SELEX技术筛选毒死蜱单链DNA适体

试验旨在利用SELEX技术体外筛选毒死蜱的特异性适体。体外合成全长为91 nt的ssDNA文库,以链亲和素修饰的凝胶为载体、毒死蜱为靶分子进行SELEX(配体指数增强系统进化技术)筛选。利用荧光标记法测定适体的筛选效率、亲和力和特异性,通过MFOLD分析软件对亲和力较高的适体进行二级结构预测和结合位点分析。结果表明,经过15轮筛选后,DNA文库的筛选效率达到44.00%;最终获得9条ssDNA适体,其中适体N23对毒死蜱具有最高的亲和力,其结合活性显著高于N23与水胺硫磷、丙溴磷、氧化乐果的结合活性;二级结构表明茎环结构可能是毒死蜱与适体相互作用的结构基础。     

适体SELEX筛选中单链DNA的制备

探讨建立适体SELEX筛选中单链DNA(ssDNA)的制备方法,生成适体筛选的次级库,为适体SELEX筛选奠定基础.将PCR扩增后带生物素标记的双链DNA(dsDNA)连接在链霉亲和素标记的凝胶上,用NaOH变性解链制备ssDNA.利用荧光法分析dsDNA与凝胶结合所需的时间及NaOH对生物素与链霉亲和素标记凝胶结合的...     

2种不同方法制备玉米赤霉烯酮单克隆抗体适配子的ssDNA文库的比较

体外合成全长为71个碱基的随机ssDNA文库,采用SELEX技术,以玉米赤霉烯酮单克隆抗体为靶蛋白,微孔板为筛选介质进行筛选。通过对比不对称PCR法和生物素-链霉亲和素磁珠2种分离方法制备ssDNA文库的效果,确定了以生物素-链霉亲和素磁珠分离方法制备ssDNA为优选方法。ssDNA文库扩增为双链DNA(dsDNA)文库的PCR反应条件为:退火温度50℃,循环数20次。不对称PCR退火温度为50℃,最佳循环数为30次,引物Ⅰ与引物Ⅱ的比例为80∶1。此反应条件下,ssDNA文库PCR扩增的条带清晰、稳定、特异性高。生物素-链霉亲和素磁珠法为有效筛选特异性强的玉米赤霉烯酮单克隆抗体适配子的优选技术方案,为适配子SELEX筛选奠定基础。     

运用SELEX技术筛选嗜水气单胞菌适配子

以嗜水气单胞菌为研究对象,采用适体筛选技术（ SELEX, system evolution of ligands by exponential enrichment）,利用体外合成的长度为J8个核苷酸的随机ssDNA文库,以嗜水气单胞菌为靶目标进行12轮的筛选,利用生物素一抗地高辛碱性磷酸酶显色系统检测DNA适配子与嗜水气单胞菌的亲和力．研究结果表明：随着筛选轮数的增加,DNA适配子与嗜水气单胞菌结合后显色,A（absorbance）值逐渐增加,亲和力由最初的0．32升到第9轮的0．72．研究已初步筛选到与嗜水气单胞菌具有高亲和力的DNA适配子,为嗜水气单胞菌的二级结构研究及其检测试剂盒的研发提供了基础．     

适配体的研究进程与思考

适配体（aptamer）是指利用指数富集的配体系统进化（SELEX）技术，从人工合成的寡核苷酸文库中筛选获得的能够与靶分子特异结合的短单链DNA和RNA分子。筛选得到的适配体可以与DNA，RNA，蛋白质或其它靶分子结合，影响这些靶分子的性质，从而起到改变与靶分子相关的生物学功能的效果。而且研究发现，适配体在与靶分子相互作用时，不仅序列，它们所形成的三维结构也尤其重要。同时，适配体在生物医药研究方面显示出广阔的应用前景。介绍了适配体的发展历程，以及一些典型适配体的生物学功效。提出了RNA适配体三维结构在与靶分子进行相互作用时可能发挥重要作用，以期为RNA适配体的筛选提供理论思考。     

适配体的研究进程与思考*

 适配体（aptamer）是指利用指数富集的配体系统进化（SELEX）技术，从人工合成的寡核苷酸文库中筛选获得的能够与靶分子特异结合的短单链DNA和RNA分子。筛选得到的适配体可以与DNA，RNA，蛋白质或其它靶分子结合，影响这些靶分子的性质，从而起到改变与靶分子相关的生物学功能的效果。而且研究发现，适配体在与靶分子相互作用时，不仅序列，它们所形成的三维结构也尤其重要。同时，适配体在生物医药研究方面显示出广阔的应用前景。介绍了适配体的发展历程，以及一些典型适配体的生物学功效。提出了RNA适配体三维结构在与靶分子进行相互作用时可能发挥重要作用，以期为RNA适配体的筛选提供理论思考。     

不同品牌农药残留快速检测卡的筛选

快速检测卡法是农药残留快速检测市场化程度较高的方法。针对市面上快速检测卡品牌繁多、质量不一、检测结果差异较大等问题,对市面上多个品牌的有机磷类和氨基甲酸酯类农药、菊酯类农药和多菌灵的快速检测卡进行了检测结果对比分析。结果表明,农药残留检测效果较佳的有机磷类和氨基甲酸酯类农药速测卡为HPE品牌、菊酯类农药速测卡为A和I品牌、多菌灵速测卡为X品牌。通过对筛选出来的速测卡进行集成,可以较好地对蔬菜中的12种农药进行快速检测。     

化肥、农药如何混搭使用

正随着农药、化肥品种的逐年增多,在生产中常同时搭配使用。科学合理地混用能起到省工、提效的作用,而盲目地混搭使用不仅会降低效果,甚至会造成意想不到的危害。下面,我们一起来看看混搭使用时必须注意哪些方面。1.农药与农药混合农药与农药混合是个较复杂的问题,并非所有的农药都能混合,在混合中应注意以下几点:(1)酸碱度是影响各组分有效性的重要因素。在碱性条件下,氨基甲酸酯、拟除虫菊醋类杀虫剂、福美双、代     

茄子耐热相关EST-SSR分子标记的研究

本研究通过分析茄子热胁迫抑制性消减杂交(SSH-cDNA)上调表达文库中获得EST序列以及基因组数据库中收集到的与耐热相关的EST序列,对茄子耐热相关的EST-SSR分子标记进行了搜索分析.在茄子热胁迫SSH-cDNA文库中找到了9个SSR位点,结合收集到的耐热EST序列中的25个位点,共设计了32对SSR引物.进一步的引物筛选结果表明,引物对EG6靶向文库EST序列YP249,在不同茄子材料中扩增显示多态性.YP249经实时荧光表达验证确定为热胁迫上调表达序列,考虑EG6的扩增位点为茄子热胁迫相关的SSR多态性候选位点.     

植物源酯酶农药残留快速检测试纸的研制与应用进展

植物酯酶主要用于有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的检测,农药残留快速检测试纸法能快速、无损和现场对蔬菜进行农残检测。本文对利用植物酯酶检测有机磷和氨基甲酸酯类农药的原理、酶源筛选、检测条件和应用前景作一概述,以展望其广阔的市场远景。