胶体金快速诊断方法对鸡减蛋综合征病毒的检测

选择15nm的胶体金颗粒作为标记物，制备了鸡减蛋综合征病毒（EDSV）胶体金试纸条。该试纸条能检出浓度约为1．35μg／mL的纯化EDSV，用该试纸条检测135份临床样本，并与HA方法相比较，结果显示，二者的阳性符合率为89．8％。特异性试验结果显示，与鸡新城疫病毒（NDV）、鸡传染性腔上囊病病毒（IBDV）、鸡传染性支气管炎病毒（IBV）无交叉反应。表明，该试纸条用于检测EDSV具有快速、操作简便、特异性强等优点，可用于大批量抗原样本的检测。     

鸡减蛋性病毒诊断试剂盒研制成功

近日 ,由天津市畜牧兽医研究所黄金海副研究员主持完成的“鸡减蛋性病毒诊断试剂盒的研制与应用”通过了天津市科委组织的专家验收。该试剂盒可一次诊断出4种病毒。该项目的研究揭示了鸡血清抗体与局部抗体的关系 ,其中血清抗体与卵黄抗体密切相关 ,与胆汁抗体水平有一定的相关性 ,但与气管IgA抗体水平差异较大。该项目研究建立了鸡减蛋性病毒病抗体检测EHSA方法 ,可用于血清、卵黄和气管局部分泌抗体的检测。在此基础上 ,研究人员应用抗鸡Ig轻链单克隆抗体酶结合物 ,研制出鸡新城疫、禽流感、传染性支气管炎、减蛋综合症4种病毒病抗体水…     

银加强胶体金探针检测鸡减蛋综合征病毒的研究

本研究首镒报道应用银加强胶体金探针检测减蛋综合征病毒获得成功。经初步提纯后的ＥＤＳ７６病毒免疫制备高免血清，按常规方法提取兔抗ＥＤＳ７６病毒的ＩｇＧ，成功地建立了检测ＥＤＳ７６病毒抗原的银加强胶体金探针法，并确定了操作程序的最佳试验条件为；兔抗ＥＤＳＶＩｇＧ工作浓度为１：４００，金标记羊抗兔ＩｇＧ的工作浓度为１：２０，银染色的时间为１５ｍｉｎ。用该法对提纯的ＥＤＳ７６病毒抗原的最低检出一为０．１１     

鸡减蛋综合征病毒的分离和初步鉴定

河北省秦皇岛旧１９９８年１０月至１９９９年３月间３０多个鸡场约２７万只鸡发生一起以产蛋率下降３０％以上,同时伴有软壳蛋、退色蛋的疾病,病程１．５￣２个月。采取输卵管、脾脏和肛拭粪样接种于鸭胚,分离到具有血凝性的病毒,用抗ＥＤＳ－７６Ｖ阳性血清与分离毒做ＨＩ试验,结果分离毒的血凝性可被抗ＥＤＳ－７６Ｖ的阳性血清所抑制。因此初步认为秦皇岛市也有ＥＤＳ－７６的发生。     

减蛋综合征病毒的分子生物学

减蛋综合征病毒具有典型的腺病毒形态结构,其基因组长33.2kb,分子量为22.6×106Da,各地分离株间有变异。以DNA复制为界,EDSV基因组分为早期E区(包括Eib、E2a、E2b、E3和E4区)和晚期L区(L1－L5区),早期区编码病毒复制所必需的酶类;晚期区编码五邻体、六邻体等主要结构蛋白,以及DNA结合蛋白、末端前体蛋白等病毒包装蛋白。EDSV分子生物学的深入研究为建立本病的诊断与防制技术,开发理想的表达载体系统,及确定其在病毒学中的分类地位奠定了基础。     

鸡减蛋综合征病毒的血清学关系研究

利用血凝抑制试验和病毒中和试验对ＥＤＳ地方分离毒ＨＳ－１和国际标准毒ＡＶ－１２７之间的血清学关系进行了研究。分离病毒的血凝特性能够被ＡＶ－１２７高免血清、ＨＳ－１高免血不表所抑制,而不能与ＮＤ阳性血汪民生交叉反应;在病毒中和试验中,ＨＳ－１毒株与国际标准毒株ＡＶ－１２７能够发生交叉中和反应,且两毒株的亲缘值为９５％。结果表明,两者为同一血清型。     

