鸡NFATc3基因在不同表型肌肉中表达差异的研究

为探讨NFATc3在生长速度差异较大的2个品种鸡生长发育早期不同表型肌肉中的表达规律,利用实时荧光定量PCR技术检测清远麻鸡(慢生型)和隐性白羽鸡(速生型)三种表型肌肉(腓肠肌外侧头、比目鱼肌和趾长伸肌)NFATc3 mRNA在0、1、3、5、7、9周龄时的表达情况。结果发现:2个鸡品种中三种表型肌肉均呈现先下降后上升再下降的趋势,除隐性白羽鸡的腓肠肌外侧头、比目鱼肌外,2个鸡品种中其他表型肌肉的表达量均在2周龄最低;趾长伸肌和比目鱼肌NFATc3 mRNA的表达峰值在清远麻鸡中出现在3周龄,而在隐性白羽鸡中三种表型肌肉的表达峰值均出现在0周龄;总体而言,NFATc3 mRNA在比目鱼肌中的表达量要低于其在趾长伸肌和腓肠肌外侧头中的表达量;品种间比较发现,NFATc3 mRNA在清远麻鸡三种表型肌肉的表达量在3周龄时高于隐性白羽鸡。研究结果提示,鸡肌肉NFATc3表达发育模式具有品种、年龄和表型特异性,并可能与鸡肉品质存在关联。     

如皋鸡常规肉品质遗传规律研究

试验对如皋鸡的肌肉品质进行测定,进一步了解其生长性能和遗传特性,为指导育种提供理论依据,丰富这一优良品种的基本素材.研究结果表明:各测定周龄体重公母间存在极显著差异;12周龄肌肉品质方面,除剪切力外,其余性状在性别间差异均不显著;遗传力结果显示,各性状之间遗传力有很大差异.     

鸡MyD88、TRIF和TIRAP基因荧光定量PCR检测方法的建立

为对鸡髓样分化因子88(MyD88)、包含TIR结构域的IFN诱导连接蛋白(TRIF)和包含Toll/IL-1的接头蛋白(TIRAP)基因的进行定量检测,本研究参考鸡MyD88、TRIF和TIRAP基因序列,设计并合成特异性引物,以β-actin为内参基因,建立检测对应基因的实时荧光定量PCR方法.结果表明,4个基因的扩增效率为96.7%～102%,相关系数均在0.997以上;特异性强,扩增产物均形成单一的特异性熔解峰;敏感性高,可以检测到对应基因达10-13g/mL;重复性好,变异系数均在1.5%以下.本研究所建立的荧光定量PCR方法可用于鸡MyD88、TRIF和TIRAP基因表达研究.     

利用基因芯片技术研究隐性白鸡不同时期肌肉组织相关差异表达基因

应用包含13319条鸡基因探针序列的表达谱芯片,对从隐性白鸡不同时期肌肉组织抽提及纯化的cRNA进行芯片杂交,并对基因表达谱进行分析,旨在筛选隐性白鸡不同时期肌肉组织相关差异表达基因,探讨造成不同时期肌肉组织生长发育的分子生物学机理。结果显示,在不同生长时期（2周和12周）共筛选出差异表达基因78条（表达上调34条,表达下调44条）,其中已知功能基因39条,主要涉及生长发育、分子代谢、免疫应答、生物合成、细胞通信以及蛋白质合成与分解等相关基因,其中包括一些尚未在GenBank上登陆的序列,推测可能是未知的新基因,它们在鸡生长发育、能量代谢等的过程所起到的作用还需进一步证明。     

鸡内质网分子伴侣Calnexin基因的生物信息学与组织表达谱分析

为探明鸡内质网分子伴侣钙联结蛋白（Calnexin,CNX）基因特性及蛋白结构和功能,以鸡CNX基因序列为对象,利用生物信息学方法分析了12个物种该分子核苷酸和氨基酸序列的同源性及蛋白的结构和功能,并应用qRTPCR法分析了35日龄海兰白鸡30个组织中CNX mRNA组织表达谱。结果表明,CNX核苷酸序列及氨基酸序列在不同物种中具有一定保守性,该蛋白属于跨膜蛋白,不存在信号肽,酶分类可能属于EC 1.11.1.9,并与糖类特异性结合发挥活性。鸡CNX mRNA在鸡组织中广泛表达,其中在回肠、动脉和腺胃组织中表达量很高,表明CNX是鸡机体内必需蛋白分子,可能在消化系统和心血管系统中发挥更为重要作用。     

