荔枝原生质体培养再生植株（简报）

荔枝原生质体培养再生植株（简报）俞长河陈振光吕柳新（福建农业大学园艺系，福州３５０００２）关键词荔枝；原生质体；幼胚；培养；再生植株中图分类号Ｓ６６７．１以荔枝（ＬｉｔｃｈｉｃｈｉｎｅｎｓｉｓＳｏｎｎ．）主栽品种下番枝的幼胚为材料，诱导出松散颗粒状...     

龙眼原生质体培养高效再生体系的研究（简报）

龙眼原生质体培养高效再生体系的研究（简报）赖钟雄陈振光（福建农业大学亚热带果树研究所，福州３５０００２）关键词龙眼；原生质体培养，再生植株；高效体系中图分类号Ｓ６６７．３从龙眼（ＥｕｐｈｏｒｉａｌｏｎｇａｎａＬａｍ．）品种红核仔、东壁等开花后４０—...     

栎叶枇杷原生质体的分离与培养

初步探讨了栎叶枇杷胚培养获得愈伤组织，从胚愈伤组织分离原生质体以及原生质体的早期培养方法，着重研究了酶混合液对栎叶枇杷原生质体分离和培养的效应．结果表明：以１％纤维素酶和２％果胶酶配合使用效果最好，得率和成活率分别为（９．８±０．０３）×１０￣６和９６．０％．作为酶混合液中渗透压稳定剂的甘露醇浓度则以１１％－１２％为好．从合适的酶混合液中得到的原生质体培养已获得愈伤组织．     

栎叶枇杷原生质体的分离与培养

初步探讨了栎叶枇杷胚培养获得愈伤组织，人胚愈伤组织分离原生质体以及原生质体的早期培养方法，着重研究了酶混合液对栎叶枇杷原生质体分离和培养的效应。结果表明：以１％纤维素酶和２％果胶酶配合使用效果最好，得率和成活率分别为（９．８±０．０３）×１０＾６和９６．０％。作为酶混合液中渗透压稳定剂的甘露醇浓度则以１１％－１２％为好，从合适的酶混合液中得到的原生质体培养已获得愈伤组织。     

不同供体原生质体前处理方法对甘蓝与萝卜属间原生质体融合植株？…

用酶法分离甘蓝下胚轴原生质体和萝卜叶肉原生质体，对供体原原质体（萝卜）进行融合前单因素（酶ＥｃｏＲＩ）或双因素复合处理（酶ＥｃｏＲＩ＋ＵＶ０．０３５～０．１０５Ｊ／ｃｍ＾２），用ＰＥＧ法诱导甘蓝与萝卜属间非对称性原生质体融合。结果表明，（１）不同处理方法对植株再生率有明显影响，对称性融合植株再生率为８．５％，非对称性融合植株再生率低３个百分点；单因素处理植株再生率达１１％，双因素复合处理植株再生率     

新疆长绒棉胚性悬浮细胞原生质体的培养及再生

在进行新疆长绒棉胚性细胞原生质体培养期间，比较酶液中不同甘露醇浓度，悬浮细胞不同继代时间及不同培养方法，不同包埋培养基，不同滴加液对原生质体培养的影响。发现琼脂糖珠包埋培养最适宜其培养，获得了原生质体的再生，植板率为２９．８４％（以第八天计），进一步培养，获得再生愈伤组织，愈伤是胚性愈伤。     

