转基因动物培育方法及其应用

转基因动物培育研究是近十年来人们开辟的一个崭新的热门研究领域,是外源基因转移从细胞水平到机体水平的一大飞跃。进入80年代以来,人们应用转基因技术,已将来源于人、动物、细菌和病毒等许多种不同的外源基因导入小鼠、大鼠、兔、羊、牛的生殖细胞,成功地培育出了相应的转基因动物,使得动物的基因操作能以前所未有的规模向前发展。转基因动物已经成为考察发育和发育的基因调节机理、致癌基因的作用和免疫系统内部错综复杂的细胞反应的有效工具。它还可以用来进行动物新种培育以及肿瘤和遗传性疾病防治。一、转基因动物的培育方法1.DNA 的显微注射将外源 DNA 经显微注射直接导入受精卵的雄前核是目前应用最广泛也是最成功的转基因技术。将注有外源基因的受精卵移     

家兔的转基因研究及其应用

自 Palmiter等 (1982)把大鼠生长激素基因导入小鼠受精卵获得“超级巨鼠”以来，世界各国科学家对家畜的转基因研究产生了极大的兴趣，并相继在兔、羊、猪、牛、鸡、鱼等动物上获得转基因成功。家兔既是常用的实验动物，又是重要的经济动物。从其自然特性来看，转基因家兔的研究与培育，不仅可以促进其自身基因表达和调控的研究，而且能为大家畜的转基因研究提供重要的技术依据。 1家兔的转基因技术 1.1显微注射法 　　显微注射法是采用显微注射仪对受精卵进行注射的一种技术，其基本原理是用精细的显微注射针将外源基因直接注入动物受精卵…     

转基因鸡研究进展

自1966年微注射技术和1980年转基因小鼠的诞生,转基因动物的研究已由技术上的成功转向复杂的生物试验体系的研究。单个基因的功能,基因突变的效果,尤其是转录调控元件的功能等都需依靠转基因动物来研究。体外操作的基因及遗传突变只有导入动物基因组中才能研究其体内功能。同时,转基因动物在农业、生物医疗与制药业等领域具有广阔的应用前景。家禽的转基因研究晚于哺乳动物,由于其具有与哺乳动物完全不同的生殖特点,转基因研究遇到了更大阻力。     

禽类转基因研究进展

转基因动物是指借助基因工程技术将体外重组的基因导入受精卵或早期胚胎，生产的带有外源基因的动物(Tramgemc Anima1)。整合到动物基因组上的外源结构基因称为转基因。在哺乳动物、鱼类方面转基因技术已取得了很大突破，得到的转基因动物在生产实践中已展示很好的应用前景。而禽类由于其生殖生理的独特性，目前用显微注射存在着以下困难：1、不易获得大量的受精卵；2、受精时多精入卵的干扰使雄原核不易识别；3．卵子重新输入母体输卵管内的技术或受精卵体外孵化技术难度大。     

哺乳动物胚系外源基因的导入及表达

哺乳动物胚系外源基因的导入和表达研究是以显微注射技术为主要导入手段的基因工程和移植胚胎学的有机结合。以哺乳动物胚系作为研究对象远不如鱼、蛙类受精卵和原、真核细胞方便,在受精卵制备、体外培养、移植发育及外源基因导入等方面均受到复杂技术条件的限制。随着实验手段和胚胎移植技术的不断改进,近几年来这一研究领域在基因导入方法和动物新种构建方面已有重大突破,“巨型”小鼠构建的成功,预示     

嵌合体鸡及其在基因组操作中的应用

在哺乳动物,利用显微注射等方法,把外源基因导入受精卵的雄性原核,再把经遗传修饰的合子移植到受体母畜体内,使之发育成转基因后代己获成功。然而在禽类,由于其生殖解剖及生殖生理比较独特,因此把外源DNA导入其基因组的技术,还存在着一系列问题,如处死法获得单细胞卵子、受精时多精入卵的干扰使雄性原核不易识别以及把卵子重新移入母鸡输卵管内等过程中。致使在哺乳动物中已经广泛应用的转基因技术,不适     

