温度、光线对蚕卵滞育解除的影响

对蚕种进行同浓度、同浸渍时间的处理,由于浸酸液温的不同,蚕卵孵化率具有极显著的差异。用871×872、夏芳蚕种试验发现,保持明暗规律变化的蚕种有孵化现象,而完全黑暗保护的蚕种均未见有蚕卵孵化,说明蚕卵保护中明暗规律性对蚕卵孵化有重要影响     

家蚕滞育卵对盐酸的反应性研究

在25℃保护时间短、尚未完全进入滞育的蚕卵,用一般即时浸酸方法处理,即可使2天孵化率达到90％以上。但保护时间长、完全进入滞育的蚕卵,低浸酸强度下,滞育解除率少,且有一部分已解除滞育卵蚁蚕不能破壳孵化而死亡;高浸酸强度下,一部分已解除滞育的胚胎不能发育到成熟就死亡;加上来自不同母蛾的蚕卵对盐酸的敏感性不尽相同;因此,用一般的浸酸方法处理,难以达到实用孵化的目的。本研究通过特殊浸酸方法,可使在25℃下保护15天和10天、5℃低温冷藏0至50天不等的滞育卵的2天孵化率接近或达到90％。     

不冷藏或短期冷藏家蚕滞育卵的随时孵化技术研究

研究了家蚕卵产后经过 1～ 7d、10～ 2 0d解除滞育的孵化条件。蚕卵产下后在 2 5℃保护 1～ 7d的未完全滞育卵 ,用 1 0 75kg/L盐酸 ,4 6℃液温分别浸渍 5、10、2 0、2 5、4 0、4 5、5 0、70min ,实用孵化率可以达到 90 %左右。当蚕卵产下后在 2 5℃保护经过 10～ 2 0d时 ,用高温冲击加浸酸的方法可以解除其滞育 ,实用孵化率可达 90 %左右。     

提高滞育卵冷藏浸酸孵化率技术的探讨

本文通过总结近几年国内外同行及本单位对滞育卵人工孵化的研究试验和实践,探索出提高滞育卵冷藏浸酸孵化率的部分技术要领,认为二化性品种滞育卵进入滞育时间在20日以内,采取浸酸-冷藏-浸酸形式,如冷藏时间在40天以上,配合补催青黑暗处理,其孵化率基本可达到生产上的要求,且对蚕体体质无不良影响,如冷藏时间在50天以上可在生产上放心使用.     

二化性家蚕滞育过程中谷胱甘肽S-转移酶活性的变化

二化性家蚕卵以25℃和15℃催青,可分别诱导成虫产下子代滞育和非滞育卵,而即时浸酸和5℃左右的低温处理可以分别阻止和解除胚胎滞育。利用1-氯-2,4-二硝基苯(CDNB)显色法测定了经上述处理后的胚胎滞育过程中谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferase,GST)的活性,结果表明:胚胎发育后期的蚕卵经25℃催青,卵中的GST活性显著高于15℃催青蚕卵;蚕卵即时浸酸未显著改变胚胎滞育发动阶段蚕卵中的GST活性;5℃低温处理显著提高了滞育卵中的GST活性,但是未能显著改变即时浸酸卵的GST活性。上述结果表明,蚕卵中的GST活性变化与二化性家蚕胚胎滞育诱导和解除密切相关。     

家蚕二化性品种(品系)转基因用蚕卵的预处理技术研究

家蚕为卵滞育昆虫,二化性家蚕品种(品系)的化性由上代卵期温度与光照等调控。将若干个二化性家蚕品种(品系)以17~18℃温度催青诱导子代蚕卵非滞育,筛选出1个经济性状较优的实用品种"秋丰"、1个突变品系P33,二者非滞育卵圈比例分别达到96.4%和89.6%,正常催青的良卵实用孵化率分别达到96.11%和98.58%,解决了采用显微注射法以家蚕实用品种构建转基因系统过程中因蚕卵滞育不能及时孵化的难题。另对利用20%盐酸-2%甲醛混合液刺激解除蚕卵滞育的方法以及非滞育蚕卵表面用70%乙醇消毒的方法进行了尝试,前者可以获得96%以上的孵化率,后者可以缩短蚕卵预处理时间。     

