兔胚胎释放物对去脾小鼠血小板数量的影响

兔2细胞期或8～16细胞期胚胎培养液立即或经冷冻、鲜冻后注入去脾小鼠体内,能异源性引起去脾小鼠血小板数量显著减少(P<0.050)。血小板激活因子受体竞争性拮抗剂海风藤酮能抑制这种作用。试验说明兔胚胎释放血小板激活因子,并引起去脾小鼠血小板的聚集。     

海风藤酮对兔胚胎发育及PAF效应的影响

海风藤团为血小板激活因子PAF的特异性受体桔抗剂。用含20μg·mL-1海风藤酮的培养液培养兔2细胞胚胎144h,发育到等于或小于16细胞的胚胎比例为66．9％,对照组为13．5％（P＜0．025）。发育到襄胚和孵化囊胚的比例,对照组为39．9％,而试验组发育到囊胚的比例为2．7％（P＜0．001）,没有胚胎发育到孵化囊胚阶段。试验表明海风藤团对胚胎的体外发育有阻滞作用。试验还表明,兔胚胎可以释放PAF,海风藤国能明显抑制免胚胎培养液所引起的去牌鼠血小板数量下降的PAF效应。     

影响兔胚胎细胞核移植效率的因素

 对兔胚胎细胞核移植（NT）的有关影响因素进行了系统研究。结果发现电场强度100 V·mm-1，脉冲时间15μs，电脉冲3～4次的融合率显著高于其它组（P<0.05）；融合前激活卵母细胞，分裂率和囊胚率显著高于融合后激活（P <0.05）；当用8～16-细胞胚胎的卵裂球作供核时，卵裂率和囊胚率显著高于致密桑椹胚卵裂球为供核组；当重组胚在含3%发情牛血清（OCS）的TCM199中培养48 h后，转入含10% FCS的TCM199中继续培养，卵裂率和囊胚率显著高于一直在3% OCS或10% 胎犊血清（FCS）中培养的重组胚（P < 0.05）。将22枚2～4-细胞期重组胚移入同期发情的受体母兔输卵管内，34 d后产下NT仔兔1只。结果表明，电融合参数和供体胚胎的发育阶段以及受体卵母细胞的状态对NT效果有显著影响，在NT胚胎的不同发育阶段采用不同的血清种类和浓度可提高其胚胎发育能力。     

小鼠胚胎卵巢体外培养中卵细胞的生长及其数量的调节

利用胚胎卵巢体外长期培养技术研究了小鼠卵巢中卵细胞的生长发育状况。材料取自B6D2雌小鼠F1代胚胎，服龄为11．5日和13．5日。用Orcein染色法鉴别雌雄。分离出的卵巢培养12～14d。5d后换一次培养液，以后每2d换1次。培养8d后，13．5日龄胚胎卵巢中卵细胞已形成与体内相似的有规则的分布。在卵巢皮质部有大量的卵母细胞和少量体细胞，而在髓质部只有少量的卵母细胞和大量的体细胞。大量的未生长的小卵母细胞（直径＜25μm）紧密地分布在皮质的外侧，而生长印母细胞则主要分布在皮质的内侧和髓质。11．5日龄胚胎卵巢经过10～12d培养，没有形成上述分布规律，所有观察到的卵细胞都是生长中的卵母细胞。卵细胞数量也显著低于13．5日龄胚胎的卵巢（34．4±6．53比566．7±49．5）。用IGF－I和FSH处理11．5日龄胚胎卵巢可显著增加其卵细胞的数量（分别为88对55，P＜0．01和140对20，P＜0．005）。较老龄的胚胎卵巢组织对于11．5日龄胚胎卵巢卵细胞数量均有促进作用，其中以16．5日龄胚胎卵巢的作用较强（165对65，P＜0.005）。实验结果表明小鼠胚胎发育到达11．5～13．5日龄时期对于卵巢来说是获得形成卵巢内卵细胞分布规律能力的重要时期。11．0日龄胚胎卵巢缺乏某些因子的作用，因而不能在体外正常发育。     

激素对小鼠胚胎体外发育的影响

探讨小鼠胚胎体外发育过程中,2种激素(孕马血清促性腺激素PMSG、人绒毛膜促性腺激素HCG)对早期胚胎发育的影响。取原核期胚胎培养于不同的培养体系中,确定适合胚胎发育的最佳体外培养体系;在胚胎培养液中加入不同浓度的激素,观察激素对体外发育的影响。试验发现含10%胎牛血清的人输卵管液培养液(HTF)是该试验条件下小鼠早期胚胎发育的最佳培养液;在该培养液中添加不同浓度和不同种类的激素后,各发育阶段胚胎的发育率与未添加激素的对照组相比均有所下降,但未发现浓度依赖性。由此可认为,高浓度的PMSG和HCG对体外培养的胚胎发育有抑制作用,可降低胚胎发育到各阶段的比例,尤其是显著降低了囊胚的发生率。     

