应用Cephodex 微载体培养DF-1细胞增殖水貂源犬瘟热病毒的技术研究

为了建立水貂源犬瘟热病毒(CDV)的大规模悬浮培养技术，实现细胞高密度生长和病毒高效增殖，本研究应用Cephodex微载体悬浮培养鸡胚成纤维细胞系DF-1细胞，增殖弱毒株CDV3。整个过程采用摇瓶培养法，通过对病毒培养温度、病毒收获时间等关键技术条件进行优化，确立最佳培养条件。结果表明，DF-1细胞37℃培养至72 h,接种CDV3,35℃继续培养72 h收获病毒，病毒滴度每0.1 mL可达10^5.0 TCID₅₀。CDV微载体悬浮培养技术的初步建立，为高效水貂犬瘟热疫苗的研发生产奠定了重要的基础。     

应用新型CephodexD微载体培养ST细胞增殖CSFV

应用新型CephodexD微载体悬浮培养ST细胞增殖猪瘟病毒(CSFV),并与常规单层静置培养法进行比较。新型微载体悬浮培养的ST细胞密度72h可达18.9×10~5 cells/mL,是单层静置培养工艺的2倍以上;病毒滴度最高可达7.5×10~5 RID/mL,较单层静置培养法提高了50%;在一个生产流程中,能比传统培养工艺多收获2次合格病毒液。而且,采用新型微载体悬浮培养工艺生产的CSFV,能够刺激猪体产生特异性的中和抗体,对猪的保护率达100%,具有很好的免疫原性。因此,新型微载体悬浮培养工艺较单层静置培养法更有技术优势,在CSFV大规模生产领域具有重要的应用价值。     

应用Cephodex微载体规模化生产伪狂犬病疫苗的研究

为实现伪狂犬病病毒(PRV)的大规模生产,本研究应用Cephodex微载体悬浮培养BHK-21细胞,通过对培养工艺的研究,初步实现了病毒抗原的高效生产。整个过程采用流加方式和动物细胞微载体培养技术,在细胞反应器中进行BHK-21高密度培养和PRV的高滴度增殖。结果表明,微载体工艺比转瓶培养法获得的病毒液滴度高约100.525TCID50/0.1 m L。因此,应用Cephodex微载体悬浮培养BHK-21细胞在伪狂犬病疫苗规模化生产中具有重要的应用价值。     

PK-15细胞微载体悬浮培养及PCV2增殖工艺研究

研究表明,PCV2仅在PK15等少数哺乳动物细胞上增殖,但由于PCV2毒力弱,且不产生细胞病变,获得高滴度病毒难度较大~([1])。因此,PCV2的培养滴度高低已成为制约现有疫苗质量的关键瓶颈之一。为建立在生物反应器内微载体逐级放大培养PK-15细胞和增殖PCV2技术,本研究以德国Sartorius14 L生物反应器微载体悬浮培养PK-15细胞,对PK-15细胞初始接种密度、搅拌转速、微载体浓度、PCV2接毒时间、接毒剂量、收毒时间等工艺参数进行了摸索和优化~([2-3])。结果表明:3 g/L的微载体和60 r/min的搅拌转速下,采用0.5×10~6cells/mL的初始接种密度操作工艺可获得最佳PK-15细胞生长效能。细胞生长后6 h接毒,采用感染复数(MOI)为0.5的接毒比例,细胞接毒后在微载体上生长96 h可获得最高的PCV2增殖滴度10~(8.5)TCID_(50)/mL,利用该工艺,经过消化转移将PK-15细胞从14 L反应器放大至42 L反应器,微载体上细胞贴附均匀、生长旺盛,42 L反应器中培养72 h细胞密度可达39.0×10~5 cells/mL,病毒滴度10~(8.3)TCID_(50)/mL,应用生物反应器培养PCV2滴度较常规转瓶培养工艺提高了近10倍。进一步表明PCV2悬浮培养放大与接毒工艺稳定,为下一步实现工业级规模化生产奠定基础。     