鸡减蛋综合征的诊断与防控

鸡减蛋综合征（eggdrop syndrome,EDS-76）是由减蛋综合征病毒（EDSV）引起的一种以产蛋鸡产薄壳或无壳蛋、产蛋率严重下降为主要特征的传染病。该病在世界范围内的发生和流行给养鸡业带来了巨大的经济损失。从减蛋综合征病毒的病原、流行病学和诊断等方面进行阐述,以期为科学防控该病提供参考。     

鸡减蛋综合征病毒的理化特性鉴定

利用电镜技术、细胞培养技术及琼脂糖凝胶电泳技术鉴定了鸡减蛋综合征病毒EDSVHS - 1株的理化特性 ,该病毒形态为球形 ,直径为 70～ 80纳米 ,无囊膜 ,对氯仿 ,乙醚不敏感 ,耐酸 ,病毒核酸类型是DNA ,不分节段 ,分子长度测定为 33.6× 10 3 个碱基。     

云南省禽流感、新城疫与3种免疫抑制性病原共感染的检测

为调查云南省禽流感病毒、新城疫病毒与免疫抑制性病毒混合感染的情况,对云南省2007年1月～2009年10月期间145份禽流感阳性及30份新城疫阳性样品进行禽网状内皮增生病病毒(REV)、J亚群禽白血病病毒(ALV-J)及鸡传染性贫血病毒(CIAV)的检测。禽流感阳性样品中ALV-J的感染阳性率为15.9%,REV的感染阳性率为22.8%,CIAV的感染阳性率为26.9%;新城疫阳性样品中ALV-J的感染阳性率为13.3%,REV的感染阳性率为23.3%,CIAV的感染阳性率为26.7%;共有30份样品发生多重感染,多重感染率为17.1%。对不同区域的4份禽白血病病毒阳性样品、10份禽网状内皮增生病病毒阳性样品、10份禽传染性贫血病毒阳性样品进行了序列比对和系统发育分析。结果表明,云南ALV-J毒株gp85基因与国内外毒株核苷酸及氨基酸同源性分别介于80.4%～96.7%、85.2%～94.5%;REV毒株env基因核苷酸及氨基酸之间的同源性为98.8%～99.8%、97.7%～99.5%;CIAV毒株vp2基因核苷酸及氨基酸之间的同源性为92.4%～100.0%、93.7%～100.0%。     

禽流感病毒和新城疫病毒二联RT-PCR检测方法的建立

参照国内外已发表的禽流感病毒(AIV)和新城疫病毒(NDV)的基因序列及其相关的RT-PCR检测方法,根据禽流感病毒M蛋白基因和新城疫病毒NP基因各设计一套特异性通用引物,扩增目的带分别为600bp和340 bp。通过对相关病毒检测,建立了AIV和NDV通用型二联RT-PCR检测方法。该方法具有快速、敏感、特异等优点,可为AIV和NDV的检测、流行病学调查及疫苗使用等奠定基础。     

鸡IBV、NDV和AIV多重RT-PCR检测方法的初步建立

根据鸡传染性支气管炎病毒M基因、禽流感病毒NP基因和新城疫病毒F基因各设计1对引物,初步建立了针对鸡传染性支气管炎(IB)、新城疫(ND)和禽流感(AI)的多重RT-PCR鉴别诊断方法,并对其特异性和敏感性进行了检测。结果表明,所设计的3对引物可对同一样品中的IBV、NDV和AIV进行特异性扩增,所扩增的目的片断的长度分别为333bp(IBV)、438bp(NDV)和196bp(AIV);建立的多重RT-PCR检测方法能够检测出1ng/μLAIV、1ng/μLNDV和10ng/μLIBV的cDNA,说明该检测方法特异性强,敏感性较高。本研究所建立的多重RT-PCR方法可用于上述3种鸡病毒性呼吸道疾病的快速鉴别诊断,在临床诊断和流行病学调查方面具有较好的应用前景。     

鸡新城疫——减蛋综合征二联油佐剂疫苗的研制

应用鸡新城疫（ＮＤ）ＬａＳｏｔａ株和减蛋综合征（ＥＤＳ－７６）ＬＡ３株,分别接种鸡胚和鸭胚增殖病毒,血凝价分别达≥１：１２８０和≥１：１００００时,收取病毒,经福尔马林灭活,按一定比例加入吐温－８０、油佐剂制成ＮＤ－ＥＤＳ－７６二联疫苗,经无菌检验、安全性试验、剂量选择、保护性试验、免疫效果和免疫期测定及保存期观察,结果表明：该二联苗安全性好,于蛋鸡开产前１月皮下注射１ｍＬ／只,２５ｄ后ＮＤ和ＥＤＳ－７６抗体可先后达到高峰,免疫期１年。保存期４℃为１年,２０℃为３个月。     