鸡肌内脂肪沉积相关候选基因筛选

本研究对课题组前期在京星黄鸡转录组研究中筛选到的与肌内脂肪（IMF）差异沉积相关的14个候选基因进行验证,检测其在中外两个鸡种群体中与胸肌IMF沉积的关联性。以98日龄慢速型地方鸡京星黄鸡和42日龄快速型白羽科宝肉鸡胸肌组织为素材,通过胸肌甘油三酯（TG）含量区分高低表型组,并检测候选基因在组间的基因表达差异。结果表明,在京星黄鸡胸肌TG高、低组间ATP结合盒亚家族B成员8（ABCB8）、脂联素（ADIPOQ）、第6号染色体开放阅读框65（BEND6）、CD74分子（CD74）、核糖基5-磷酸转移酶（FKTN）、组蛋白乙酰转移酶1（HAT1）、硫酸乙酰肝素-氨基葡萄糖3-磺基转移酶5（HS3ST5）、介体复合物亚基4（MED4）、肿瘤坏死因子超家族成员8（TNFSF8）和TNFAIP3相互作用蛋白1（TNIP1）共10个基因表达差异显著（P<0.05）;在科宝肉鸡TG高、低组间ADIPOQ、BEND6、FKTN、HAT1、HS3ST5、MED4和TNIP1共7个基因表达差异显著（P<0.05）;ADIPOQ、FKTN、HAT1、HS3ST5、MED4和TNIP1共6个基因在两个品种中差异表达趋势一致（P<0.05）。本研究提供了鸡IMF沉积相关新候选基因,为IMF分子调控机理研究和相关分子标记筛选研究奠定了良好的基础。     

鸡lncRNA-MSTRG.15568.9及其预测靶基因的表达

试验旨在了解在鸡睾丸中高表达的1个长链非编码RNA （long non-coding RNA,lncRNA）及其预测靶基因的时空表达规律,研究二者在鸡弱精子症中的调控作用。根据弱精子症和正常北京油鸡公鸡睾丸转录组测序筛选到的1个高表达的lncRNA （MSTRG.15568.9）,采用顺式（cis）作用模式预测其潜在靶基因SPAG4（sperm-associated antigen 4）,进一步采用实时荧光定量PCR方法进行表达量分析。分别选择3只0、5、20、30、45、60周龄正常北京油鸡公鸡,检测MSTRG.15568.9与SPAG4基因在不同周龄公鸡睾丸中的表达量差异;选择30周龄3只正常公鸡,采集睾丸、肝脏和脾脏等8个部位组织样品,检测MSTRG.15568.9与SPAG4基因在不同组织间的表达规律;选择45周龄弱精子症公鸡和正常公鸡各3只,对比MSTRG.15568.9与SPAG4基因在睾丸的表达量差异。结果显示,MSTRG.15568.9与SPAG4存在明显的时空表达差异,且二者表达趋势基本一致。在不同周龄的鸡睾丸组织中,MSTRG.15568.9和SPAG4的表达趋势相近,MSTRG.15568.9在20周龄的表达量显著高于0、5、30、45、60周龄（P<0.05）,0和5周龄表达量显著低于20、30、45和60周龄（P<0.05）;SPAG4在45周龄表达量最高,其次是20周龄（P<0.05）。MSTRG.15568.9和SPAG4在睾丸和肝脏中的表达量均显著高于脾脏、肾脏等组织（P<0.05）;在正常睾丸组织中的表达量均显著高于弱精子症睾丸组织（P<0.05）。综上所述,MSTRG.15568.9与SPAG4基因具有较明显的组织表达特异性,且MSTRG.15568.9可能调控SPAG4基因的表达,参与精子发生与精子活力调控;但其具体作用机制需要进一步探索。本研究可为鉴定与鸡弱精子症调节机制相关的功能基因提供参考。     

