一种侵染桃树的烟草花叶病毒(TMV)的分离鉴定

 从北京地区具有红叶及叶片侧脉失绿等综合症状的桃病株上分离到一种杆状病毒分离物P-1,初步鉴定为一TMV株系;制备抗血清微量沉淀法测定效价为1:1024,并应用于田间样品检测;提纯P-1分离物回接毛桃实生苗后,在上部叶片出现脉间失绿症状,用P-1抗血清作ELISA检测为阳性,肯定了TMV对桃的侵染及致病作用。     

抑制烟草花叶病毒(TMV)植物提取物的筛选

为开发新型植物源抗病毒剂,以抗烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)活性为指标,利用半叶枯斑法对13种常见中草药进行了抗病毒活性筛选,并对筛选到的中草药进行了抗病机理的研究。结果表明:马蓝、玉簪、鸦胆子、白薇和苦木5种中草药的30μg/mL醇提取物抗TMV活性较好,抑制率均达70.44%以上,且高于8%宁南霉素水剂1 000倍液的抗病毒活性,其中马蓝醇提取物抗病毒活性最佳,抑制率可达90.70%。对马蓝醇提取物防治烟草花叶病毒机理的研究发现,0.5μg/mL马蓝醇提取物能够保护TMV侵染的烟草原生质体细胞形态完整;经马蓝醇提取物处理后,烟草的苯丙氨酸解氨酶和过氧化物酶活性比清水对照组明显提高;20~50μg/mL浓度的马蓝醇提取物能明显抑制TMV病毒外壳蛋白的表达。推测马蓝醇提取物可能是通过保护植物细胞而起到抗病毒作用,可进一步开发为植物源抗病毒剂。     

用超声波法使烟草花叶病毒侵染烟草细胞的研究

 本文首次采用超声波法把烟草花叶病毒(TMV)粒子导入带壁烟草细胞,建立病毒-细胞高效侵染体系。将烟草细胞置于含TMV粒子的缓冲液中,用声强为0.5 W/cm²的脉冲超声波处理5 min,培养48 h后使用荧光免疫法检测烟草细胞转染率为59.7%。经酶联免疫吸附测定(ELISA)检测,TMV粒子在烟草细胞体内增殖48 h后达到高峰。电镜观察细胞体内有大量的TMV粒子。用枯斑寄主法测定表明TMV子代有较高的致病力。     

中国北方六省(市)侵染番茄的烟草花叶病毒株系鉴定

本文引进含有不同抗TMV基因的GCR系统番茄品种(系)作为TMV株系的鉴别寄主,将我国北方6省(市)TMV分离物分成亲缘关系相近的4个株系。并对该株系鉴定方法的特点进行了探讨。     

感染烟草花叶病毒(TMV)的烟叶在显症前的荧光光谱变化

通过测试ＴＭＶ侵染叶片的叶绿素含量与荧光光谱特征的动态变化，分析影响荧光光谱的因素，在以４８０ｎｍ作为激发波长时，叶片６８５ｎｍ与７４０ｎｍ荧光强度之比（Ｆ６８５／Ｆ７４０）随着病毒侵染时间的延长而增加，叶绿素含量则随着病毒侵染时间的延长而降低，因此提出可用Ｆ６８５／Ｆ７４０与叶绿素含量之比作为ＴＭＶ早期诊断的指标。     

一种细菌蛋白CZ控制烟草花叶病毒(TMV)的作用机理初探

以活性蛋白CZ处理NC89烟(Nicotianatabacumvar.NC89)12 h后,摩擦接种TMV,1、5、8、12、16 d分别取各处理叶片测过氧化物酶(POD)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性及丙二醛(MDA)和叶绿素的含量。结果表明,POD和PAL2种酶的活性均比对照明显提高;CZ处理使NC89烟叶片内MDA的含量降低,而叶绿素的含量增高。电镜下观察到活性蛋白能打破TMV粒体的规则排列,与TMV粒体不可逆的结合,从而降低侵染力。     

侵染苘麻的烟草花叶病毒鉴定

苘麻Abutilon theophrastii Medic.为锦葵科苘麻属草本植物,其全草含芸香甙,根含粘液质,苘麻子含15％~17％脂肪油和球蛋白,可治赤白痢疾、痈肿、关节酸痛等症,有消炎、利尿、下乳等作用。烟草花叶病毒Tobacco mosaic virus寄主范围广、侵染性强,可侵染茄科、十字花科、葫芦科及豆科等植物。作者等2008年进行药用植物病害调查时,发现山西晋中地区许多苘麻叶片表现出褪绿、坏死斑等症状,对苘麻药用成分的含量、制药的质量和疗效存在潜在影响。为此,本研究通过血清学、双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)分离和RT-PCR等检测技术,对侵染苘麻的病原进行了鉴定。     

