀菌为根腐病主要致病菌,并能导致两种症状,致病率达90%;茄病镰刀菌危害症状为湿腐,致病率为30%.     

白术产地优良品系区域性试验

为探明天台石梁、临安天目山、磐安林峰产地优良品系的特性,在浙江磐安、新昌、文成安排区试。结果表明,磐安林峰、天台石梁品系的丰产性、稳定性及一级品率等均优于对照。     

不同基质种类及配方对白术苗质量的影响

[目的]筛选适合白术育苗的培养基质。[方法]采用盆播进行育苗,随机区组排列。[结果]处理D1,即菇渣与园土按1∶1比例混合是最佳的白术苗培养基质。[结论]该试验筛选出白术苗木生长的最佳培养基质,为白术的大量培育奠定了基础。     

生态环境及生育年限对白术光合产物积累特性的影响

[目的]研究四川峨眉山白术不同生态类型不同生育年限的药材根茎光合产物积累量、生理水分贮藏量的变化规律,确立白术GAP种植适宜的生态类型及采收年限。[方法]采用产地调研法和60℃烘干法研究峨眉山坝区(450 m)和山地(1 200 m)生态1、2、3年生白术的根茎鲜品生物量、水分贮量、折干率、光合产物积累量和根茎干品产量,应用相关回归分析法研究不同生态类型不同生育年限白术的药材根茎光合产物积累量、生理水分贮藏量的变化规律。[结果]峨眉山白术植株根茎的鲜品生物量y1、生理水分贮量h、折干率y2、光合产物积累量y3、干品产量Y表现为:山地生态>坝区生态,且3年生白术>2年生白术>1年生白术,表明白术光合产物积累规律是随生育年限增长而呈正相关地增加(P<0.001)。[结论]山地生态条件适宜于白术的生长发育,植株生长健壮,病虫害少,有利于光合产物的合成积累,建议白术适宜的种植采收期为3年。