兔卵母细胞体外成熟过程中生长分化因子9基因的表达

本研究参考人、小鼠、羊等物种的GDF9基因序列设计引物,利用RT-PCR法扩增兔GDF9部分cDNA序列,实时荧光定量PCR法检测该基因在兔卵细胞体外成熟过程中的表达变化。结果获得兔GDF9基因289bp的部分cDNA序列,与人、猪、山羊相对应序列的同源性分别为81%、79%、76%。在兔卵母细胞体外成熟过程中,GDF9的表达是呈动态变化的,以0h为对照,8h表达量急剧下降,为0h的0.0124倍,16h和24h表达量分别为0h的1.4559倍和1.9096倍。     

鸡肠道c-kit及其配体干细胞因子的胚后表达

采用实时荧光定量PCR技术,分别对胚后1、10、20和40日龄三黄鸡的十二指肠、空肠、回肠、盲肠和结肠肠壁组织中c-kit及其配体干细胞因子(SCF)mRNA的表达进行相对定量,初步阐明了正常鸡肠道中c-kit及其配体SCF的mRNA表达量的胚后变化规律。结果发现胚后不同肠段中c-kit mRNA的表达量随日龄增长呈逐渐降低趋势,且20日龄时c-kit mRNA表达极显著低于1日龄。SCF mRNA的表达量从1日龄至10日龄逐渐升高,10日龄时mRNA表达最高,之后慢慢下降,至20日龄时SCF mRNA表达显著低于10日龄。各肠段在不同日龄时的c-kit和SCF mRNA表达量的变化表现如下:1日龄时,结肠中c-kit mRNA表达量最高,回肠最低;十二指肠中SCF mRNA表达量最高,盲肠最低。10日龄时,结肠中c-kit mRNA表达量最高,空肠最低;结肠中SCF mRNA表达量最高,盲肠最低。20至40日龄时,变化趋于稳定,均是回肠中c-kit和SCF mRNA表达量最高,盲肠最低。结果表明鸡肠道的胚后发育和功能形成是一个逐渐成熟的过程,而且c-kit与其配体SCF之间存在着密切的联系。     

品种和体重对猪肌肉生长抑制素表达的影响

本文旨在研究猪的体重和品种对其背最长肌的肌肉生长抑制素基因表达的影响,并对猪100kg时的胴体性状与肌肉肌肉生长抑制素基因表达量的相关性进行分析。试验采用荧光定量PCR方法,以β-actin基因为内标,研究不同体重(20、50和100kg)和品种(汉普夏猪和长白×撒坝猪)对猪背最长肌的肌肉生长抑制素基因表达的影响,同时考察试验猪在100kg时的胴体肉质指标。结果表明:①猪背最长肌中肌肉生长抑制素的表达随体重的增加呈上升的趋势(P>0.05);②相同体重条件下长撒猪背最长肌中肌肉生长抑制素表达均显著高于汉普夏猪(P<0.05),其中20kg时达到极显著水平(P<0.01);③肌肉生长抑制素的表达与瘦肉率呈极显著的负相关(P<0.01),与背膘厚则呈极显著的正相关(P<0.01),与滴水损失和肌内脂肪的相关性不显著(P>0.05)。本研究结果表明猪背最长肌的肌肉生长抑制素基因的表达量随体重增加而提高,品种间差异显著,并且肌肉生长抑制素基因的表达与瘦肉率、背膘厚存在显著的相关性。     