侵染苜蓿的豇豆花叶病毒的研究

 从新疆苜蓿矮缩花叶病株上分离到一种病毒分离物G-14,在测定的9科40种植物中,此分离物可侵染6科19种植物,易由汁液摩擦接种,桃蚜(Myzus persicae)、豆蚜(Aphis craccivora)、棉黑蚜(A.atrata)和苜蓿无网长管蚜(Acyrthosiphon rondoi)等不传毒,可由首蓿叶象岬(Hypera variabilis)传毒;致死温度55~60℃,稀释限点10^-3~10^-4,体外保毒期21天;病毒粒体球状,直径约28nm。电镜观察病组织超薄切片,可见晶格状排列的病毒粒体。经琼脂双扩散血清学测定,该分离物与豇豆花叶病毒(CPMV)抗血清呈阳性反应。由此鉴定G-14为CPMV。提纯病毒经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定有3个蛋白组分。分子量分别为44800,24500,22400道尔顿;琼脂糖电泳测得有二个核酸组分。     

侵染扶桑的烟草花叶病毒分离物鉴定

从表现叶斑驳症状的扶桑病株上获得一病毒分离物,电镜下可见约300 nm×18 nm的杆状粒子,其与烟草花叶病毒抗血清呈明显的阳性反应,dsRNA约为6.4 kbp。根据烟草花叶病毒(tobacco.mosaic virus,TMV)的RNA序列设计引物,进行RT-PCR检测,扩增出约800 bp的预期特异片段。将PCR产物连接pMD18-T载体,转化大肠杆菌DH5α,得到了含有目的片段的重组子。序列分析表明,与周雪平等报道的序列(GenBank AJ011933.1)同源性达99％。通过生物学、病毒粒子观察、血清学以及分子生物学实验结果,确定该病毒分离物为TMV。     

侵染西瓜的小西葫芦花叶病毒的生物学特性鉴定

西瓜病毒病是制约西瓜产量及品质的顽疾.据报道,该病害造成的经济损失达到30%～50%.1981～1999年皖、苏、鲁、豫西瓜的病毒病曾几次大发生.危害西瓜的病毒病有西瓜花叶病毒1号(WMV-1)、西瓜花叶病毒2号(WMV-2)、黄瓜花叶病毒(CMV)、烟草花叶病毒(TMV)、烟草环斑病毒(TRSV)、南瓜花叶病毒(SqMV)等32种[1].小西葫芦花叶病毒(ZYMV)是侵染葫芦科的主要病毒之一,1973年首次在意大利北部发现此病毒,至今已成为一个全球性的植物病毒[2].笔者对ZYMV合肥分离物的生物学特性进行了研究.     

侵染马铃薯的烟草坏死病毒的鉴定

 1987年自东北农学院马铃薯区域试验材料(东农85-3334)上分离到烟草坏死病毒(Tobacco Necro-sis Virus简称TNV)。     

甘薯病毒病的研究Ⅰ甘薯羽状斑驳病毒的分离、鉴定

 本文从寄主范旧,蚜传特性、病毒颗粒形态、免疫电镜等方面对嫁接获得的甘薯羽状斑驳病毒廊坊分离物(SPFMV-LF)进行了鉴定,并和SPFMV-RC(美国株)进行了实验比较。SPFMV-LF易汁液摩擦传播和嫁接传播,并以蚜虫非持久性传播,SPFMV-LF系统侵染巴西牵牛(Ipomoea setosa)、牵牛(I.nil);不侵染Chenopodium quinoa、C.ama-ranticolor、Nicotiana benthamiana及其它烟草。尚未发现其局部斑寄主。SPFMV-LF及SPFMV-RC感染I.setosa后引起相似的症状,但感染I.nil后症状差别较大。病毒颗粒长860-830nm,经两次蔗糖垫超速离心从SPFMV-LF感染的I.setosa叶片提取病毒并在BALB/C小鼠中制备抗SPFMV-LF的腹水多克隆抗体,免疫电镜表明,SPFMV-LF的抗体和SPFMV-RC株系有反应。上述实验结果表明SPFMV-LE是SPFMV的一个株系,但不同于SPFMV-RC。     

