利用抑制消减杂交技术分离辣椒细胞质雄性不育育性恢复相关EST

 以辣椒(Capsicum annuum L. ) 细胞质雄性不育系23A、121A, 和其相应的近等基因恢复系23C、121C为试验材料, 利用抑制消减杂交( SSH) 技术成功构建了CMS恢复基因诱导表达的消减cDNA文库。结合高密度点阵膜杂交差异筛选, 获得了282个阳性克隆。通过测序, 除去重复序列共得到175个Unique ESTs。在GenBank上进行BLAST分析, 55个EST片段未找到对应的同源序列, 可能代表了新基因;120个EST片段找到了对应的同源序列, 包括103个已知功能基因和17个未知功能基因。按照MIPS功能分类法, 将其分为14个功能组, 涉及代谢、胁迫应答、蛋白活性、转录因子、信号转导等多方面的功能。     

转录组学技术及其在瓜菜作物上的应用

转录组学技术作为植物功能基因组学研究的重要手段,近年来在瓜菜作物上也有不少成功应用。运用转录组学技术,可以从转录水平上探究瓜菜作物在特定发育阶段或特定生理状态下的基因功能和基因结构,从而为了解瓜菜作物在不同条件下的发育调控及胁迫响应机制提供数据基础。本文主要介绍了转录组学的技术方法及转录组学技术在西瓜、甜瓜、黄瓜、番茄和西兰花等瓜菜作物上的应用,最后展望了转录组学技术在瓜菜作物研究中的应用前景。     

保护地瓜菜土壤改良技术

介绍了保护地瓜菜土壤的综合改良技术,促进设施蔬菜生产的可持续发展。     

应用抑制性消减杂交技术从枳中筛选根特异表达基因

为筛选分离植物根组织特异表达基因,以枳根RNA为试验组,叶RNA为驱动组,构建了枳根消减文库。从该消减文库中共获得有效序列1 177个,其片段长度主要分布在200 ~ 500 bp;序列拼接后得到455个非重复序列,其中245个与已知基因匹配,具有结合功能、催化活性和转运活性等生物学功能,可参与植物的代谢、细胞生长、个体发育、应激反应等生物学过程。实时定量PCR检测结果显示这些基因中的主要乳液蛋白、早期结瘤素样蛋白和贝壳杉烯酸氧化酶等基因在根中高表达。     

沼肥在瓜菜栽培中的应用

沼肥富含有机质、氨基酸和各种营养成分,适宜瓜菜的种植和生长,沼渣适宜作基肥和追肥,还可以作蘑菇种植的基料,沼液适宜叶面喷施,在追肥的同时可防治病虫害,起到生物农药的作用。沼肥种植瓜菜,品质好,产量高,可增加收入,降低成本。当前,农村沼气的建设日益受到党和政府的关注和     

抑制性消减杂交技术(SSH)在辣椒抗病基因研究中的应用

基于抑制性PCR及差减杂交技术建立的抑制性消减杂交技术,因其假阳性率低、敏感性高、效率高等优点广泛应用于植物基因差异表达研究.对该技术的原理、主要优缺点及其在辣椒植物抗病性机制研究中的应用进行了综述.     

保鲜剂在瓜菜贮藏中的应用

瓜菜采收后,仍是一个具有生命活动的有机体,仍进行着以呼吸作用为主要形式的生命活动。由于受采后贮运环境条件的影响,目前我国瓜菜采后损失严重,腐烂率高达25%左右。目前世界上普遍采用的保鲜技术有常温技术、低温技术、气调技术、减压技术、电磁场处理技术、臭氧离子处理技术     

O2O电子商务模式在瓜菜种苗行业中的应用

笔者从商业模式的理念出发,分析了O2O模式的背景、概念、优势。通过对瓜菜种苗电商O2O模式的分析,提出了O2O模式在瓜菜种苗行业的发展策略,以促进瓜菜种苗O2O模式的健康发展,并试图为O2O模式的其他企业提供思路。     

抑制性差减杂交(SSH)技术在柑桔逆境胁迫研究中的应用

抑制性差减杂交(SSH)技术作为一种稳定、高效、简单的富集和分离差异表达基因方法,为研究植物生长发育及病虫害和其他一些生物或非生物逆境胁迫下的特异基因的表达和相关基因的分子克隆提供了有力的工具。介绍了SSH技术的基本原理、技术要点,并对SSH技术在其他植物和柑桔逆境生理研究中的应用现状和前景进行了探讨。     

抑制性差减杂交结合基因芯片技术在植物基因差异表达研究中的应用

抑制性差减杂交技术和基因芯片技术是近年来发展起来的研究基因差异表达的2种非常有效的方法.SSH技术或基因芯片技术单独使用都存在不同程度的缺陷和不足,但若将2种技术结合起来使用,则能充分发挥各自的优势,并最大限度地弥补各自的不足.鉴于此,对SSH技术与基因芯片技术的原理与优缺点以及两者的结合在植物研究上的应用进行了综述.     

