PMSG和hCG对猪卵母细胞体外成熟的影响

对猪卵母细胞不同发育阶段的激素需要进行了初步探讨。结果表明 :猪卵母细胞体外培养 48h ,前 2 4h在培养液中加入激素 ,后 2 4h不加激素 ,卵母细胞的A级成熟率 (51 73% )和总成熟率 (83 2 5 % )最高 ,极显著高于前 2 4h不加激素 ,后 2 4h添加激素培养的成熟率 (P <0 0 1 ) ;也显著高于不含激素的培养液连续培养 48h的成熟率 (P <0 0 5) ;但与添加激素连续培养 48h组成熟率差异不显著 (P >0 0 5)。     

猪卵泡卵母细胞体外成熟与冷冻保存

研究了激素、猪卵泡液、不同类型血清对猪卵泡卵母细胞体外成熟的影响 ;比较了卵泡直径小于 2 mm、2～ 5 mm和大于 5 mm的卵母细胞体外成熟能力的差异 ,并对不同发育阶段猪卵母细胞的冷冻保存进行了研究。结果表明 :猪卵母细胞体外培养 4 8h时 ,培养的前 2 4 h培养液中加入激素 ,后 2 4 h去掉激素 ,卵母细胞的 A级成熟率 (5 1.73% )和总成熟率 (83.2 5 % )最高 ,极显著高于前 2 4 h不加激素 ,后 2 4 h添加激素培养的成熟率 (P<0 .0 1) ;也显著高于不含激素的培养液连续培养 4 8h的成熟率 (P<0 .0 5 ) ;但与添加激素连续培养 4 8h的成熟率差异不显著 (P>0 .0 5 )。在体外成熟培养液中 ,添加 10 % (体积分数 ) ECS的成熟率 (72 .86 % )显著高于添加 10 % (体积分数 ) NCS的成熟率(6 2 .2 1% ) (P<0 .0 5 ) ,而添加 10 % p FF则抑制卵母细胞的体外成熟。随着卵泡直径的增大 ,卵母细胞体外成熟能力逐渐增强。采用程序冷冻保存方法 ,成熟卵母细胞的成活率 (35 .5 9% )显著高于培养前 (2 4 .6 4 % )和培养 2 4 h(2 3.36 % ) (P<0 .0 5 )。培养 2 4 h(77.2 2 % )和培养成熟 (72 .81% )的卵母细胞解冻后的形态完整率均显著高于培养前(5 3.2 4 % ) (P<0 .0 5 )     

不同培养时间对猪卵母细胞体外成熟效果的影响

试验回收中等卵泡(2～6mm)中的A、B级卵母细胞,然后把卵母细胞分为12组移入培养液TCM-199进行体外成熟培养。A组在不同培养时间(30,36,42,45,48,51h)和B组在不同培养时间(32,38,44,47,50,53h)用H33342染色,倒置显微镜下观察卵母细胞核成熟情况;再经电激活处理,观察卵裂率。结果表明:45h和48h的A级卵母细胞成熟培养后的成熟率差异不显著(P>0.05);47h和50h的B级卵母细胞成熟培养后的成熟率差异不显著(P>0.05);48h的A级卵母细胞和50h的B级卵母细胞卵裂率差异不显著(P>0.05)。     

猪卵母细胞体外成熟的初步研究

为了研究猪卵母细胞不同状态和卵泡液对体外成熟的影响,试验设计的方法。结果表明:按卵泡直径不同分为小(3 mm)、中(3～6 mm)、大(6 mm)3组,卵母细胞体外成熟率依次为65.5%、81.6%、81.8%(P0.05);添加卵泡液(PFF)培养的卵母细胞体外成熟率显著高于不添加时的体外成熟率(P0.05)。     

不同培养液及不同培养时间对犬卵母细胞体外成熟的影响

试验采集犬卵巢,用切割法回收卵泡中的卵母细胞,选取胞质均匀、2层或2层以上颗粒细胞、直径≥110μm的卵母细胞移入不同的培养液中:(A)M199+10%FBS+0.5μg/mL FSH+10 IU/mL hCG,(B)M199+0.1%PVA进行体外成熟培养。在培养不同时间(0,48,72 h)用1%醋酸地衣红染色,在显微镜下观察卵母细胞核成熟情况,探索适宜犬卵母细胞体外成熟的培养体系。结果表明:卵母细胞在A液中培养48 h MII期比例(7.84%)高于B液中的比例(P<0.01);在培养72 h MII期比例也是A液中(8.00%)高于B液,虽然二者差异不显著(P>0.05),但72 h卵母细胞退化比例高于48 h(P<0.01)。因此培养液中添加FBS,FSH和hCG有利于犬卵母细胞体外成熟,且在此培养液中培养48 h为最佳成熟时间。     