橡胶树热研8—79原生质体培养再生植株

【目的】优化橡胶树热研8-79原生质体分离和培养条件,建立橡胶树原生质体培养植株高效再生体系,为橡胶树体细胞杂交育种奠定基础。【方法】以橡胶树热研8-79花药愈伤组织建立的胚性细胞悬浮系为试验材料,设计不同酶组合、酶解时间和悬浮细胞继代时间进行原生质体分离,采用不同培养基、看护细胞浓度和接种密度进行原生质体培养,对原生质体分裂发育的小愈伤组织进行体细胞胚诱导及植株再生培养,统计原生质体的产量、分裂频率、体胚数及体胚萌发率。【结果】酶组合为纤维素酶1.50%＋果胶酶0.15%＋离析酶0.50%、酶解时间为12 h时,继代培养第5 d的胚性悬浮细胞达最高产量（3.6 ×107个/mL PCV）;用酶解细胞和看护细胞继代培养基分别作为原生质体液体培养基和看护培养基,比使用KPR培养基更有利于原生质体的分裂,当看护细胞浓度为5%、接种密度为5 ×105个/mL时原生质体的分裂频率最高,达54%。原生质体持续分裂形成肉眼可见的小愈伤组织增殖后经体胚发生途径发育成完整的小植株。【结论】通过优化橡胶树热研8-79胚性悬浮细胞原生质体分离的酶组合、酶解时间、继代培养时间及看护培养过程中培养基组成、看护细胞浓度和接种密度等影响因素,可以建立橡胶树原生质体培养植株高效再生体系。     

红江橙原生质体分离培养以及植株再生的研究

选择结果性优良的无籽红江橙作为试验材料，通过对开花后１４ｄ左右幼果的胚珠进行培养，建立胚性细胞系，并把乙烯作用的抑制剂ＡｇＮＯ３应用在红江橙胚珠组织培养中，克服了较难获得胚性愈伤组织的困难，同时系统研究了红江橙原生质体分离培养和植株再生技术，并对培养过程中培养基的调控进行了深入的研究，建立起有效的原生质体分离培养和植株再生系统，且获得了无病毒红江橙原生质体原生植株。     

白沙枇杷成熟胚子叶诱导不定芽再生

枇杷(Eriobotrya japonica L.)是原产中国的特色树种,分红沙、白沙两大品系.因其基因型高度杂合,童期长,传统的育种方法周期长,所以采用现代生物技术手段育种显得尤为重要.基因工程是品种改良快速和有效的育种手段,而基因工程的遗传转化操作系统的建立依赖于不同类型的外植体高频植株再生.枇杷的离体培养植株再生主要集中在幼胚、胚乳、花药以及原生质体等方面 [1～6],目前存在再生频率低下、培养难度较大等问题[7].近几年在枇杷成熟胚子叶诱导再生方面相继展开了一些研究,但诱导产生不定芽仅限于红沙系品种[8,9],白沙系品种至今未有报道.为此,本试验拟进行白沙枇杷成熟种子子叶再生不定芽研究,试图建立白沙枇杷成熟子叶再生体系,为以后通过基因工程改良枇杷品种奠定基础.     

芜菁油菜叶肉原生质体再生植株

以芜菁油菜为材料，从无菌苗５—８天叶龄的叶片分离叶肉原生质体，然后以６×１０￣４／ｍＬ的密度用ＭＰ１－３液体培养基进行浅层培养。培养１０天后，用ＭＰ４培养基对ＭＰ１－２中的培养物进行稀释（１：１）．用ＭＰ５培养基对ＭＰ３中的培养物进行稀释（１：１），每次间隔１０天。在培养期间时常用手轻轻摇动培养物。用这种方法，再生细胞分裂并形成愈伤组织，愈伤组织经ＭＳ１培养基增殖３周，转到分化培养基上诱导植株分化，分化出的苗经诱导生根发育成完整的小植株（共５４株）．在研究中发现：①激素的种类、浓度及组合对刺激细胞分裂的作用差异明显；②提高培养基的ｐＨ值可明显地控制细胞褐化；③ＡｇＮＯ＿３（５ｍｇ／ｍＬ）有益于愈伤组织分化植株；④谷氨酰胺（８０ｍｇ／ｍＬ）和腺嘌呤（４０ｍｇ／ｍＬ）能提高愈伤组织的植株分化频率；⑤原生质体培养基对原生质体植株的分化亦有影响．     