生物反应器培养BHK-21悬浮细胞增殖伪狂犬病病毒工艺优化

旨在筛选伪狂犬病病毒（PRV）敏感的BHK-21细胞并分析其生长和病毒增殖特性,优化反应器中BHK-21悬浮细胞的培养和病毒增殖条件,建立生物反应器培养BHK-21悬浮细胞增殖PRV工艺。本研究利用响应面和单因素优化法,以细胞生长动力学特性、TCID₅₀病毒滴度等参数为指标,优化1.2 L生物反应器中BHK-21悬浮细胞的最佳培养和增殖病毒条件,在5 L生物反应器中进一步批培养验证。结果显示,筛选获得PRV高敏感的BHK-21-02贴壁细胞和BHK-21-XF02悬浮细胞各1株,BHK-21-XF02悬浮细胞在含3%血清的SLM-BHK低血清培养基和SFM-BHK无血清培养基中均能实现良好的生长和病毒增殖。利用响应面法优化得到1.2 L反应器最佳培养条件为接种密度1.20×10⁶cells·mL^-1、搅拌转速120 r·min^-1、DO值40%,5 L反应器批培养72 h细胞密度可达（7.61±0.18）×10⁶ cells·mL^-1、细胞活率为（96.93±1.18）%。利用单因素法优化得到1.2 L反应器最佳病毒增殖条件为MOI 0.001、培养温度37℃、细胞密度2.0×10⁶cells·mL^-1、搅拌转速80 r·min^-1,5 L反应器批培养接毒后48 h病毒滴度达到最大值（7.13±0.11） lgTCID₅₀·mL^-1。本研究可为PRV疫苗相关研究和规模化生产提供参考。     

新型CephodexD微载体在猪瘟病毒大规模增殖中的应用研究

旨在应用新型Cephodex D微载体悬浮培养ST细胞增殖猪瘟病毒。通过优化工艺条件初步实现了病毒抗原的大规模高效生产,培养过程采用流加方式保证ST细胞的营养供应。用含6%(v/v)无牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)及其抗体的双阴牛血清MEM生长液培养ST细胞。当达到3.8×109个细胞时,接种入生物反应器中,Cephodex D微载体用量为4 g/L。当反应器内ST细胞生长至48 h,接种猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)液。继续培养4 d后进行首次病毒收获,之后每3 d收获1次,直至第5次收毒结束。整个培养过程持续18d,细胞培养至72 h,密度可达2.8×106cells/m L,生产的CSFV滴度均在100万兔体反应量(RID)/m L以上。较现有的国家标准相比,应用生物反应器和新型Cephodex D微载体悬浮培养技术,不仅病毒滴度提高了1倍,而且整个生产周期缩短了5 d,大大提高了生产效率。因此,本研究采用的新型微载体悬浮培养工艺在CSFV大规模生产中具有重要的应用价值。     

猪流行性腹泻病毒在微载体培养Vero细胞上的增殖试验

为了探索猪流行性腹泻病毒(PEDV)在微载体培养Vero细胞上的增殖效果,采用2 L生物反应器进行微载体培养Vero细胞和PEDV繁殖,并摸索细胞生长和病毒繁殖的最佳条件,检测病毒滴度,与方瓶培养的病毒滴度进行比较。结果显示:当微载体为5 g,种子细胞数约3.05×107个,采用灌注式培养,Vero细胞经72 h长满单层,细胞数约为3.02×109个,此时用滴度为104.45TCID50/m L的PEDV 1 m L感染Vero细胞,培养96 h,微载体上80%细胞脱落时收毒,培养的PEDV具有较高的病毒滴度。相同病毒在微载体系统与方瓶上进行同步传代,经检测病毒滴度均有提高,但在微载体系统上培养的PEDV最高滴度可达到106.05TCID50/m L,明显高于方瓶培养。本试验为研究PEDV能更好适应Vero细胞,提高PEDV产量提供技术支持。     

应用生物反应器培养猪传染性胃肠炎病毒

为了大规模生产猪传染性胃肠炎病毒抗原,试验采用生物反应器及微载体进行ST细胞的培养,待微载体上的ST细胞长满至单层后接种猪传染性胃肠炎病毒(TGEV).共使用生物反应器培养3批TGEV抗原,每批培养过程中分别调节初始细胞密度至2.14×106个/mL、1.83×106个/mL和2.02×106个/mL,微载体浓度为3g/L、6 g/L和9 g/L.结果表明应用生物反应器及微载体培养得到抗原的病毒含量均达到108.0 TCID50/mL,明显高于转瓶培养的病毒含量.     