绵羊卵泡卵体外成熟的研究

本研究主要探讨了不同激素、卵母细胞形态及入培前时间对绵羊卵泡卵体外成熟效果的影响.结果表明:卵母细胞在添加FSH LH(均为10IU/mL)、HCG(4IU/mL)及不加激素的m—TCM199 10％FCS(V/V)培养液中培养24h后,达到中期Ⅱ的卵母细胞比例分别为87.68％、96.00％和42.11％;卵母细胞的形态是影响其成熟的重要因素,A、B、C三级卵培养24h后的成熟率分别为91.77％、57.10％和25.84％,入培前时间间隔为2、4、8h时,其成熟率分别为80.24％、77.42％和 77.83％,相互间差异不显著(P>0.05).     

体外成熟对牛卵母细胞孤雌激活后发育潜力的影响

本试验在卵母细胞体外成熟的研究基础上,研究了培养用水、卵泡液和成熟时间对卵母细胞体外成熟及孤雌激活后发育潜力的影响.结果表明(1)将卵母细胞分别于蒸馏水和Milli-Q超纯水配制的成熟培养液中培养22～24 h, 孤雌激活后, 卵裂率无显著差异(P>0.05); 但孤雌卵在超纯水配制的胚胎培养液中培养,囊胚发育率为22.3%, 明显高于在蒸馏水配制的培养液中的囊胚发育率14.1%(P<0.05).(2)在成熟培养液中添加10%、20%卵泡液,成熟卵母细胞孤雌激活后的囊胚发育率(32.3%, 30.9%)明显高于添加5%和0%卵泡液组的囊胚发育率(21.8%, 22.7%,P<0.05).卵母细胞在添加20%卵泡液的培养液中成熟培养,孤雌激活后囊胚孵化率明显低于添加0、5%、10%卵泡液组的囊胚孵化率(P<0.05).(3)成熟28 h或30 h的卵母细胞孤雌激活后,其囊胚发育率(30.5%或29.4%)明显高于成熟24 h或26 h组的囊胚发育率(20.5%或22.1%,P<0.05).     

不同因素对猪卵母细胞体外成熟培养的影响

本试验旨在探讨不同外源激素组合的添加、胰岛素—转铁蛋白—亚硒酸钠(ITS)的添加、不同培养皿、石蜡油的添加对卵母细胞体外成熟培养(IVM)的影响。结果显示:①孕马血清促性腺激素+人绒毛膜促性腺激素+促卵泡素(PMSG+HCG+FSH)组高于促卵泡素+促黄体素(FSH+LH)组和尿促性腺激素(hMG)组,相互之间差异显著(80.1%、68.3%、53.3%,P<0.05);②添加1% ITS到猪卵母细胞培养液中对卵母细胞成熟率无显著提高(P>0.05),但显著提高了孤雌激活后孤雌胚胎的卵裂率和囊胚率(63.3%、55.1%,18.7%、12.1%,P<0.05);③凹槽皿组猪卵母细胞成熟率显著高于四孔板和30 mm塑料皿组(73.3%、68.0%、68.3%,P<0.05);④石蜡油的添加对卵丘细胞扩展和卵母细胞体外成熟率均有显著提高(84.8%、69.9%,P<0.05)。结果表明培养液中添加PMSG+HCG+FSH和ITS及选用凹槽皿、成熟培养液上覆石蜡油可提高猪卵母细胞IVM效果。     

不同培养体系对金华猪卵母细胞体外成熟的影响

本试验探讨了不同培养体系对金华猪卵母细胞体外成熟的影响,共进行了4组试验。结果表明,试验组4,采用TCMl99作为体外成熟基础培养液,添加10 IU/mL促卵泡素(FSH)、10 IU/mL促黄体素(LH)、10%卵泡液(PFF)、10%血清,在成熟率上均显著高于其他试验组(P0.05),但添加10%发情金华猪血清或10%胎牛血清,对卵母细胞的成熟率无显著差异(P0.05)。说明金华猪卵母细胞在体外成熟培养时加入血清,能够促进卵母细胞的体外成熟率。     