精子数量对小鼠体外受精与胚胎早期发育的影响

【目的】研究不同精子数量对小鼠体外受精与胚胎早期发育的影响,通过比较分析进一步完善小鼠的辅助生殖技术。【方法】试验随机选用9周龄C57BL/6雄鼠附睾尾获取的精子放入HTF培养液,在二氧化碳培养箱中培养1 h后通过精子计数计算1、3、5、10、15、20 μL精子溶液的精子数量,并吸取相应的精子溶液于4周龄C57BL/6雌鼠超排后获取的卵母细胞团中,体外培养24 h后计算体外受精率与2-细胞胚胎发育率。【结果】1、3、5、10、15、20 μL精子溶液的精子数量分别为0.25(±0.23)×10~6、1.23(±0.31)×10~6、2.03(±0.35)×10~6、3.95(±0.33)×10~6、6.50(±0.76)×10~6、9.88(±0.52)×10~6个/mL;同时,小鼠体外受精率分别为88.92%、95.17%、94.29%、90.56%、85.89%、78.26%,其中2-细胞胚胎率分别为78.21%、81.75%、81.51%、77.42%、70.47%、50.76%。精子数量为1.23(±0.31)×10~6、2.03(±0.35)×10~6个/mL的体外受精率与2-细胞胚胎发育率较好,差异不显著,但极显著高于精子计数为6.50(±0.76)×10~6、9.88(±0.52)×10~6个/mL的情况。【结论】不同的精子数量对小鼠体外受精与胚胎早期发育影响有显著性差异,精子数量为1.23(±0.31)×10~6～2.03(±0.35)×10~6个/mL时能有效提高小鼠的体外受精率并促进胚胎的正常发育。     

壳寡糖对小鼠胚胎体外发育的影响

本研究旨在通过向小鼠体内受精和体外受精原核胚胎的培养基中添加壳寡糖(对照组:0μg·m L-1;试验组:5、10、50、100和200μg·m L-1),研究其对小鼠胚胎着床前发育效率(卵裂率、囊胚率)和囊胚质量(囊胚总细胞数、内细胞团数(ICM)与总细胞数的比率)的影响。结果表明,对于自然受精胚胎,添加10μg·m L-1壳寡糖组的囊胚总细胞数显著高于对照组(P0.05),添加200μg·m L-1壳寡糖组的卵裂率和囊胚率均显著低于对照组(P0.05)。对于体外受精胚胎,添加10μg·m L-1壳寡糖组的囊胚率显著高于对照组(P0.05),添加200μg·m L-1壳寡糖组的囊胚率显著低于对照组(P0.05)。本试验表明,在化学限定培养基中添加适量的壳寡糖有利于改善小鼠胚胎的质量,但高剂量的壳寡糖可能不利于小鼠胚胎的早期发育。     

一氧化氮对小鼠胚胎附植影响的研究

采用子宫角注射方法研究了一氧化氮(N0)对小鼠胚胎植入的影响,并采用组织切片的方法,光镜观察了一氧化氮对小鼠子宫及其内膜形态变化及脱膜化的影响。结果表明,与对照侧相比,L-NAME 0.2 mg/只处理组植入胚胎数降低,在L-NAME中加入NO供体硝普钠(SNP)时,则不影响胚胎植入数;附植过程中,妊娠侧的子宫内膜发育明显,上皮细胞增高,腺体发达,间质疏松,间质细胞增大,发生明显的蜕膜样变。抑制侧子宫内膜柱状上皮细胞相对较低,腺体数少,子宫内膜在附植后期出现较明显退行性变化,基质变得紧密。一氧化氮作为一种内源性平滑肌松驰剂和血管扩张剂,对子宫内膜MMP-9mRNA的表达有着极为显著的调节作用,在附植过程中一氧化氮合酶受到抑制后能显著降低MMP-9基因的表达,并进一步影响子宫内膜发育和胚胎的附植。     