如皋黄鸡连产性状及其遗传参数分析

本文通过对如皋黄鸡两个世代(9世代866只,10世代423只)常规选育性状(开产日龄、开产体重、开产蛋重及40周龄产蛋数)和连产性状(连产周期、平均连产长度、最长连产长度、平均间歇天数、最长间歇长度及连产强度)进行统计分析,估计各性状的遗传力及之间的遗传相关并分析表型相关。结果表明:与常规选育性状相比连产性状的变异系数较大;9世代连产周期遗传力最高为0.523,开产体重和平均连产长度为中等遗传力性状(0.417和0.310),开产日龄、开产蛋重、40周龄产蛋数、最大连产长度、平均连产间歇天数、最长间歇天数及连产强度为低遗传力性状(0.068~0.244);40周龄产蛋数与平均连产长度、连产强度呈正遗传相关和极显著表型相关,与连产周期、最长连产间歇呈负的遗传相关和极显著表型负相关。以40周龄产蛋数为主选目标间接使10世代连产周期数下降,连产长度延长,而连产周期数的遗传力下降。综上,与40周龄产蛋数相比,连产性状中的连产周期和平均连产长度的遗传力估计值较高,与其遗传相关和表型相关均较高,可将连产性状作为选育指标对如皋黄鸡进行进一步选择。     

TIMP3基因在长白猪和通城猪不同组织及不同时期骨骼肌中的表达分析

采用定量PCR(Quantification PCR, QPCR)方法,比较分析了基质金属蛋白酶3(TIMP3)基因在长白猪和通城猪间的组织表达谱,同时比较分析了其在这2个猪种胚胎期(33, 45, 55, 65, 70和90 d)和出生后(0, 9, 30, 60, 120和160 d)骨骼肌生长发育过程中的差异性表达。组织表达谱结果表明,TIMP3基因在不同猪种的各组织器官中广泛表达,除在腿肌和胰腺中有所差异外,TIMP3基因在两个猪种间的组织表达谱基本是一致的,在肺脏和子宫中表达最高,在背肌、脾脏和胃中表达较高,在肠、心脏、肾脏和肝脏中表达最低。与出生后阶段相比,TIMP3基因在2个猪种胚胎期均显著高表达(P＜0.05),但其表达变化趋势在2个猪种间存在差异;与在长白猪胚胎期相比,该基因在通城猪胚胎期中的高表达水平维持在一个更大的范围内。本试验结果提示,TIMP3基因可能参与不同类型猪种骨骼肌生长发育异步性的调控,影响到不同类型猪种的产肉性状。     

促卵泡激素受体基因第2内含子多态性对如皋黄鸡繁殖性状的遗传效应分析

试验以260只如皋黄鸡为素材,采用飞行质谱技术对位于促卵泡素受体(follicle stimulate hormone receptor,FSHR)基因第2内含子的3个SNPs位点进行检测,并对其与繁殖性状的相关性进行了分析。结果表明,C+29329A突变对开产日龄、开产蛋重及40周龄蛋重有显著影响(P<0.05);而C+30582G只与40周龄总产蛋数呈显著相关(P<0.05);G+51411A则对开产日龄、开产体重及40周龄总产蛋数有显著影响(P<0.05)。研究结果显示,FSHR基因有望成为选育高产蛋鸡的分子标记,辅助选育、开发中国地方鸡品种资源。     

THBS3基因在长白猪和通城猪不同组织和不同时期骨骼肌中的表达分析

本研究主要探究血小板反应蛋白3 (thrombospondin-3,THBS3)基因在不同组织及不同时期骨骼肌生长发育过程中的表达规律。利用实时荧光定量PCR方法对THBS3基因在长白猪和通城猪中的组织表达谱,以及在胚胎期(33、45、65、70和90 d)和出生后阶段(0、9、30、60、120和160 d)骨骼肌中的差异表达进行了比较分析。结果表明,THBS3基因广泛表达于长白猪和通城猪各个组织器官,除胃和肠中的表达存在差异外,其在两个猪种中的组织表达谱基本一致,在肺脏中表达量最高。THBS3基因在长白猪和通城猪胚胎期骨骼肌中的表达水平均显著高于出生后阶段(P<0.05),但胚胎期骨骼肌中的表达模式在两个猪种间存在一定差异,THBS3基因表达峰值出现在长白猪胚胎期45 d,而其在通城猪中表达峰值出现在胚胎期65 d。结果提示,THBS3基因参与了猪骨骼肌生长发育过程及不同类型猪种骨骼肌生长发育异步性的调控。     

Expression Analysis of THBS3 Gene in Different Tissues and Skeletal Muscles at Different Periods from Landrace and Tongcheng Pigs