山羊卵母细胞体成熟培养条件的研究

从山羊屠宰场收取卵母细胞，置于39％、5％CO2的培养箱中，作24小时体外成熟培养。在含10％犊牛血清(FCS)的成熟培养液里分别添加0％、20％~N卵泡液，试验结果表明，成熟卵母细胞率分别为54．5％、66．7％，差异不显著。在成熟培养液里添加不同血清，即10％犊牛血清(FCS)和羊血清(NGS)，试验结果表明，成熟卵母细胞率分别为54．5％、65.4％，差异不显著。     

Predictive value of the area of expanded cumulus mass on development of porcine oocytes matured and fertilized in vitro

The objective of the present study was to investigate the correlation between the degree of cumulus expansion and in vitro development of porcine cumulus-oocytes complexes (COCs) matured and fertilized in vitro. The COCs were matured in the maturation medium (IVMM) supplemented with 15% or 5% of porcine follicular fluid (PFF) from small, medium and large follicles (<2 mm, 2-5 mm and >5 mm, respectively). COCs cultured in IVMM with PFF for 48 h displayed less expansion than those cultured in IVMM alone (P<0.05), irrespective of follicle size. After culture for 24 h in IVMM with PFF and for another 24 h in IVMM alone, the degree of cumulus expansion was more prominent than culture in the presence of PFF for the entire 48 h period (P<0.05), but the percentages of oocytes with PB I showed no significant difference between the control and experimental groups (P>0.05). After in vitro fertilization, the oocytes failed to develop to the morula/blastocyst stages except for those matured in IVMM supplemented with 15% or 5% PFF obtained from >5 mm follicles for the first 24 h and followed by in IVMM alone for the second 24 h (12.5% and 11.1% of the embryos developed to morulae and blastocysts, respectively). The expanded cumulus areas of COCs were significantly positively correlated with their in vitro development (p=0.0058, 0.0001 and 0.0348 for the percentages of embryos developed to 2-4 cell, beyond 4 cell and morula and blastocyst stages, respectively). In conclusion, PFF had an inhibiting effect on cumulus expansion, and the inhibitory effect decreased progressively with the increase in size of follicles from which PFF was obtained, and the action of PFF on cumulus expansion was affected by the PFF culture time. The areas of the expanded cumulus mass may be used as a parameter to predict development of porcine oocytes matured and fertilized in vitro.     

甜菜碱对生长肥育猪体脂重分配的作用及机理研究

通过48头20～65　kg生长猪和60头60～95　kg肥育猪（Duroc×Landrace×Yorkshire）饲养、屠宰试验和有关生化指标分析，探讨了甜菜碱对生长肥育猪皮下脂肪沉积、胴体脂肪率和肌内脂肪含量的影响及其作用机理。48头生长猪和60头肥育猪分别分成对照和试验2个处理组，每个处理含3个重复，生长猪和肥育猪的试验组分别饲喂含1000　mg／kg和1500　mg／kg甜菜碱的饲粮。结果表明添加甜菜碱，提高了生长猪的日增重13.20％（P＜0.05），降低了料重比7.93％（P＜0.05）；分别降低生长猪和肥育猪的背膘厚14.82％（P＜0.05）和14.93％（P＜0.05）、脂肪率5.76％（P＞0.05）和11.51％（P＜0.05）；分别提高背最长肌肌内粗脂肪含量36.00％（P＜0.05）和17.66％（P＜0.05）。血清生化指标分析表明甜菜碱分别提高生长猪和肥育猪脂肪酶活性10.49％（P＜0.05）和7.50％（P＝0.06），分别提高了血清游离脂肪酸含量20.16％（P＜0.05）和13.43％（P＜0.05），显示甜菜碱加强了猪体脂动员。进一步研究表明，饲喂甜菜碱的生长猪和肥育猪肝脏游离肉碱含量分别提高了20.68％（P＜0.05）和23.53％（P＜0.05），肥育猪背最长肌中酸不溶肉碱含量以及酸不溶肉碱和游离肉碱比例分别提高了48.59％（P＜0.01）和38.24％（P＜0.01），结果揭示甜菜碱似通过提供肉碱合成所必需的甲基以提高生长肥育猪肝脏游离肉碱的含量，促进长链脂肪酸进入肌肉线粒体进行β-氧化，在减少体脂（主要是皮下脂肪）同时，适度增加肌肉脂肪含量，从而发挥着重新分配体脂的作用。     