鸭病毒性肝炎病毒、禽流感病毒和新城疫病毒三重PCR诊断方法的建立及应用

根据GenBank中已登录的鸭病毒性肝炎病毒（DHV）、禽流感病毒（AIV）和新城疫病毒（NDV）的基因序列,设计了3对特异性引物,建立了DHV、AIV和NDV的多重PCR鉴别诊断技术,并对体系进行了优化和特异性、敏感性试验。结果表明,该体系所扩增的3种病毒基因片段大小分别为174bp（DHV）、264bp（AIV）和362bp（NDV）,且特异性、敏感性良好,能够分别检出1pg AIV、10pg DHV和10pg NDV的病毒RNA。对鸭临床样品的检测结果表明,该方法与病毒分离鉴定符合率90%以上,可用于临床样品的快速检测。     

绿头鸭卵黄硒含量与禽流感新城疫病毒抗体滴度关系探讨

绿头鸭(Anas platyrhynchos)是大庆龙凤湿地的优势物种,为研究绿头鸭卵黄硒含量与病毒抗体之间的相关关系,采用血凝抑制试验及原子荧光光谱法(AFS)检测105枚绿头鸭卵黄内硒含量及H1、H5、H9亚型禽流感病毒(AIV)和新城疫病毒(NDV)抗体。结果表明,卵黄硒含量为0.48μg/g±0.15μg/g;卵黄内H1、H5、H9亚型AIV和NDV抗体阳性率分别为:100%、59.05%、71.43%、68.57%;其评价抗体滴度分别为:6.17log2、2.89log2、3.34log2、4.22log2。经相关分析结果表明,卵黄内H1、H5、H9亚型AIV和NDV抗体滴度与卵黄硒含量的相关系数分别为:0.077、0.714、0.690、0.611。由此可见,龙凤湿地绿头鸭种群卵黄硒含量与相关病毒抗体之间呈明显的正相关,说明硒元素对动物机体抗病毒能力起到一定的增强作用。     

H5亚型禽流感病毒HA基因在重组杆状病毒中的表达及检测

利用杆状病毒表达系统对H5亚型禽流感病毒HA基因在sf9细胞中的表达进行了研究。首先将pUCm—T—H5HA质粒用BamHⅠ及NotⅠ酶切，获得HA基因片段，同时杆状病毒转座载体质粒pFastBacⅠ也用BamHⅠ及NotⅠ酶切，然后用T4DNA连接酶连接，构建了重组质粒pFastBac—H5HA。再将该重组质粒转化DH10Bac感受态细菌，在体内进行重组，并经三重抗性与蓝白斑筛选，得到杆状病毒重组质粒Bacmid—H5HA。将Bacmid—H5HA转染sf9细胞，获得重组杆状病毒，经SDS—PAGE和Western blotting检测表明，HA蛋白在重组杆状病毒中获得表达。     

基因芯片技术及其在微生物检测中的应用

基因芯片技术是20世纪90年代发展起来的一门高新技术。应用该技术可以对大量的遗传信息进行快速、高通量、并行检测,解决了传统检测方法中遇到的难题,已广泛应用于基因表达分析、突变检测、核酸多态性分析、基因测序和药物筛选等几乎所有的生物学研究领域。作为一种高通量的基因检测方法,基因芯片技术在微生物检测和鉴定方面的应用越来越多,具有巨大的应用潜力。文章简要介绍了基因芯片技术的基本概念和技术流程,综述其在微生物检测和鉴定中的应用。     

基因芯片技术及其在病原微生物检测和研究中的应用

基因芯片技术是20世纪90年代发展起来的一项重要的生物技术,具有快速、高效、高通量等优点,可广泛应用于疾病的诊断和治疗、药物基因组图谱、药物筛选、中药物种鉴定、农作物的品种选育、司法鉴定、食品卫生监督、环境监测、国防等许多研究领域.基因芯片技术作为一种高新技术,在病原微生物检测、病毒分型和流行病学调查、致病机制研究、耐药性监测、细菌功能基因组学与细胞微生物学研究以及环境微生物学研究等方面的应用越来越多,并有巨大的应用前景.论文就基因芯片技术的原理、分类、主要技术流程以及在病原微生物检测和研究中的应用进行了阐述.