提高滞育卵冷藏漫酸孵化率技术的探讨

本通过总结近几年国内外同行及本单位对滞育卵人工孵化的研究试验和实践，探索出提高滞育卵冷藏浸酸孵化率的部分技术要领，认为二化性品种滞育卵进入滞育时间在20日以内，采取浸酸—冷藏—浸酸形式，如冷藏时间在40天以上，配合补催青黑暗处理，其孵化率基本可达到生产上的要求，且对蚕体体质无不良影响，如冷藏时间在50天以上可在生产上放心使用。     

家蚕滞育卵浸酸后易溶性蛋白的表达差异分析

探明浸酸解除家蚕卵滞育的关联蛋白,可为改进和提高蚕种的人工孵化技术提供理论依据。以经2.5℃冷藏45 d的家蚕品种"7.湘×9.芙"滞育卵为材料,采用双向凝胶电泳和图像分析技术,比较浸酸与未浸酸蚕卵易溶性蛋白的差异变化。在未浸酸蚕卵的双向电泳图谱中共检测到523个蛋白质斑点,其中特异性蛋白质斑点41个;浸酸卵共检测到526个蛋白质斑点,其中特异性蛋白质斑点44个。浸酸与未浸酸蚕卵能相互匹配的蛋白质斑点有482对,匹配率91.897%。经对比分析,浸酸活化后的蚕卵蛋白出现了一些特异性的蛋白质斑点,或某些蛋白质斑点在含量上出现了差异变化。     

盐酸处理蚕卵酯酶A4的活性变化及其与滞育性的关系

从家蚕C108品种蚕卵精制酯酶A4,首次测定了产卵后24～96h浸酸蚕卵酯酶A4的ATPase活性。蚕卵经盐酸处理后在体外5℃1～2d或体外25℃1～3h出现酶活性峰。与低温活化蚕卵比较,产卵后24～96h的浸酸蚕卵,在体外5℃酶活性峰出现时间提早了8．5～22d,在体外25℃提早了3～9h。浸酸后蚕卵迅速解除滞育,滞育发育时间显著缩短。将不同卵龄未浸酸蚕卵与盐酸处理蚕卵酯酶A4的ATPase活性峰出现时间差制成曲线,在体外5℃或25℃的结果几乎都完全与5℃冷藏时蚕卵的滞育发育时间曲线重叠。盐酸处理蚕卵酯酶A4的活性变化与蚕卵活化有高度相关性。     

合成滞育激素对家蚕卵碳水化合物代谢的影响

为了进一步阐明家蚕滞育激素在诱导滞育卵发生以及对蚕卵滞育过程中碳水化合物代谢的调节作用 ,对低温 (16℃ )暗催青的二化性品种大造 ,在化蛹初期注射合成滞育激素 ,诱导其产下滞育卵 ,然后将这种滞育卵分别用 2 5℃和 5℃保护 ,调查其在滞育过程中糖元、海藻糖、山梨醇和甘油量的变化。结果发现 ,从化蛹第 3天开始 ,每天注射 15 0pmol/头合成滞育激素 ,连续 3次 ,可得到 70 %左右的滞育卵。这种滞育卵在产卵初期糖元的含量与自然滞育卵相似 ,但山梨醇的含量仅有自然滞育卵的 5 0 %左右。诱导滞育卵在 5℃中保护时 ,解除滞育的时间比自然滞育卵提前 ,孵化率比自然滞育卵低 2 0 %左右。未孵化卵大多在转青期死亡。由上述结果推测 ,这种诱导滞育卵在产卵初期糖元与山梨醇的代谢间存在某种障碍 ,从而影响山梨醇的合成 ,导致滞育的提前解除和胚胎发育异常。     