侵染大豆和桑的烟草坏死病毒(TNV)的鉴定

本文主要是介绍农业部植检所和有关单位共同协作进行的应用技术方面的研究结果。杀虫效果方面:室内试验得出:对谷斑皮蠹成虫、幼虫、蛹,温度11～14℃,10克/m~3,处理24～48小时,效果100%。对谷斑皮蠹卵,温度11～14℃,15～50克/m~3,处理24小时,效果9.0～62.5%,50克/m~3处理48小时,40克/m~3处理72小时效果100%,温度20～22℃,40克/m~3处理24小时,15克/m~3处理48小时也100%死亡。对谷象、玉米象、绿豆象的卵,温度20℃,15克/m~3处理48小时效果100%。对胚后期的黑皮蠹、烟草坪,印度谷蛾幼虫、玉米象、谷蠹和绿豆象成虫的效果更好。室外粮垛上试验,粮温15～16℃,50～70克/m~3处理24小时,对玉米象和绿豆象各虫态的效果100%。中草药材垛上试验,温度27～28℃,30克/m~3处理二天,对黑皮蠹幼虫、玉米象各虫态以及锯谷盗成虫效果100%。真空熏蒸,真空度负745～720mmHg,温度12～20℃,70克/m~3处理3小时,对谷象和绿豆象卵的效果方能100%。熏蒸粮食残留量测定结果:20～70克/m~3熏蒸3天,小麦中氟残留量为0.55～1.48ppm,水稻中为0.29～2.48ppm,玉米中为0.09～1.51ppm。熏蒸粉类粮食残留量高。硫酰氟熏蒸粮、棉、油、蔬菜以及林木种籽,对发芽安全。粮食在熏蒸期间对硫酰氟的吸附量,以大豆和玉米为例,分别只有溴甲烷吸附量的36%,20.3%     

转基因抗病毒工程烟草的田间抗性试验

方荣祥等将烟草花叶病毒(TMV)和黄瓜花叶病毒(CMV)的外壳蛋白(CP)基因转入我国烟草主栽品种NC89后,经过连续两年3代的田间选择鉴定,于1990年秋在河南获得了几个纯合的转基因抗花叶病烟草株系（待发表）。     

北京地区一种侵染菊花的线条病毒

 从北京地区菊花病毒病株上分离到一种线条状病毒CA分离物。经寄主范围,传播方式、汁液体外抗性,外壳旧白分子量、粒体大小和在细胞中产生的内含体研究结果分析,此病毒为Potyvirus成员,沉淀反应,免疫双扩散反应和免疫电镜技术检测证明CA分离物与PVY在清学相关性。CA分离物已制备抗血清和提纯IgG,并应用于品种菊组培苗脱毒检测工作。     

黄瓜花叶病毒对烟草花叶病毒的干扰作用的研究初报

 于1981年-1985年研究了黄瓜花叶病毒(CMV)对烟草花叶病毒(TMV-T)的干扰作用.用CMV向日蔡环斑花叶分离物(CMV-SRS)为诱导病毒,接种枯斑三生烟十天后,对攻击病毒TMV-T的保护率为85.6%.反之,用TMV-T为诱导病毒,接种枯斑三生烟十天后,对攻击病毒CMV-SRS的保护率为95%(70-100%)证明在CMV-SRS和TMV-T之间,有较强的相互干扰作用.含有卫星核酸的黄瓜花叶病毒CMVS51、及CM-VS52两个分离物以及CMVS51+TMVN-14(烟草花叶病毒弱株系)免疫心叶烟和枯斑三生烟十天后,对强病毒TMV-P有明显的干扰作用.     

大豆花叶病毒的株系鉴定

作者用江苏省大豆重花叶(S_A)、轻花叶(S_B)、黄斑坏死(S_C)、顶枯(S_E)以及黑龙江的黄斑花叶(S_D)和顶枯(S_F)的分离物,在菜豆品种“Top Crop”的离体叶鉴定都产生局部枯斑。6个分离物都可以由几种蚜虫(桃蚜、萝卜蚜、苜蓿蚜)传毒,温度钝化点在50～55℃或55～60℃之间,稀释限点为10~(-2)或10~(-3),体外存活期(室温在25℃以上)为24～36小时,电镜下粒体形态都是线条形,它们的寄主范围都很窄,只侵染豆科植物中的少数几个种。这6个分离物都属于大豆花叶病毒。但是它们的寄主范围和在大豆品种上的反应有所不同、S_A和S_B对扁豆的侵染力很强,S_D和S_F不侵染扁豆,S_C和S_E侵染力居中,S_A和S_B在菜豆品种家雀蛋上发生系统花叶,其余四个分离物只在接种叶上出现黄斑和叶脉坏死。温室内测定了37个大豆品种或品系对6个分离物的反应,没有对6个分离物都免疫的品种,6个分离物在1138—2、493—1等9个品种都出现系统花叶,在合丰23、南农133—3、齐黄1号、徐豆1号和科系8号上,6个分离物的反应有稳定的明显的差异。根据6个分离物在大豆品种、扁豆和菜豆(家雀蛋)上的症状反应,认为6个分离物是大豆花叶病毒的6个不同株系,S_A和S_B的性状相似。室内测定同一个株系在不同品种上反应的症状不同,例如南京重型花叶S_A,轻花叶S_B在许多品种上出现系统花叶但在齐黄1号和徐豆1号上形成系统枯斑。黑龙江的顶枯S_F只在合丰23等少数品种上出现顶枯症状,多数品种是系统花叶。因此,症状类型不能代表株系的特征、而是株系与品种组合之间的特异性反应。我们认为用症状的表现来作为株系的名称是不一定确切的。