堆型艾美耳球虫纯种的分离鉴定和致病性观察

采用单卵囊分离技术,从长春市某鸡场鸡球虫混合种中获得1株纯种球虫,鉴定为堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina).鉴定指标寄生于十二指肠和小肠前段,卵囊为卵圆形、卵囊中型.测200个卵囊的大小为(13.5-21)×(11-17.5)μm,平均为17.5×14.5μm,形态指数为1.21.测200个孢子囊大小为(4.6-9.5)×(3.5-6.5)μm.有斯氏体,无内外残体.最短孢子化时间为18h,潜伏期97h.用此卵囊对50只2周龄的海兰公鸡分为一个不感染组和4个感染组,每只口服感染1万、2万、5万和10万个孢子卵囊.结果所有感染组与对照组的平均增重差异均为显著(P＜0.05)或极显著(P＜0.01).     

柔嫩艾美耳球虫纯种的分离鉴定和致病性观察

采用单卵囊分离技术,从长春市某鸡场鸡球虫混合种中获得1株纯种球虫,用单卵囊繁殖的后代,接种无球虫雏鸡进行增殖,并根据其在肠道寄生部位、肉眼病变、潜伏期,卵囊孢子化时间,卵囊和孢子囊的大小、形状、结构等指标观察,鉴定为柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella).鉴定指标寄生于盲肠、卵囊为宽卵圆形或卵圆形.测200个卵囊的大小范围为(19.5-25.5)×(14.5-21.5)μm,平均大小为22.5 ×18μm,形状指数为1.25.卵囊窄端有一颗折光性强的极体.测200个孢子囊大小为(9.5-12.5)×(5.5-8)μm.孢子囊卵圆形,有一斯氏体,无内外残体.最短孢子化时间为17h,潜伏期141h.用此卵囊对50只2周龄的海兰公鸡分为一个不感染组和4个感染组,每只口服感染1万、2万、5万和10万个孢子卵囊.结果所有感染组与对照组的平均增重差异均为显著(P＜0.05)或极显著(P＜0.01).     

巨型艾美耳球虫裂殖子的分离和纯化

[目的]为了获得纯净的巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)裂殖子.[方法]对25日龄白羽肉鸡口服接种 3×105巨型艾美耳球虫卵囊,在其感染后48～124 h取十二指肠末端到卵黄蒂后5 cm处肠段,收集裂殖子并计数,确定分离裂殖子的最佳时间;将所取肠段均分为5段,分别对裂殖子进行计数,筛选分离裂殖子的最佳肠段;通过DEAE-52纤维素柱层析对裂殖子进行纯化并分管收集,确定收集较高纯度裂殖子的最佳时间.[结果]在感染后84 h所收集的裂殖子最多;此外,从空肠中后段及空肠末端肠段中分离出较多数量的裂殖子,占总数的62％以上;通过DEAE-52纤维素柱层析获得44 mL纯度较高的裂殖子.[结论]分离巨型艾美耳球虫裂殖子的最佳时间为感染后84 h,最佳肠段为空肠后段,收集1～44 mL洗脱液能够获得纯度较高的裂殖子.     

鸡柔嫩艾美耳球虫绵阳地方株的分离鉴定及致病性研究

运用单卵囊分离提取技术,从绵阳某鸡场艾美虫感染粪便中获得1株纯种艾美虫卵囊,该艾美虫主要寄生在鸡盲肠,卵囊绝大多数呈宽卵圆形,无卵膜孔,有1个圆形极粒位于窄端,无内外残体,孢子囊有斯氏体,最短孢子化时间为19 h .通过随机测定200个卵囊后发现,卵囊的大小为(18.4～25.5) μm×(14.6～20.2) μm,平均大小为(21.62±2.08) μm×(18.15±1.83) μm;随机测定200个孢子囊后发现,孢子囊大小为(10.5～12.6) μm×(5.1～6.8) μm,平均大小为(11.77±0.87) μm×(6.29±0.69) μm.雏鸡在感染后5 d开始拉血便,6 d后症状加剧,鸡出现死亡.对照国内外相关文献,初步确定分离出来的艾美虫为鸡柔嫩艾美耳球虫(E.tenella).对分离虫株卵囊致病性的研究结果表明,鸡一旦感染,其体重会受到影响,严重感染则会造成大量死亡.随着卵囊感染量增多,雏鸡死亡率也随之增高,当雏鸡感染量为8.0万个卵囊时致死率高达100%,表明所分离的柔嫩艾美耳球虫绵阳株致病力很强.     