转基因动物及其在畜牧生产中的应用

转基因动物的研究最初是在小鼠体内进行的。转基因小鼠的成功大约经 9年的研究。从 2 0世纪 80年代初这项技术诞生的那天起 ,就在改良畜禽生产性状 ,提高畜禽抗病力及利用转基因畜禽生产非常规畜产品 (如人类药用PRO) ,有关癌基因机制的分析 ,免疫机制的研究以及对遗传疾病的了解等方面显示了广阔的应用前景。1　什么是转基因动物转基因动物是指以实验方法导入外源基因 ,在染色体组内稳定整合并遗传给后一代动物。转基因动物的生产步骤包括以下五步 :第一步 :目的基因的选择 ;第二步 :将重组基因导入受精卵 ,基因导入可采用显微注射法、反…     

转基因动物与动物营养

1 转基因技术 1.1 显微注射法 在众多转基因技术中,显微注射法因其出现早,研究深入,被推荐为一种最经典有效的方法。显微注射法的基本原理是将外源基因直接用显微注射器注入受精卵(雄原核)内,利用受精卵分裂繁殖中DNA的复制过程,将外源基因整合到DNA中进行表达。显微注射法的优点是导人外源基因的效率较高,常能获得良好的表达,操作简单,易于掌握,注射的基因不受片段大小限制,无需载体。此法不足之处为外源基因绝大部分是头尾相连,拷贝数不等地随机整合到受体染色体上,因而其表达水平在转基因个体间常不稳定。另外,显微注射法不能将外源基因导入发育较晚阶段的胚胎细胞;显微注射法所针对的是受精卵,对一些单胎动物或少胎动物,加之低整合率,阳性后代出现的机率很少。     

转基因小鼠的制备

近二十年来,分子生物学研究获得了长足的发展,而其核心部分基因工程技术的发展尤为突出,特别是转基因动物技术的出现,它不仅为人们研究外源基因在整体动物中的表达调控规律提供了最为有效的手段,而且还可通过改变动物的基因型,使其表现型更符合人类的需要,以培育优良品种及生产人类所需的有生物活性的蛋白质.因此,动物的基因转移这一生物技术已经广泛地应用于生命科学研究的众多领域.所谓转基因动物是指用实验手段将特定外源基因导入动物早期胚胎细胞,由此整合到染色体上,并通过生殖细胞系传递给后代的一类新动物.常见的转基因方法有DNA显微注射法、胚胎干细胞介导法、逆转录病毒转染法、精子载体法、电转移法等,其中以DNA显微注射法最为成熟,使用最广泛、最可靠,该法常用的哺乳动物是实验小鼠.本文所要介绍的就是显微注射法制备转基因鼠所涉及的关键技术和原理(一般程序如图1所示).     

通过CRISPR/Cas9技术创制基因编辑山羊和绵羊模型

<正>山羊和绵羊不仅是重要的经济动物,更是基因编辑的模式动物。基因编辑山羊、绵羊的研究对动物生产性能改善、生物医学和生物制药的研究都具有重要的意义。羊的基因编辑技术兴起于20世纪80年代,Hamme等~([1])将鼠的金属硫蛋白基因和人生长激素基因通过显微注射技术导入绵羊原核期胚胎中,成功获得了世界上第1只用显微注射法制备     

转基因动物研究进展

转基因动物技术是将已知的外源基因导入动物细胞并整合到基因组中,从而使其得以表达的技术。此技术将分子、细胞和个体水平统一起来,标志着基因工程已由离体操作发展到离体与载体相结合的新阶段。目前,转基因动物的制作方法主要有反转录病毒感染法、显微注射法、胚胎干细胞法和精子载体法等,每种方法都有其优缺点。转基因动物技术主要应用在人类疾病模型、生物反应器、异体器官移植和改良动物品种与性状等方面。同时转基因动物技术也存在一些技术难题和安全性问题,但发展前景被普遍看好。     

转基因动物研究进展

自８０年代初，美国科学家首次用微注射法将ＤＮＡ序列导入原核培育出转基因动物以来，这项技术引起了许多学者和生物工程公司的极大兴趣。导入人生长激素（ｈＧＨ）基因的小鼠培育成功，此后转基因猪、鱼、兔和羊等相继问世，为动物基因工程开辟了新的途径。现就转基因动...     