猪分级卵母细胞体外成熟时间规律的研究

试验根据猪卵丘－卵母细胞复合体（COCs）的颗粒细胞层数,把COCs分成A、B、C和D级,A、B级用于体外分别培养24、32、38、44、48和54 h,C级用于体外分别培养24、32、38、44、48、54和60 h,观察它们不同时间排出极体数,然后将排出极体的卵母细胞孤雌激活。结果发现,A和B级COCs培养48 h时成熟率最高（83.2%和78.0%）,明显高于同级水平培养24、32和38 h的成熟率;不同级别COCs体外培养相同时间,A与B级成熟率差异不显著（P＞0.05）,但二者与C级的成熟率差异显著（P＜0.05）;体外培养48 h COCs卵裂率最高（81.7%）,与培养38 h前的卵裂率差异显著（P＜0.05）。结果表明,A、B级卵母细胞更适于体外培养,能获得高的成熟率和卵裂率,COCs周围颗粒细胞对卵母细胞的成熟有显著影响;COCs培养38 h之前,部分虽能看到极体,但激活后卵裂率极低,说明卵母细胞并未真正成熟,通常通过排出极体判断卵母细胞成熟是不够准确的,COCs体外培养44～48 h是成熟的最佳时期,能为体细胞核移植提供大量优质的MⅡ期卵母细胞。     

血清和促性腺激素对山羊卵母细胞核体外成熟的影响

试验研究了清和促性腺激素对山羊卵丘扩展和卵母细胞核成熟的,卵母细胞与卵丘扩展的关系以及卵丘扩展与卵母细胞核成熟的关系。结果表明：（1）培养24h，添加PMSG组卵母细胞核成熟率显著高于不加激素组（P＜0．05），而培养到27h，2者成熟率之间差异变得不显著，说明添加PMSG卵母细胞核的最终成熟率没有明显影响，但加速了卵母细胞核的成熟进程；（2）M199＋BSA培养27h，卵母细胞核成熟率显著高于培养24h，而M199＋FCS培养27h与培养24h的成熟差异不显著，说明添加BSA时，卵母细胞核体外成熟速度比添加FCS的慢；（3）卵丘扩展良好与扩展不好的卵母细胞核成熟率以及第1极体形态无统计学差异，说明山羊卵母细胞的核成熟可能不依赖于卵丘扩展；（4）山羊的卵丘扩展产不依赖于卵母细胞；（5）将带壁颗粒细胞与不带壁颗粒细胞的COC分开培养发现，2者卵母细胞核成熟度无明显差异，带有壁颗粒细胞的COC卵丘扩展情况明显优于一般COC。     

泌乳母猪饲粮适宜赖氨酸水平的初步研究

将30头大长北经产母猪随机分为3组，产后饲喂0．60％（I组），0．80％（II组），1．00％（III组）3种赖氨酸水平的泌乳期饲粮，研究饲粮赖氨酸水平对泌乳母猪生产性能及血液，奶生化指标的影响，结果表明，增加饲粮赖氨酸浓度对哺乳21天的母猪体重，采食量，断奶至再发情天数（P＞0．10）和21日龄的平均窝仔数，仔猪腹泻率无显著影响（P＜0．05），21日龄仔猪窝重随着饲粮赖氨酸浓度的增加而显著增加（P＜0．06），初生至7日龄（P＜0．06），14日龄（P＜0．03）和21日龄（P＜0．01），的窝增重均随饲粮赖氨酸浓度增加而增加，产后14天猪乳蛋白II组，III组极显著（P＜0．01）高于I组；固形物含量II组显著（P＜0．05）高于I组，产后21天猪乳固形物含量II组显著（P＜0．05）高于I组，泌乳期母猪血清尿素氮[浓度I组显著（P＜0．05，泌乳14天），极显著（P＜0．01，泌乳21天）高于II组，III组；白蛋白浓度II组显著（P＜0．05），高于I组，从本次试验的结果看出，在生产条件下，大长北母猪泌乳期饲粮赖，氨酸水平以0．80－1．00％为宜。     