一氧化氮对小鼠胚胎附植影响的研究

采用子宫角注射方法研究了一氧化氮（N0）对小鼠胚胎植入的影响,并采用组织切片的方法,光镜观察了一氧化氮对小鼠子宫及其内膜形态变化及脱膜化的影响。结果表明,与对照侧相比,L-NAME 0.2 mg/只处理组植入胚胎数降低,在L-NAME中加入NO供体硝普钠（SNP）时,则不影响胚胎植入数;附植过程中,妊娠侧的子宫内膜发育明显,上皮细胞增高,腺体发达,间质疏松,间质细胞增大,发生明显的蜕膜样变。抑制侧子宫内膜柱状上皮细胞相对较低,腺体数少,子宫内膜在附植后期出现较明显退行性变化,基质变得紧密。一氧化氮作为一种内源性平滑肌松驰剂和血管扩张剂,对子宫内膜MMP-9mRNA的表达有着极为显著的调节作用,在附植过程中一氧化氮合酶受到抑制后能显著降低MMP-9基因的表达,并进一步影响子宫内膜发育和胚胎的附植。     

FCS和BSA对小鼠早期胚胎体外培养的影响

本实验是在CZB和Whitten’s Medium 2种培养液中添加胎牛血清(FCS)和牛血清白蛋白(BSA),比较它们对小白鼠早期胚胎体外发育的影响。结果如下:在培养注射HCG后37～39h的小鼠胚胎时,添加FCS的CZB培养液中通过发育阻断期的胚胎和发育到囊胚的胚胎均明显高于添加BSA的CZB培养液(80.9%、64.3%和41.7%、29.6%),差异显著(P0.05);当用上述液培养注射HCG后44h的小鼠胚胎时,不管是进口培养皿还是国产培养皿,胚胎发育率的差异均不显著(P0.05);在用CZB和Whitten’s培养液分别添加FCS和BSA后,培养注射HCG后44h2-细胞小鼠胚胎时,不论添加FCS还是BSA,在CZB培养液中胚胎发育率均高于Whitten’s培养液(P0.05),但添加FCS和BSA之间的差异不显著(P0.05)。     

干细胞因子对小鼠附植前胚胎体外发育的影响

为优化胚胎体外培养体系,提高胚胎体外培养发育率和发育质量,以昆明小鼠体内受精胚、体外受精胚和孤雌激活胚为研究对象,研究不同浓度干细胞因子对小鼠不同来源胚胎体外发育的影响。结果表明:在KSOM培养液中,小鼠自然受精胚、体外受精胚和孤雌激活胚的卵裂率和桑椹胚率均无显著差异(P0.05),但IVN胚和IVF胚的囊胚发育率及囊胚细胞总数显著高于孤雌激活胚;培养液中添加不同浓度的干细胞因子对小鼠自然受精胚和孤雌激活胚的卵裂率、桑椹胚率、囊胚发育率和囊胚细胞总数都没有显著的影响(P0.05),但干细胞因子浓度为100ng·mL-1时,小鼠体外受精胚的桑椹胚率和囊胚发育率显著高于对照(P0.05)。     

猪输卵管上皮细胞对小鼠早期胚胎体外发育的影响

研究了不同生殖时期猪输卵管上皮细胞对小鼠早期胚胎体外发育的影响,以此建立了适于早期小鼠转基因胚胎体外培养的猪输卵管上皮细胞共培养体系,并用PCR法对体外培养发育到不同阶段的小鼠转基因胚胎进行了外源基因整合检测。结果表明,在受孕初期的猪输卵管上皮细胞(无论是原代还是传代细胞)上,培养的小鼠1-细胞期胚胎的囊胚率显著高于发情间期的猪输卵管上皮细胞(P<0.01);在相同生殖时期猪输卵管原代和传代上皮细胞上,培养的小鼠1-细胞期胚胎的囊胚率差异不显著;在转基因胚胎不同发育阶段,PCR检测呈阳性的胚胎比率分别为:2-细胞期为96%,4-细胞期为63%,8-细胞期为43%,囊胚期为19%。由此可见,受孕初期的猪输卵管上皮细胞可促进与之体外共培养的小鼠早期胚胎的发育;随着早期小鼠转基因胚胎的发育,PCR检测呈阳性的转基因胚胎的比率逐渐降低。     

不同冷冻保护剂对小鼠原核期胚胎玻璃化冷冻的影响

研究不同冷冻保护剂对小鼠原核期胚胎玻璃化冷冻的影响。结果表明,15%乙二醇(EG)+15%1,2-丙二醇(PROH)+蔗糖与15%EG+15%二甲基亚砜(DMSO)+蔗糖相比,解冻后成活率分别为84.83%和95.83%,无显著差异(P0.05);卵裂率(60%、70%)显著低于对照组(92.5%)(P0.05),冷冻组间差异不显著(P0.05);PROH组囊胚率(33.84%)显著低于DMSO组与对照组(56.35%、76.90%)(P0.05);DMSO组囊胚细胞数与PROH、对照组差异显著(P0.05)。试验证明,在乙二醇中添加PROH的冷冻效果不及添加DMSO组,玻璃化冷冻影响原核期胚胎的后期发育。     