转基因鱼

迄今,已用 DNA 微注射技术产生了一系列转基因动物,在鱼上也取得了一些进展。人工导入异源基因的动物称为转基因动物。80年代初,用微注射技术导入异源 DNA,产生了转基因鳕鱼(c·elegans)、果蝇、海     

利用三次手术冲卵方法提高供体兔胚胎数量的试验

在胚胎移植、胚胎切割、核移植以及转基因动物培育的胚胎显微注射等研究中,均需具有优质、充足的胚胎来源.目前提高哺乳动物胚胎数量的途径主要采用超排和体外受精等技术.这     

我国转基因动物及其安全性评价发展现状

<正>转基因动物(transgenic animal)是指利用基因工程手段将外源基因有目的、有计划地导入受体动物的受精卵或胚胎,使之稳定整合于动物基因组并能遗传给后代的一类动物,包括畜禽、水生动物、节肢动物等。1980年,Gordon等~([1])将重组DNA导入小鼠受精卵,这是人类首次对哺乳动物进行人工改造,距今已有37年。转基因动物具有广阔的应用前景,如培育动物新品种(高产、优质、抗病)、探究人类疾病机理、作     

猪卵胞浆内单精子显微注射(ISCI)技术的研究进展

卵胞浆内单精子显微注射(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)技术集显微操作技术与体外受精于一体,先后在人和多种家畜动物上成功获得后代,并且被广泛应用于人类辅助生殖、动物性控胚胎制备、转基因动物生产和哺乳动物受精机制等方面的研究。文章以猪为研究对象,综述了猪ICSI技术的研究现状、影响因素及其存在的问题。     

分子育种手段之转基因技术

1显微注射法转基因猪的研究中最常用的技术方法是核显微注射法。其原理是在显微镜下将外源基因注入到原核期或经重构发育至原核期的受精卵细胞的胚胎原核中,注射的外源基因与胚胎基因组融合,然后进行体外培养,最后移植到受体母畜子宫内发育,这样分娩的动物体内的每一个细胞都含有新的DNA片段,此即转基因后代。显微注射法的缺点是效率低、位置效应(外源基因插入位点随机性)造成表达结果的不稳定性、动物利用率低等。其优点是外源基因的转移率和整合效率都较高。迄今为止,核显微注射法还是最有效、最实用的动物转基因方法。2核移植转基因法…     

转基因动物应用及现存问题探讨

利用转基因技术(transgenic technology)使外源基因与动物本身的基因整合在一起,并随细胞的分裂而增殖,最终得以表达,这样培养出的动物即称为转基因动物(transgeni canimal)。如果外来基因能稳定地遗传给后代,就会形成转基因动物系。转基因动物的研究始于20世纪80年代,Gordon等采用原核显微注射法向小鼠胚胎注射纯化了的DNA(猴肾病毒-疱疹病毒胸腺激酶基因SV4启动子克隆到PBR322),从而得到第一例转基因小鼠,     

家蚕转基因方法及研究进展

转基因动物是指以实验方法导入的外源基因在动物基因组内稳定整合并能遗传给后代的一类动物。 1 980年Ｇｏｒｄｏｎ等将胸腺激酶 (ＴＫ)基因和ＳＶ40病毒基因片段的融合基因通过微注射技术导入到小鼠的受精卵中 ,发现ＴＫ基因整合到了小鼠的染色体中 ;随后相继的类似研究发现整合到小鼠染色体中的外源基因能够遗传给后代。 1 982年Ｐａｌｍｉｔｅｒ等采用转基因技术培育出了携带有人生长激素 (ｈＧＨ)的转基因小鼠 ,由于小鼠具有很快的生长速度 ,个体较正常小鼠大二倍以上 ,成了当时轰动一时的“巨型小鼠”。超级小鼠的成功 ,标志着转基因动…     

对精子作为动物转基因载体的再探讨

基因转移的主要目的是把外源DNA导入动物细胞核内,改变动物遗传性状,以满足人类的需要。自Palmiter等(1982)获得第一只转基因小鼠以来,转基因猪、牛、羊、鱼、鸡等先后获得成功。目前,动物基因转移的主要方法有;显微注射、反转录病毒感染、胚胎干细胞途径和精子载体。显微注射因安全、可靠而得以广泛运用。精子载体是近几年发展的一种方法。与其它几种方法比较,因它得到后代的阳性率高、方法简单而引起广泛注意。但它的可靠性一直存有争议。