纯种柔嫩艾美耳球虫的分离培养

用琼脂滴稀释法,对4株柔嫩艾美耳球虫进行单卵囊分离,每株各感染5日龄罗曼公雏5只,结果感染成功率分别为60%,40%,20%,20%,总的成功率为35%,能基本满足后续试验的需要。     

11株巨型艾美耳球虫的免疫原性分析

用平均增重和病变记分或卵囊减少率等为试验指标,对11株巨型艾美耳球虫的免疫原性进行了分析.结果显示,各虫株每鸡免疫感染100个卵囊后,不仅对攻击1×105个同源株卵囊均产生大于70%的病变记分降低率,而且使每鸡攻击1×104个同源株卵囊时的卵囊产量均减少97.42%以上,在各虫株间无显著差异.各虫株对异源株的交叉免疫力程度不一致,美国株对国内10个虫株的卵囊减少率为20.09%～82.44%,仅3株大于75%,而国内10个虫株对美国株的卵囊减少率为27.43%～95.26%,有5株大于75%;扬州株、南通株、凤阳株、龙岩株、广州株和上海株间的相互卵囊减少率为-1.72%～96.67%,其中南通株对扬州株、凤阳株、龙岩株、广州株和上海株的卵囊减少率均大于75%,上海株对扬州株、南通株、凤阳株与广州株的卵囊减少率为-1.72%～57.69%.     

11株巨型艾美耳球虫的免疫原性分析

用平均增重和病变记分或卵囊减少率等为试验指标,对11株巨型艾美耳球虫的免疫原性进行了分析。结果显示,各虫株每鸡免疫感染100个卵囊后,不仅对攻击1×105个同源株卵囊均产生大于70%的病变记分降低率,而且使每鸡攻击1×104个同源株卵囊时的卵囊产量均减少97.42%以上,在各虫株间无显著差异。各虫株对异源株的交叉免疫力程度不一致,美国株对国内10个虫株的卵囊减少率为20.09%~82.44%,仅3株大于75%,而国内10个虫株对美国株的卵囊减少率为27.43%~95.26%,有5株大于75%;扬州株、南通株、凤阳株、龙岩株、广州株和上海株间的相互卵囊减少率为-1.72%~96.67%,其中南通株对扬州株、凤阳株、龙岩株、广州株和上海株的卵囊减少率均大于75%,上海株对扬州株、南通株、凤阳株与广州株的卵囊减少率为-1.72%~57.69%。     

鸡柔嫩艾美耳球虫西宁株的分离与鉴定

[目的]鉴定鸡柔嫩艾美耳球虫西宁株。[方法]采用单卵囊分离技术从西宁当地鸡粪便中获得1株纯种球虫,经鸡体传代增殖,对该虫体的寄生部位、潜伏期、孢子化时间、形态结构等指标进行观察和测定。[结果]该虫株寄生于鸡的盲肠,卵形指数为1．22,最短孢子化时间为18h,潜伏期为114h。卵囊为卵圆形,卵囊壁光滑,呈黄绿色,孢子化卵囊未见卵膜孔和卵囊残体;孢子化卵囊平均为20．08μm×16．55μm。孢子囊纺锤形,有一斯氏体,其平均大小为8．65μm×4．90μm。综合鉴定该球虫为柔嫩艾美耳球虫,并暂命名为柔嫩史美耳球虫西宁株。[结论]该研究为进一步研究球虫的致病性和药物效应奠定了基础。     