山梨醇对枇杷原生质体分离和培养的效应

以山梨醇作为游离枇杷原生质体的渗透压稳定剂，效果较同质量分数的甘露醇差，但随着山梨醇质量分数的提高，原生质体得率递次升高，至１６％时，可达１．３×１０６ｇ－１．原生质体经液体培养在附加一定浓度糖类的培养基上，可出现第１次细胞分裂并持续分裂，１０％蔗糖加５％山梨醇是原生质体早期培养最合适的稳压剂兼Ｃ源，效果比单用蔗糖或山梨醇好．原生质体起源的愈伤组织，只有转入以３％或５％的山梨醇为Ｃ源的培养基中，才能分化茎原基并进而再生植株；转入含蔗糖的培养基，不能分化，继代数次，愈伤组织褐化．分化茎原基的愈伤组织与一般愈伤组织和褐化愈伤组织相比，其山梨醇含量和山梨醇脱氢酶的比活力，均显著升高．且愈伤组织内出现了一些结构变化的区域，这些区域的细胞没有中央液泡，只有小液泡，细胞器非常丰富．这种愈伤组织的显微结构特点与上述山梨醇代谢活跃相平行，共同构成茎原基分化的基础．     

花椒原生质体分离与培养研究

以花椒试管苗叶片、愈伤组织和悬浮细胞为试验材料,通过单因素试验研究酶液浓度、渗透压调节剂浓度对花椒原生质体分离的影响,并以花椒试管苗叶片分离出的原生质体为试验材料,研究培养基种类、培养密度、不同激素配比对花椒原生质体培养的影响。结果表明,酶液浓度、渗透压调节剂浓度对花椒原生质体分离有显著影响。在适宜条件下,用甘露醇作花椒原生质体分离的渗透压调节剂,浓度在0.6~0.7 mol·L^-1时分离效果最佳。以花椒叶片为原生质体分离材料的最佳酶液组成为CPW-0.7 mol·L^-1甘露醇+1.0%(w/v)纤维素酶R-10+1.5%(w/v)果胶酶,酶解时间为10 h,纯化后的原生质体产量和活力分别可达82.36×10⁵ 个·g^-1和72.74%。以愈伤组织和悬浮细胞为分离材料的最佳酶液组成均为CPW-0.6 mol·L^-1甘露醇+2.0%(w/v)纤维素酶R-10+0.5%(w/v)果胶酶,酶解12~14 h,纯化后的原生质体产量及活力分别为31.26×10⁵ 个·g^-1、59.15%和53.87×10⁵ 个·g^-1、63.92%。以花椒试管苗叶片为原生质体分离材料,分离纯化后的花椒原生质体在无激素的WPM培养基中,培养密度为1×10⁵个·mL^-1,培养第3天原生质体第1次分裂,2周分裂3~5次,原生质体28 d后形成微细胞团,培养60 d后可形成2 mm左右的愈伤组织。     

甘蓝型油菜子叶原生质体培养及植株再生研究

以甘蓝型油菜中双6号子叶为材料制备原生质体,采用固液结合培养,探讨了其原生质体分离、培养与再生的优化条件,获得了再生植株。结果表明:混合酶液(0.5%纤维素酶+0.1%果胶酶+0.2 mol/L甘露醇+80 mmol/L CaCl2)与SCM溶液按3∶7的比例混合,酶解14 h可获得高产率中双6号子叶原生质体;原生质体在前人设计的B、C固液相结合培养基上培养效果好;最佳分化培养基为E培养基+1.0 g/L 6-BA+0.1 g/L NAA+0.02 g/L GA3+30μmol/L AgNO3;所有再生芽均在无激素的MS培养基上生根。研究结果为建立成熟的甘蓝型油菜原生质体再生体系提供了新的配方与依据。     