To study the expression pattern of THBS3 gene in different tissues and during skeletal muscle development, the THBS3 gene expression in different tissues and skeletal muscles during prenatal periods (33, 45, 65, 70 and 90 d) and postnatal periods (0, 9, 30, 60, 120 and 160 d) from Landrace and Tongcheng pigs were detected by Real-time quantification PCR.The results showed that THBS3 gene widely expressed in all tissues examined, exhibiting similar spatial expression patterns with expression peaks in lung in both pig breeds except in stomach and intestine.Moreover, although THBS3 gene showed a significant higher expression level in gestation than after birth in Landrace and Tongcheng pigs (P<0.05), it exhibited different expression patterns between Landrace and Tongcheng pigs, the expression peak was detected at gestation day 45 in Landrace pig, while was detected at gestation day 65 in Tongcheng pig.The results suggested that THBS3 gene involved in skeletal muscle growth and development in pigs, as well as the regulation of asynchronization of skeletal muscle development in different pig breeds.     

70周龄长顺绿壳蛋鸡HO-1基因在不同组织中表达差异研究

为研究HO-1基因在70周龄长顺绿壳蛋鸡不同组织中的表达差异,选取70周龄长顺绿壳蛋鸡9只（每种基因型3只）,采集每只鸡的大脑、肝脏、肾脏、卵巢、输卵管和子宫组织,提取其总RNA进行反转录,利用实时荧光定量 PCR方法检测样品中HO-1基因的表达水平,比较同一组织不同基因型及同一基因型不同组织间HO-1基因mRNA 的表达差异。结果表明,在同一组织不同基因型及同一基因型不同组织间HO-1基因的表达存在差异;其中HO-1基因在肝脏中表达量最高,且3种基因型间肝脏表达量存在极显著差异（P< 0.01）;白壳蛋鸡子宫中HO-1基因表达量极显著高于其他两种（P< 0.01）,纯合绿壳蛋鸡与杂合绿壳蛋鸡无显著差异（P> 0.05）。     

牦牛不同组织SREBP-1基因表达差异分析

在不同季节分别采集青海省祁连县、大通县和湟中县牦牛的肝脏、肾脏和结肠,提取Total RNA,在逆转录聚合酶的作用下生成cDNA,利用Real-time PCR检测牦牛甾醇类调控元件结合蛋白1(SREBP-1)基因mRNA的表达水平。结果显示,牦牛不同组织中SREBP-1基因相对表达量由大到小顺序为,肝脏、肾脏、结肠。SREBP-1基因在不同季节中除了2016年春季的牦牛,其他的均以肝脏样品中的SREBP-1 mRNA相对定量拷贝数最高。不同季节间SREBP-1基因在2015年春季和2016年春季中相对表达量差异极显著。3个组织间SREBP-1基因在结肠和肝脏中相对表达量差异呈极显著(P<0.01),在肾脏和肝脏中相对表达量差异显著(P<0.05)。     

鸡、鹌鹑及其杂交禽胚胎肌肉发育过程中MSTN和p21基因的表达规律

旨在研究MSTN和p21基因在鸡、鹌鹑和杂交禽胚胎肌肉发育过程中的表达规律,比较这2个基因在杂交禽与亲本鸡和鹌鹑中的差异表达,探讨MSTN和p21基因与肌肉发育的关系。通过人工受精获得鸡(♂)与鹌鹑(♀)杂交禽蛋,与鸡蛋、鹌鹑蛋按照鸡标准孵化条件同批入孵,采集第7～17天活胚胸肌组织,应用实时荧光定量PCR技术检测MSTN和p21基因在3个物种中每一天mRNA的相对表达量。MSTN和p21基因在胚胎肌肉发育的第7～17天均有表达,这2个基因mRNA的表达在鸡胚中第9天到达第1次峰值,在鹌鹑中第7天到达第1次峰值,后都随胚胎的发育表达水平上升,并维持相对稳定的高水平表达。杂交禽的表达规律与鸡一致,也在第9天达到峰值,而p21mRNA表达极显著高于鸡和鹌鹑(P<0.01)。MSTN mRNA表达规律与成肌细胞退出细胞周期的时间规律一致;在胚胎肌肉发育过程中,MSTN基因特异性上调p21的表达。