Aroclor 1254对小鼠早期胚胎体外发育的影响

【目的】探讨了Aroclor 1254对小鼠2-细胞和8-细胞胚胎体外发育的影响。【方法】在体外培养的小鼠2-细胞和8-细胞胚胎培养液中,分别添加质量浓度为0.05,0.25,1.25和6.25μg/mL的Aroclor 1254,并设Aro-clor 1254溶剂(乙醇)对照组和空白对照组,比较不同质量浓度的Aroclor 1254对小鼠2-细胞和8-细胞胚胎体外发育的影响。【结果】0.05μg/mL Aroclor 1254影响2-细胞胚胎的孵化(57.7%),与溶剂对照组(66.7%)差异显著(P<0.05);0.25μg/mL Aroclor 1254组,2-细胞胚胎的囊胚发育率(72.5%)及囊胚孵化率(23.2%)与溶剂对照组(84.2%,66.7%)差异极显著(P<0.01);1.25μg/mL Aroclor 1254组,2-细胞胚胎发育到8-细胞阶段的比率(32.1%)极显著低于溶剂对照组(P<0.01);6.25μg/mL Aroclor 1254组,2-细胞胚胎发育到4-细胞和8-细胞阶段的比率(58.1%和29.6%)极显著低于溶剂对照组(P<0.01)。0.05μg/mL Aroclor 1254对8-细胞胚胎发育无明显影响;但当质量浓度提高到0.25μg/mL时,Arolor 1254显著影响8-细胞胚胎的孵化(64.7%,P<0.05);1.25μg/mLAroclor 1254组,8-细胞胚胎囊胚发育率(68.6%)及孵化率(25.5%)极显著低于溶剂对照组(92.4%,75.7%)(P<0.01);6.25μg/mL Aroclor 1254组8-细胞胚胎不能继续发育。【结论】Aroclor 1254对小鼠胚胎体外发育存在明显的剂量-毒性关系,随着培养液中Aroclor 1254质量浓度的增加,对小鼠早期胚胎的发育毒性表现越早;胚龄越小,毒性敏感性越强。     

醋酸铅对小鼠胚胎体内发育毒性的研究

采用饮水染毒法研究碱式醋酸铅对小鼠早期胚胎体内发育的毒性。将体重 (1 5± 2 ) g的母鼠随机分为高剂量、中剂量、低剂量染毒组和对照组。从试验的第 1天起 ,染毒组小鼠分别于下午 1 7:0 0至次日上午 8:0 0自由饮用 5 .0 ,1 .0和 0 .2 g/L醋酸铅溶液 ,次日上午 8:0 0至下午 1 7:0 0更换为自来水 ,如此循环 ,持续 2 1 d;对照组小鼠一直自由饮用自来水。染毒结束后 ,进行正常饲喂、饮水至试验结束。从第 2 6天开始对小鼠进行超排 ,超排小鼠分别在注射 h CG后的 4 8,72和 96 h回收输卵管及 /或子宫胚胎。结果显示 ,在注射 h CG后 4 8h回收胚胎时 ,染毒各组超排小鼠正常 2～ 4 - C胚胎占回收总数的比率与对照组无显著差异 (P>0 .0 5 ) ;72 h回收胚胎时 ,高、低剂量组的桑葚胚比率极显著低于对照组 (P<0 .0 1 ) ,中剂量组则显著低于对照组 (P<0 .0 5 ) ;96 h回收胚胎时 ,高剂量组囊胚比率极显著低于对照组 (P<0 .0 1 ) ,中、低剂量组的囊胚比率与对照组差异不显著 (P>0 .0 5 ) ,且此时各染毒组的退化胚比率均极显著高于对照组 (P<0 .0 1 )。结论认为 ,铅能显著影响体内胚胎从 2 - C期进一步发育为桑葚胚和囊胚 ,并使胚胎发育延迟、停滞和退化     