葡萄原生质体培养中若干因素的研究

试验结果表明,处于对数生长期、再生能力强的培养细胞有利于原生质体分离和培养。原生质体分离和初期培养的适宜渗透浓度为0.5M;固体包埋法的效果明显优于液体培养,前者分裂率为后者的3.8倍,达13.8%;外源激素浓度以 B_5基本培养基添加 NAA 2.0mg/L,BA 2.0mg/L,原生质体分裂率最高;葡萄糖取代常规稳压剂甘露醇,效果显著,细胞分裂率是后者的2.6倍。     

盐地碱蓬愈伤组织原生质体的分离纯化

探索了盐地碱蓬愈伤组织原生质体提取过程中所需要的酶浓度及其比例、最适甘露醇浓度,以得到最佳盐地碱蓬原生质体的纯化方法。结果表明,原生质体分离的最佳条件是:甘露醇0.7 mol/L、纤维素酶3.0%、离析酶1.0%和果胶酶0.2%。     

矮牵牛愈伤组织诱导及原生质体的分离与纯化

研究了影响诱导矮牵牛(Petunia hybrid)形成愈伤组织和分离、纯化其原生质体效率的关键因素。结果表明,矮牵牛无菌苗叶片可在含1.0 mg/L 6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)和0.1 mg/L萘乙酸(NAA)的MS培养基上形成愈伤组织,用酶液(2%纤维素酶R-10 + 0.5%果胶酶Y-23 + 0.3%离析酶R-10,0.5 mol/L甘露醇)对继代培养10~15 d的愈伤组织在黑暗条件下静置酶解12 h,原生质体产量和活性分别达到3.4×10⁶个/g 和83%。     

花生原生质体分离与培养

以花生(Arachis hypogaea L.)品种花育20为材料,探讨不同的酶液浓度、酶解时间及渗透压对花生原生质体分离的影响.结果表明:原生质体分离的适宜酶液配比是2%纤维素酶(Cellulase Onozuka Rs)、0.2%果胶酶(Pectolyase Y-23),甘露醇渗透压调节剂的浓度为0.7mol/L,暗处理10h,叶片原生质体产量为4.86x105个/ml,存活率75.6%,愈伤组织原生质体产量为4.97x105个/ml,存活率75.4%.将分离的原生质体培养在添加1mg/LNAA和4mg/LBAP的改良MS液体培养基中.培养约2～3天后,细胞开始分裂.然后部分细胞继续分裂,并形成细胞团.培养5～6周后,将培养物转移到添加2 mg/L2,4-D和3 mg/L BAP的MS液体培养基(pH5.8)中进行培养.7～8周后,将形成的直径为1～2 mm的小愈伤组织转移到添加1 mg/LNAA和5 mg/LBAP的MS固体培养基上培养,小愈伤组织迅速生长.转移3-4周后,愈伤组织长至7～9mm.     

酿酒葡萄桂葡一号花粉原生质体分离条件初探

【目的】探索葡萄成熟花粉粒原生质体分离条件,为下一步原生质体杂交及遗传改良提供技术参考。【方法】使用低温—酶解法对酿酒葡萄桂葡一号花粉原生质体进行分离,探讨低温处理不同时间、不同花序位置和不同甘露醇浓度对原生质体分离的影响。【结果】随着低温处理时间的延长,原生质体分离得率越高,在0.6 mol/L甘露醇条件下,以处理7 d的原质体分离得率最高,达18.94%,其次是处理5 d。对于不同部位花粉,以中上部花药的原生质体分离得率较高,而以中部花序的花粉原生质体分离得率最高,达19.11%;中下部花药及已开始散粉的花药原生质体分离得率较低。相对于1.2 mol/L甘露醇,以添加0.6 mol/L甘露醇作为渗透压处理的花粉原生质体分离得率较高。【结论】低温处理时间、花粉成熟度及甘露醇浓度均对酿酒葡萄花粉原生质体的分离有明显影响。选用即将开花的中上部花药为材料,经0～4℃低温预处理5～7 d,并以0.6 mol/L甘露醇作为渗透压调节剂可获得大量有活性的花粉原生质体。