二氢吡啶对雏鸡血清甲状腺素和皮质醇含量影响的研究

为探求二氢吡啶促雏鸡生长发育的机理，试验分两批进行。（1）选用28日龄海赛克斯父母代母雏250只，随机分为5组，日粮中添加不同浓度的二氢吡啶。饲养试验表明二氢吡啶可促进雏鸡的生长，且以150mg／kg组促生长作用最佳，添加饲喂到61d时，体重比对照组提高7.68％（P＜0.01），血清中T     

膨化处理对全脂大豆抗营养因子及营养价值的影响

用螺杆转速为300r/min，模口直径为4Φ8的干法膨化机，在膨化腔指示温度为90度，110度，120度，130度和140度时膨化大豆，研究膨化处理对全脂大豆中抗营养因子及营养价值的影响，结果表明：（1）膨化大豆产品中水分随膨化温度的升高而降低，140度膨化处理大豆中粗脂肪和赖氨酸含量下降。（2）胰蛋白酶抑制因子和脲酶活性随膨化温度的升高呈对数下降，且存在显著的相关性，但二者对热的敏感性不同，凝集素对热的敏感性高于胰蛋白酶抑制因子和脲酶活性，蛋白质溶解度在膨化温度超过130度时下降迅速。（3）110－130度膨化处理大豆中脲酶活性为0．38－0．06ΔpH，胰蛋白酶抑制因子含量为 14．85－5.59mg/g，失活69％－88％，凝集素为0．72－0．00mg/g， 蛋白质溶解度为82．50％－71．58％，时，肉仔鸡生长性能和氮代谢率与豆饼对照组未表现出明显的差异（P＞0．05），膨化温度升高或降低对肉仔鸡生长性能和氮代谢率均有不利影响。     

育成波尔山羊胚胎移植研究

利用进口FSH超排12月龄的波尔母山羊6只，获卵83枚 ，只均13.8枚，获可用胚74枚，最高一只19枚，只均12.33枚。共移植奶山羊受体37只，两 个情期不返情27只，情期不返情率72.97%。35～40 d用B超探测仪检查怀孕结果(以观 察到胎儿为准)，实际怀孕22只，移植妊娠率59.46%，其中移植双胚的妊娠率66.67%，单胚 的妊娠率50.00%。     

促黄体素对牛卵母细胞体外核成熟的影响

为了研究促黄体素(luteinizing hormone,LH)在牛卵母细胞成熟培养体系中的时间依从性,试验通过向牛卵母细胞体外成熟培养的不同时间段添加LH来观察其核成熟的情况。首先用无LH的基础成熟液I和添加LH的成熟液Ⅱ分别培养,在成熟的不同时间点(3、6、9h)用醋酸地衣红染色观察各自的生发泡破裂率。然后在体外成熟培养的不同时间段(0～3、0～6、0～9、0～24h)添加LH,24h后统计各自的第一极体率。结果表明,添加LH组在6h的生发泡破裂率显著低于对照1组(P0.05),24h添加LH组的第一极体率显著高于对照2组(P0.05)。因此,添加LH能延迟牛卵母细胞的核成熟,成熟培养中24h全程添加LH较不添加组能显著提高核成熟率。     

环丙沙星对实验性猪支原体性肺炎的药效学研究

测定环丙沙星及对照药物对猪肺炎支原体的最小抑菌浓度，其中环丙沙星的抗支原体活性最强，最小抑菌浓度为0．01μg/ml。通过给18头健康猪气管内接种含有猪肺炎支原体的病肺悬液，复制具有典型症状的猪支原体性肺炎疾病模型，并进行环丙沙星2．5、5．0mg/kg肌注给药对实验性猪支原体性肺炎的疗效实验及血浆药物浓度监测，两组治愈率分别为83．3％（5／6）和100％（6／6）。治疗组多剂量给药期间，第1、3、5、7、9次给药后0．5及6h的血浆药物浓度，在2．5mg/kg剂量组平均为0．41μg/ml和0．17μg/ml,5.0mg/kg剂量组平均为0．71μg/ml和0．28μg/ml。两剂量组环丙沙星均无蓄积作用。