滞育卵与浸酸卵的几种生理变化的研究

将滞育性蚕卵分为滞育卵和浸酸卵两种,随着胚胎发育测定pH值、糖原、核酸、蛋白质及氨基酸,研究滞育卵与浸酸卵内的生理变化。试验结果表明,滞育卵随着胚胎发育,pH值和糖元含量有逐渐降低的倾向,但其差异不大,蛋白质和核酸含量明显减少,游离氨基酸含量急剧增多。反之,浸酸卵随着胚胎发育,pH值初期下降、后期再上升,达到浸酸前水平,糖原含量急剧减少,在孵化前达到最小值,蛋白质和核酸含量逐渐增多,氨基酸量减少。由此可见滞育卵和浸酸卵内的物质变化及其内部环境具有明显差异。     

滞育卵浸酸孵化技术的探讨

采用滞育卵浸酸冷藏再浸酸孵化技术,处理云蚕7、云蚕8原种,调查其孵化率及饲养成绩。结果表明,滞育卵浸酸种和对照种的龄期经过、虫蛹率、幼虫生命率、茧层率、万蚕产茧量等指标都无明显差异。     

不同比重盐酸和保护时间对即时浸酸原种孵化率影响试验

盛产卵保护20h、22h、25h后,分别用比重1.073、1.074、1.075盐酸浸酸,调查夏芳A、夏芳B、秋白A、秋白B等四个品种原种的实用孵化率,经方差分析均未达到显著或极显著差异。从试验情况看,准备即时浸酸的夏芳、秋白原种,蚕卵保护温度25℃、时间22~25h,蚕卵胚子适度发育再浸酸,有利于提高其实用孵化率。即时浸酸盐酸比重以1.074为宜,避免1.075以上比重盐酸浸酸,否则易造成死卵发生。     

盐酸刺激活化家蚕滞育性卵的机理研究进展

盐酸刺激活化家蚕滞育性卵的机理研究是家蚕卵滞育与活化机理研究的一个重要方面。本文综述了浸酸后蚕卵的理化性质变化,如卵壳的通透性,卵内某些酶和激素的活性变化及其对蚕卵滞育性的影响,以及蚕卵对盐酸刺激的接受方式等方面的最新研究结果,还阐述了酸刺激量与蚕卵孵化率的关系。     

冬季收蚁的滞育蚕卵孵化法实验

冬季收蚁的滞育蚕卵孵化法实验徐厚镕（安徽农业大学轻工学院蚕桑系２３００３６）春制滞育蚕种，需要在夏秋季使用时，生产上一般采用冷藏浸酸法，即：滞育卵从母蛾产下后在，２５℃温度中保护３天左右，卵色变为赤豆色，入库冷藏。根据生产需要，可用卵色深浅不同、冷藏...     

合成滞育激素 蚕卵碳水化合物代谢的影响

为了进一步阐明家蚕滞育激素在诱导滞育卵发生以及对蚕卵滞育过程中碳水化合物代谢的调节作用，对低温（16℃）暗催青的二化性品种大造，在化蛹初期注射合成滞育激素，诱导其产下滞育卵，然后将这种滞育卵分别用25℃和5℃保护，调查其在滞育过程中糖元、海藻糖、山梨醇和甘油量的变化。结果发现，从化蛹第3天开始，每天注射150pmol/合成滞育激素，连续3次，可得到70％左右的滞育卵。这种滞育卵在产卵初期糖元的含量与自然滞育卵相似，但山梨醇的含量仅有自然滞育卵的50％左右。诱导滞育卵在5℃中保护时，解除滞育的时间比自然滞育卵提前，孵化率比自然滞育卵低20％左右。未孵化卵大多在转青期死亡。由上述结果推测，这种诱导滞育卵在产卵初期糖元与山梨醇的代谢间存在某种障碍，从而影响山梨醇的合成，导致滞育的提前解除和胚胎发育异常。     