一株和缓艾美耳球虫的致病性和免疫原性

笔者对新分离到的和缓艾美耳球虫进行了致病性和免疫原性的研究。结果表明雏鸡感染1 000和5 000孢子化卵囊表现正常,肠道没有肉眼可见的病理变化。20 000个卵囊感染引起轻微病变。100 000个卵囊和500 000 个卵囊感染则产生较为明显的致病作用,与不感染对照组相比增重分别为70．3％和56．8％,肠道外观也产生明显可见的病变,根据0-4分肠道计分标准,分别为1．43和2．37。所有实验鸡都没有出现死亡。该虫株免疫原性较强,一次免疫5 000个卵囊/只,就能够对200 000个卵囊/只感染产生坚强的保护作用。     

鸡柔嫩艾美耳球虫单卵囊分离技术的构建及致病性研究

构建了一种新的鸡柔嫩艾美耳球虫单卵囊分离技术 ,并对杨陵柔嫩艾美耳球虫地理株进行了分离 ,对继代增殖的纯种卵囊进行了致病性试验。结果表明 ,该单卵囊分离技术简单易行 ,单卵囊感染成功率可达4 0 % ;该虫株对雏鸡有很强的致病性 ,经口接种 1× 10 5个孢子化卵囊 ,致死率高达 80 %。     

毒害艾美耳球虫致病性与抗药性研究

用毒害艾美耳球虫杨凌株(YLn)感染14日龄雏鸡,检测毒害艾美耳球虫的致病性及其对4种常用抗球虫药的敏感性。以最适抗球虫活性百分率、抗球虫指数、相对卵囊产量和病变记分减少率为指标,进行综合评定,其抗药程度分为无抗药性、轻度抗药性、中度抗药性和完全抗药性4个等级。结果表明,该虫株对雏鸡有很强的致病性,每羽鸡经口接种1×105个孢子化卵囊时,致死率达63.3%;该虫株对地克株利有完全抗药性,对马杜拉霉素有轻度抗药性,对氯羟吡啶和氯苯胍无抗药性。     

兔大型艾美耳球虫的致病性,临床及病理组织学研究

利用光镜对大型艾美耳球虫感染与周龄无球虫兔致病进行了研究。实验兔在不同剂量组及天数下扑杀，取材并观察。结果表明，病兔出现厌食、体重下降、腹泻，严重时有血便等临床症状。１０＾５，１０＾６卵囊组４￣８ｄ体重下降很明显，并有死亡。各症状从感染后第４ｄ开始出现，第９ｄ开始恢复。潜在期的为６￣８ｄ。组织学可见Ｅ．ｍａｇｎａ主要寄生在空肠后段，回肠及盲肠尖部。绒毛受到不同程度的破坏，隐窝不同程度的拉长。１０＾     

不同地理株鸡柔嫩艾美耳球虫致病性的研究

采用盲肠病变记分、每克粪便含有的卵囊数、粪便记分、肉鸡增重等检查方法对来自山东、吉林、黑龙江、北京4个不同地区的鸡柔嫩艾美耳球虫的致病性进行了研究。将上述各株球虫分别接种10日龄AA肉鸡，并于接种后5d开始进行各项指标的检测。结果表明：山东株(S株)的致病性最强，黑龙江株(H株)和吉林株(J株)的致病性次之，北京株(B株)最弱。     

黄艾美耳球虫纯种分离及ITS-1序列测定

为建立一种有效鉴定兔球虫的分子生物学方法,采用单卵囊分离技术,分离纯化黄艾美耳球虫.根据GenBank中发表的艾美耳属球虫18S rDNA和5.8S rDNA序列,设计特异性引物,建立PCR方法并针对黄艾美耳球虫第一内转录间隔区进行扩增,PCR产物直接测序.结果分离出黄艾美耳球虫,并扩增出包含黄艾美耳球虫第一内转录间隔...     