BHK-21细胞中猪乙型脑炎病毒动态增殖的研究

为了研究猪乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)在仓鼠肾细胞(BHK-21细胞)中的增殖情况，试验首先建立了实时荧光定量PCR方法，并检测该方法的敏感性、特异性和重复性，然后利用建立的实时荧光定量PCR方法和病毒半数组织感染量(TCID₅₀)方法测定并比较猪JEV在BHK-21细胞中的增殖规律。结果表明：建立的猪JEV实时荧光定量PCR检测方法的扩增效率为99.3%,敏感性、特异性和重复性良好，检测敏感性可以达到1.0×10¹ copies/μL;TCID₅₀方法测定的细胞悬液和细胞培养上清液中的病毒含量分别为1.0×10^5.44 TCID₅₀/0.1 mL和1.0×10^4.86 TCID₅₀/0.1 mL,实时荧光定量方法测定的病毒粒子数量分别为1.0×10^7.50 copies/μL和1.0×10^5.60 copies/μL,两种方法在细胞悬液中...     

基于生物反应器的猪流行性腹泻病毒(ZJ/15株)悬浮培养工艺研究

为了优化生物反应器全悬浮培养技术制备猪流行性腹泻病毒(ZJ/15株)的工艺,试验首先通过摇瓶培养对病毒接种时的细胞密度、胰酶浓度、接毒剂量和收毒时间等培养条件进行优化;之后按照摇瓶培养确认的工艺进行生物反应器全悬浮培养工艺验证,同时对pH值、溶氧值(DO)、转速等培养参数进行优化,以病毒含量(TCID₅₀)为指标,最终筛选出在15L生物反应器中培养猪流行性腹泻病毒(ZJ/15株)的最优条件,并进一步在50L生物反应器中进行工艺验证,将病毒液灭活后稀释至1×10^7.0 TCID₅₀/mL免疫怀孕75～90d的健康易感初怀母猪,在分娩当日,采集母猪和仔猪血清,并对分娩的3日龄仔猪攻毒进行免疫原性试验。结果表明：猪流行性腹泻病毒(ZJ/15株)在摇瓶上的最适培养条件为当细胞密度达到6×10⁶ 个/mL以上时,用含胰酶(终浓度为20μg/mL)的无血清培养基将细胞密度稀释至2×10⁶ 个/mL,按感染复数(MOI)=0.1接毒,130 r/min摇床振荡培养36h可收获病毒液,病毒含量...     

裕固族的草原游牧文化(Ⅳ)——裕固族的生活文化

研究裕固族的生活文化对巩固民族团结、促进中华民族和谐统一具有十分重要的意义。通过查阅资料让人们了解裕固族人的风俗习惯,是一种传统的精神力量与物质环境相互作用的自然产物,是裕固族民族传统生活文化的主要载体及传承方式,他主要外化于裕固族人的衣食住行、生丧嫁娶及岁时节日习俗中。     

草业科学类学院文化建设的思考与实践——以兰州大学草地农业科技学院学院文化为例

大学学院文化是校园文化灵魂,先进的学院文化是人才培养、科学研究、服务社会、传承文化的精神动力和智力支持,而草业科学类学院文化是农耕文明与人类文明的结晶。本研究阐述了综合性大学农学类学院文化建设的重要性和内涵,指出农学类学院文化包括精神文化、物质文化、制度文化和环境文化四个方面,并以兰州大学草地农业科技学院为例,剖析了草业科学类学院文化建设沉淀过程,提出了建议,以便为草业科学类学院的文化建设提供借鉴和参考。     