桑蚕一代杂交种赤豆色卵的冷藏期限与随时孵化

通过对两广地区现行生产用桑蚕一代杂交种7.湘×9.芙的赤豆色蚕卵,入库冷藏15～120d后,比较不同冷藏时间、浸酸处理条件对蚕种解除滞育的效果。结果表明：赤豆色蚕卵入库冷藏15d后,按常规的人工孵化法浸酸18min,蚕卵的实用孵化率达91.93%;冷藏30～75d后,浸酸18min,实用孵化率约为91%～95%;冷藏期达到90d以后无需浸酸处理可直接出库催青,孵化良好。当冷藏期达到120d时出库催青,孵化正常,实用孵化率仍符合生产要求,即使作18min的浸酸处理,也不会影响其孵化率。     

产后100小时内蚕卵的即时浸酸试验

用液温46.1℃,比重1.075的盐酸浸渍8个家蚕现行品种(或杂交型式)产下后20至100小时的滞育性卵(25℃保护中),无论是普通孵化率,还是实用孵化率(二月或一日),要达到一定高值,在5至23分钟浸酸时间内,浸酸时期越迟,所需浸渍时间越长。产下后100小时以内的蚕卵,浸酸后都有较高的实用孵化率,而且产下后60至100小时的蚕卵比产下后20至40小时的蚕卵有效盐酸浸渍时间范围更广,安全系数更大。所有供试蚕品种,达到95％以上两日实用孵化率所需的盐酸浸渍时间分别为:产后20至40小时蚕卵5分钟;60小时蚕卵11至14分钟(7532×75新在14分钟时略低);80小时蚕卵14至23分钟;100小时蚕卵为20至23分钟。浸酸时期越迟催青经过也越长,25℃中催青的收蚁时间,产后20至40小时浸酸卵为浸酸后第11日,产后60、80、和100小时浸酸卵分别为浸酸后第12、13和14至15日。由于浸酸时期推迟,加上催青经过延长,产后20至100小时浸酸卵,收蚁时间可在蚕卵产下后第12至19日变动,这样不仅扩大了即时浸酸的适期范围,还可代替因收蚁推迟而需要的浸酸前冷藏处理。     

家蚕滞育卵长期保存的研究

调查了不同温度保存的９个原种及２对杂交种的滞育性及多元醇量的变化，对长期保存卵进行了养蚕试验。结果表明：５℃保存卵在产卵１００日后滞育开始解除，１５０日左右孵化率达到最高峰，２００日后急剧下降。不同品种间无明显差异。１℃保存卵在产卵后１８０日左右开始解除滞育，原种在２００－３００日之间孵化率最高，３００日后显著降低，而杂交种产卵后４５０日孵化率仍在８０％以上。－１．５℃保存卵在产卵后５００日仍呈滞育状态，但转入５℃保存８０日后可获得孵化能力，到产卵后７００日孵化率大致在６０％左右。不同温度保存卵滞育的解除，与卵内山梨醇及甘油量的减少呈相同趋势。养蚕结果表明，用１℃保存４１０日以及－１．５℃保存７００日的杂交种，除孵化率比当年生产的冷藏浸酸种低外，其它饲育成绩无明显差异。     

适用于实用家蚕品种转基因的蚕卵滞育解除方法

实用家蚕品种转基因是利用分子靶标实现家蚕品种改良与创新的最直接和有效手段,建立高效的适合于转基因显微注射的蚕卵滞育解除方法则是目前家蚕转基因在技术层面尚待解决的关键问题之一。采用早期浸酸、低温催青、复式催青3种方法解除显微注射转基因蚕卵的滞育。结果表明,3种人工处理方法均能解除蚕卵滞育,且获得的非滞育性蚕卵可通过显微注射得到转基因阳性个体,其中采用复式催青法处理的子代蚕卵滞育解除率最高,转基因阳性蛾圈率约25.00%,明显优于低温催青和早期浸酸处理。此外,采用早期浸酸处理,日系品种的蚕卵滞育解除率高于中系品种;采用低温催青和复式催青处理,中系品种子代蚕卵滞育解除率则显著高于日系品种。