不同交配时间对小鼠胚胎收集和发育的影响

【目的】探索不同交配时间对小鼠胚胎收集和胚胎发育的影响,为小鼠的超排研究提供参考。【方法】对小鼠进行超数排卵,分别于注射人绒毛膜促性腺激素（hCG）后9,10,11,12,13,14和15 h,在输卵管膨大部收集卵母细胞,研究排卵情况;将超排雌鼠与雄鼠合笼,分别于合笼后2,4,6,8,10和12 h观察小鼠是否见阴道栓,研究小鼠交配时间;为了控制小鼠的交配时间,将超排雌鼠分别于注射hCG后0,2,4,6,8,10,12,14,16和18 h与雄鼠合笼,每个时间点合笼后2 h观察交配情况,于注射hCG后98 h从子宫角收集囊胚,统计胚胎收集率,观察胚胎发育情况。【结果】小鼠排卵主要集中于注射hCG后12～14 h,交配时间主要在注射hCG后的前6 h。人为控制交配时间发现,注射hCG后4,6,8,10和12 h的交配率均较高,较高的胚胎收集率出现在注射hCG后8,10和12 h;囊胚发育率在注射hCG后4 h （56.0%）和8 h（54.5%）较高;扩张囊胚发育率在注射hCG后12 h （68.2%）和16 h （58.0%）显著高于其他时间点（P<0.05）。【结论】交配时间影响小鼠交配成功率、胚胎收集率和胚胎发育;超数排卵后12 h交配可提高小鼠的胚胎收集率和胚胎发育率。     

哌嗪雌酚酮对生长期去卵巢小鼠胫骨骨形态计量学的影响

目的研究哌嗪雌酚酮（piperazinyl estrone,PE）对去卵巢小鼠胫骨松质骨和皮质骨骨量的影响,并探讨其作用机制。方法 70只昆明种6周龄雌性小鼠,随机分为7组：⑴基础对照组（Base组）,⑵假手术组（Sham组）,⑶去卵巢模型组（Ovx组）,⑷去卵巢＋哌嗪雌酚酮低剂量组（PE-1组）,⑸去卵巢＋哌嗪雌酚酮中剂量组（PE-2组）,⑹去卵巢＋哌嗪雌酚酮高剂量组（PE-3组）,⑺去卵巢＋雌酚酮组（E组）,连续灌胃给药42d。实验后处死小鼠取左胫骨上、中段不脱钙骨制片,进行骨形态计量学参数测定。结果哌嗪雌酚酮可使去卵巢小鼠胫骨上段松质骨骨量增加、骨小梁分离度减少,骨形成和骨吸收降低。与Ovx组比较,PE-2组效果最佳,其松质骨骨量增加,骨小梁分离度减少,轻度抑制骨转换;哌嗪雌酚酮对胫骨中段皮质骨影响是促进内膜面骨形成,抑制内膜面骨吸收,但作用不显著。结论哌嗪雌酚酮中剂量组（1.0 mg·kg^-1·d^-1）通过轻度降低骨转换,能有效防止去卵巢小鼠松质骨的骨丢失,对皮质骨作用不明显。     

Cep164基因缺失对小鼠胚胎早期脑发育的影响

利用Foxg1、Gbx2、Otx2、Fgf8和En1探针与小鼠胚胎进行原位杂交,分析Foxg1、Gbx2、Otx2、Fgf8和En1基因在Cep164基因缺失小鼠胚胎脑中的表达情况,确定Cep164基因对脑发育的影响。结果显示,与野生型相比,Cep164基因突变小鼠胚胎头部Gbx2、前中脑Otx2和中后脑的边界Fgf8表达无明显变化,但端脑泡Foxg1表达减少,前神经脊Fgf8表达减少,Otx2在晶状体板和嗅状体板表达减少,背侧中脑和后脑前En1表达减少。这说明Cep164基因是维持胚胎头部正常发育的重要基因,Cep164基因突变会导致前脑发育异常,主要影响嗅觉和视觉功能。     

舒心饮对急性心肌缺血小鼠血小板影响的研究

目的：研究舒心饮对急性心肌缺血小鼠血小板的影响.方法建立小鼠急性心肌缺血再灌注模型,随机选取45只雄性ICR小鼠,依据随机数字表法将这些小鼠分为假手术组、模型组、舒心饮大剂量组、舒心饮小剂量组、抵克立得组5组,每组9只.连续灌胃1个月后造模、采血.运用流式细胞术、单克隆抗体对小鼠CD62 P的阳性表达率进行测定,运用比浊法对小鼠PAR、Fg浓度进行测定,运用放射免疫法对小鼠TXB2和6-keto-PGF1α及其比值进行测定.结果模型组小鼠的CD62 P阳性表达率、PAR、Fg浓度、TXB2/6-keto-PGF1α均显著高于假手术组、舒心饮大剂量、舒心饮小剂量组、抵克立得组（P〈0.05）.结论舒心饮能够对急性心肌缺血小鼠的血小板活化进行有效抑制,从而能对冠心病进行有效防治.