安徽部分地区鸡柔嫩艾美耳球虫单卵囊的分离与鉴定

为获得纯种柔嫩艾美耳球虫虫株,从安徽省巢湖市、霍邱县、定远县3个地区患球虫病的鸡场采集3株混合球虫,培养至孢子化,分离单卵囊接种1～7日龄的雏鸡,感染后7～12 d,收集卵囊,然后通过生物学特性和PCR方法进行虫种鉴定。结果显示,3个地区的单卵囊感染成功率分别为50%、57%和29%,各虫株经生物学特性和PCR鉴定均为柔嫩艾美耳球虫。研究表明:1.0%琼脂单卵囊分离法简便且成功率较高,利用特异性引物PCR鉴定虫株,为纯种地方株的研究奠定了基础。     

6株巨型艾美耳球虫繁殖力的比较研究

用巨型艾美耳球虫(Eimeriamaxima)上海株、扬州株、南通株等不同地区的6株孢子化卵囊100个·只-1,经嗉囊接种7日龄无球虫黄羽公雏肉鸡,以麦克马斯特氏法计数感染后6～14d每天24h排出的卵囊。结果表明:广州株排卵囊量最多,与凤阳株和龙岩株相近;上海株排卵囊量最少,与扬州株、南通株相近;广州株与上海株、扬州株和南通株均差异显著。各虫株的显露期相似,在感染后第7天排卵囊量达峰值,第6～8天排出的卵囊量占总量的80%～90%,第10天接近0。     

布氏艾美耳球虫和巨型艾美耳球虫在鸡肾细胞及鸡胚培养中的发育

采用体外脱囊的方法,将布氏艾美耳球虫(Eimeria brunetti)和巨型艾美耳球虫(E.maxima)的子孢子分别接种于鸡肾原代细胞和9日龄鸡的尿囊腔中,置40～41℃恒温箱内培养,结果如下:①E.brunetti 子孢子接种鸡肾原代细胞后,50h 发现第一代未成熟裂殖体;76h 发现第二代成熟裂殖体;128h 发现配子体,继续培养再无进一步发育。子孢子接种鸡胚尿囊腔后,16～48h 发现第一代裂殖体;60～72h 发现第二代裂殖体;未见到第三代裂殖体;144h 发现小配子体、大配子体和未成熟卵囊,168h 发     

毒害艾美耳球虫早熟株致病性与繁殖力的研究

为选育制备弱毒疫苗所需的毒害艾美耳球虫(Eimeria.necatrix)早熟株,以临床表现、平均增重、相对增重率、小肠病变记分、血便记分、死亡率、每克粪便中的卵囊数(OPG)、卵囊总产量和每个卵囊的繁殖能力为指标,研究了E.necatrix早熟株与亲本株的致病性和繁殖力。结果表明该早熟株与其亲本株相比,早熟株的致病性降低了,接种相同剂量时早熟株平均增重、相对增重率高于亲本株,病变记分、血便记分和死亡率均低于亲本株;早熟株产卵高峰提前,繁殖力下降至亲本株的55%左右,符合球虫早熟疫苗株的特性。     

柯氏艾美耳球虫发育史的研究

柯氏艾美耳球虫的内生发育包括２代无性繁殖和１代有性繁殖,第１代裂殖生殖阶段的时间为感染后至４８ｈ,第２代裂殖生殖阶段的时间为感染后４８￣８４ｈ,配子生殖阶段始于感染后７６ｈ。感染后９０￣１３８ｈ在肠绒毛中发现成熟的配子体,感染后９６ｈ在回肠肠腺中发现卵囊,至１３８ｈ仍可见。最短孢子化时间为９￣１２ｈ。柯氏艾美耳球虫的宿主特异性强,不感染虎皮鹦鹉、八哥、鹌鹑和雏鸡。     

鸡堆型艾美耳球虫生物学方法鉴定

[目的]确定单卵囊分离获得的鸡球虫种类.[方法]采用生物学方法,测定该鸡球虫寄生部位、最短孢子化时间、潜伏期、孢子化卵囊和孢子囊大小等生物学特征.[结果]该鸡球虫主要寄生于十二指肠,卵囊呈卵圆形,囊壁光滑分为2层,囊内有1～3个折光性颗粒,未见卵囊残体;测100个孢子化卵囊大小为(13 ～22) μm×(11 ～ 16) μm,平均为16.96 μm×12.96 μm,形状指数1.31;测60个孢子囊大小为(8～ 13) μm×(5～8) μm,平均11.22 μm ×6.83 μm;最短孢子化时间为17 h,潜伏期为99 h.[结论]根据该鸡球虫的生物学特征及参考国内外文献,鉴定该鸡球虫为堆形艾美耳球虫(Eimeria acervulina).