悬浮培养技术在生物制药中的应用和展望

综述了国内外细胞悬浮培养产业化发展现状及其关键技术。细胞悬浮培养是利用生物反应器大规模培养动物细胞生产生物制品的核心技术,结合筛选驯化的高表达细胞株和个性化细胞培养基,控制细胞培养过程,实现提高生产效率及产品质量、降低生产成本的目的,是当前国际上生物制品生产的主流模式。但该技术目前在国内尚未得到广泛应用,生物制品生产仍主要采用病毒产率低、生产成本高、劳动强度大的转瓶细胞培养方式。随着现代生物技术发展,利用细胞悬浮培养技术进行生物制品生产是生物制药行业发展的必然趋势。     

企业文化差异性对企业并购的影响

随着时代迈入21世纪，企业并购频频发生，并且其规模有着越来越大的趋势。然而并购前大量一致被看好的案例，在并购发生后，结果都差强人意。其根本原因在于人们习惯于从企业硬件方面来看问题，而忽略了企业文化（软件）的差异性。本文通过分析企业文化差异性对企业并购的影响，最后提出规避企业文化差异性对并购不利影响的几点建议。     

培养基不同制造工艺对细菌培养效果的影响

用传统工艺和改进工艺制备培养基,进行大肠杆菌的培养,比较不同制备工艺对细菌培养效果。结果：在其他培养条件相同情况下,用传统工艺制备培养基培养三批大肠杆菌,其活菌数分别是4.6×10^5、5.2×10^5、3.9×10^5;平均4.57×10^5。用改进工艺制备培养基培养三批大肠杆菌,其活菌数分别是8.2×10^5、8.6×10^5、8.0×10^5;平均8.27×10^5。后者比前者增加活菌数3.7×10^5。     

先秦时期水牛文化遗产的梳理与提炼*

在水牛已从役用向食用方向转变、产业转型升级的背景下,挖掘我国水牛文化起源,有助于解决现代水牛相关产品设计“同质化”、缺乏文化底蕴等问题。 本文从考古遗存、神话传说和民俗活动三方面收集、甄别水牛文化遗产,结合历史和社会背景对水牛文化进行梳理归纳,发现先秦时期水牛主要服务于宗教和军事需求,形象被广泛用于图腾、牺牲、礼器、运输,形成了早期民族美学理念。春秋战国时期,出现水牛拉犁的耕种模式,水牛的职能开始从祭祀向役用方向转变。先秦时期的水牛文化提炼能促进现代水牛奶、肉、皮、角等产业发展,可为产品、包装、广告设计提供新思路,并对开拓水牛特色产品市场、打造文化经济、弘扬传统文化等具有理论指导意义。     

大学生自主文化生活的现状调查与教育引导

通过对西南大学部分学生在网络、流行文化、道德文化三方面认知情况的调查，分析大学校园文化氛围、学生文化意识，指出其中的问题所在，并提出相关建议。     

悬浮培养工艺与转瓶培养工艺的比较分析

采用反应器全悬浮培养BHK21细胞生产口蹄疫病毒与微载体悬浮培养Vero细胞生产狂犬病毒分别与相应的转瓶培养工艺生产案例对比分析,比较悬浮培养工艺与转瓶培养工艺的生产效益。分析显示,与转瓶培养工艺相比,反应器悬浮培养工艺获得的细胞密度、病毒效价、产品的产量和质量明显提高,生产时的能耗和劳动力需求明显降低。结果表明悬浮培养工艺的生产效益明显高于转瓶培养工艺,适宜于国内生物制品工业化生产的升级换代。     

兔胚胎体外培养液研究进展

兔胚胎体外培养研究受到广泛重视。传统的兔胚胎体外培养方法主要采用基础培养液 ,添加各种成分 ,如血清、生长因子、酶及其他营养成分促进胚胎发育。近年来 ,国内外学者对氨基酸、牛磺酸和亚牛磺酸等能源物质 ,胰岛素及胰岛素样因子 1、碱性成纤维细胞生长因子、血小板活化因子、血小板衍生生长因子和白血病抑制因子等多种生长因子 ,以及抗氧化剂如EDTA、过氧化氢酶、牛磺酸和超氧化物歧化酶等物质促进兔早期胚胎发育的作用进行了研究。此外 ,采用联合培养体系及体细胞条件培养液 ,模拟体内生长环境 ,来提供兔胚胎发育所需的物质条件也正成为研究热点