琯溪蜜柚及其早熟红肉突变体成熟果实SSH 文库的构建及初步分析

 分别以琯溪蜜柚及其突变体红肉蜜柚（成熟期早20 ~ 25 d）的成熟果肉cDNA 作驱赶子和检测子,利用结合分子镜像选择技术的SSH 技术,构建了红肉蜜柚和琯溪蜜柚的正向差减cDNA 文库。通过PCR 检测cDNA 克隆外源插入片段,其大小介于100 ~ 1 000 bp。通过点杂交差异筛选文库,得到102 个表达增强2 倍或以上的克隆并测序,结果表明这102 个克隆代表44 个Unigenes,通过序列同源性比对分析,发现获得的Unigenes 在功能上主要涉及信号传导、蛋白质合成、应激反应、转运等代谢反应。     

抑制性消减杂交分离苹果缺铁诱导的相关基因

以铁高效基因型植物———苹果属小金海棠(Malus xiaojinensis Cheng et J iang) 为材料, 利用抑制性消减杂交( SSH) 方法, 成功构建了小金海棠缺铁条件下的消减cDNA文库。该文库包含1 152个克隆, 通过PCR检测插入片段大小在300～1 000 bp之间。对构建的消减cDNA文库进行差异筛选, 得到差异表达片段( ESTs) 105个。GenBank上BLAST结果如下: 50个ESTs与其它物种同源性较高, 视为已知基因, 并根据其功能分为9个组; 32个ESTs在GenBank中无法查到对应的同源序列, 可能代表了新基因;另外23个是与已知ESTs重复的基因片段。     

利用SSH技术分离甘蓝抗黑腐病相关基因的研究

采用抑制差减杂交(SSH)技术,构建甘蓝抗病品种A21经黑腐病菌诱导6、8、12、24h后的混合SSH文库。经反向Northern筛选,共获得87条高质量ESTs。通过NCBI中BLAST数据库比对分析发现,83个ESTs与已知蛋白或基因具有不同程度的同源性。     

‘津田’芜菁消减cDNA文库的构建及分析

 以‘津田’芜菁红色块根和白色块根为材料, 利用SSH技术成功构建了消减cDNA文库并富集相关基因片段。从消减文库中筛选到960个阳性克隆, PCR鉴定插入片段长度主要分布于300～800 bp之间。克隆测序后与GenBank中的同源序列进行比较, 特异基因片段为302个, 其中99个与数据库中的序列具有相似区域且功能已知, 与数据库中序列没有显著同源性及功能未知的序列为203条。     

桃花芽休眠解除SSH文库构建及相关基因表达分析

 为了深入研究桃花芽休眠的分子机制,利用抑制差减杂交技术（SSH）,以解除休眠期的花芽的RNA为实验方Tester,以休眠期花芽的RNA为驱动方Driver,构建休眠解除cDNA文库,测定分析了180 个上调表达的cDNA 片段,测序成功128个,除去冗余序列,得到28个单一序列。对序列进行BLAST比对及功能注释,发现这些序列分别属于新陈代谢、氧化还原、信号转导、抗性相关等类别基因。运用qRT-PCR 技术对HisH3、Dhn 和Metallothionein基因进行检测,结果表明它们在花芽休眠解除过程中均上调表达。     

柑橘衰退病晚期抑制差减cDNA文库的构建及初步分析

为了研究柑橘衰退病晚期应答的分子机理,利用经典的抑制差减杂交技术,以感染柑橘衰退病3年后的‘不知火’杂柑实生苗叶片组织的c DNA为测试方,以脱毒的‘不知火’实生苗叶片组织的c DNA为驱动方进行差减杂交,构建了柑橘衰退病诱导的正向抑制差减c DNA文库。随机挑取此文库中210个阳性克隆进行测序,获得了192条有效序列。将这些EST序列聚类拼接后,共获得77条非重复序列。对这些EST进行GO和KEGG分析,发现这些EST的功能主要与胁迫及防御、代谢、转录、转运、蛋白命运等途径相关。用实时定量RT-PCR验证了其中4个基因:几丁质酶基因、茉莉酸响应基因的转录抑制因子1基因(JAZ1)、钙调素结合蛋白基因、咖啡酸—氧甲基转移酶基因,结果表明在衰退病的诱导下,‘不知火’杂柑叶片中这4个基因的表达量均有明显提高,说明这些基因可能参与了‘不知火’杂柑叶片晚期衰退病应答。JAZ1基因的上调表达表明可能宿主衰退病晚期应答过程中的诱导系统抗性受到了抑制。     

瓜类作物嫁接育苗技术研究进展

分析了我国瓜类作物嫁接育苗的生产现状,介绍了嫁接技术在瓜类作物生产上应用的主要目的、常用的嫁接方法、瓜类作物嫁接栽培应注意的问题、嫁接的生理机制以及嫁接技术在瓜类作物中的应用,展望了瓜类作物嫁接技术未来发展的方向和急需解决的问题。     

瓜类蔬菜抗白粉病育种研究现状及展望

白粉病是瓜类蔬菜的主要病害之一,严重影响瓜类蔬菜的产量和品质。抗病育种是解决白粉病对瓜类蔬菜生产危害的一条重要途径。为给瓜类蔬菜白粉病抗性育种工作提供参考和借鉴,综述了在病原菌、抗性鉴定方法、抗性遗传规律、抗性种质、抗病品种选育以及分子标记技术的应用等方面的研究现状,分析了现阶段研究中存在的问题,并对研究前景进行了展望。     

黄龙病诱导下椪柑SSH文库的构建与分析

以实生苗和平椪柑(Citrus reticulate Blanco)为材料,采用抑制性差减杂交技术,分别以感染黄龙病与未感染黄龙病的椪柑叶片为检测方(tester)和驱动方(driver),成功构建了黄龙病诱导的差减cDNA文库。挑选了100个阳性克隆并成功测序得到71条EST,经NCBI基因库同源性比对,有41条非冗余高质量EST序列找到了同源序列,另有10条非冗余未搜索到同源序列。同源序列的基因涉及抗逆防御、运输、能量代谢、光合作用、蛋白代谢、信号转导、抗氧化等代谢途径和生理生化过程。值得注意的是文库中有由病原引起的韧皮部相关的凝集素蛋白的前体积累。挑选了2条进行Q-PCR定量分析,结果表明感病1周表达量增强不大,2周后tester的表达量明显高于driver,说明材料感病早期这些基因表达增强。