茶树叶绿素酶提取、分离纯化与性质的初步研究

在优化茶树叶绿素酶提取及活性分析条件的基础上,对茶树叶绿素酶的分离纯化及其性质进行了研究,结果表明:加入与鲜叶等量PVP,用pH7.5的磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液提取的叶绿素酶活性最高,叶绿素酶的活性分析最佳条件为在45℃条件下反应15min;经过分离纯化后,叶绿素酶的纯度提高了55.96倍,酶的得率为9.45%,SDS-PAGE结果显示有一条蛋白质的条带,酶的亚基分子量为37.2kD;对纯化后的叶绿素酶的性质研究表明,该酶最适pH为7.5,45℃时候反应活性最高,在4℃保存条件下,随着存放时间的延长,酶活性逐渐下降,保存一个月后叶绿素酶活性剩余45%,用2mmol/L和7mmol/L的金属离子(Ca2+、Mg2+、Zn2+、Fe3+)、EDTA处理,都对叶绿素酶活性有不同程度的促进作用。     

从茶树鲜叶中提取RNA的方法

本文是在前人提取RNA的方法上略加改进，从而设计出一种高效的从茶树鲜叶中提取RNA的方法该方法同时也适用于其它高等植物，具有操作简便，耗资少等优点，特别适用于经费相对较少的实验室。     

茶树基因组DNA提取纯化技术研究

本研究以福鼎大白茶，云南在叶种为材料，设计了六种茶树基因组DNA提取纯化方案，以纯品DNA的OD260／OD280比值1．8为标准，参考基因组DNA的制率及分子量大小，确定了茶树基因组DNA最佳提取纯化方法，实验表明，不溶性聚乙烯吡咯烷酮和饱和酚对提高茶树基因组DNA纯化质量是十分有益的。     

茶树鲜叶抗坏血酸过氧化物酶活性的变化规律及测定方法

探讨茶树鲜叶抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性的测定条件,分析不同茶树品种以及茶树鲜叶不同叶位APX活性的变化.结果表明:聚乙烯聚吡咯烷酮(PVPP)加入量约为鲜叶重的1.5倍,酶提取液pH为7.8.反应液pH为7.O,抗坏血酸(AsA)浓度为0.50 mmol/L时茶树鲜叶APX活性最高;茶树鲜叶APX活性随冷藏时间的延长呈下降趋势;福建7个主要茶树品种以福鼎大白茶的APX活性最高,铁观音的APX活性最低;茶树鲜叶不同叶位APX活性变化趋势为:芽>第一叶>第二叶>第三叶>老叶>嫩茎.     

茶树生理 遗传的酶学研究进展

根据国内外近十几年有关茶树酶的研究报道，较为系统地阐述了酶与茶树生理，遗传的变化规律。     

一种新的茶树DNA提取方法--LiCl沉淀法

试验以铁观音茶树品种叶片为供试材料,比较了三种SDS改良法提取茶树基因组DNA的效果.结果表明,采用4mol·L-1LiCl沉淀RNA的方法,省却了使用RNase去除RNA的步骤,凝胶电泳表明所获得的DNA纯净,基本无蛋白质、RNA或多酚类等干扰物质,有效地克服了影响茶树DNA提取的不利因素.     

一种改良的茶树高质量RNA快速提取方法

为了从富含多酚与多糖的茶树叶片中制备高质量的总RNA，作者在通用Tri-Reagent法的基础上进行改良，即在操作进行到沉淀RNA这一步时先加入1／2倍体积的高盐，再加入1／2倍体积的异丙醇，以除去茶多糖的干扰；同时使整个操作过程在低温环境下迅速连贯地进行，以防止褐化效应并减少RNA酶的污染。利用改良的方法所提取的茶树总RNA，经琼脂糖电泳鉴定，可见2条清晰的28sRNA和18sRNA谱带。且前者明显强于后者，表明RNA完整性好，无明显降解现象。     

茶树蛋白质提取及双向电泳的改良方法

研究了茶树芽叶蛋白质提取纯化及双向电泳技术,在样品制备、电泳及染色等方面进行了技术改进,解决了茶树芽叶中富含色素、多酚类化合物及其氧化产物等对双向电泳严重干扰的问题,探索出一种可获得重复性好,清晰度高的蛋白质双向电泳图谱技术;同时发现一种辨别茶树蛋白质样品质量好坏的简便方法。电泳图谱可分辨出茶树芽叶蛋白质斑点数500个左右,蛋白质相对分子量约在14.0 kD～100.0 kD范围内,主要分布在14.0 kD～67.0 kD之间;等电点约在4～9.5范围内,主要分布在4～6.5。     

大豆萌发过程中谷氨酸脱羧酶活性变化研究

研究了大豆在浸泡、萌发两个过程中谷氨酸脱羧酶(GAD)的活力变化。通过测定大豆中γ-氨基丁酸(GABA)的含量变化,间接测定大豆中GAD的活性。结果表明,大豆在25℃,浸泡10h,大豆中的GAD活性达到浸泡中最高水平,酶活性为2.45U。浸泡后的大豆在30℃,萌发40h时,酶活性达到萌发中最高水平,为1.28U。大豆在浸泡和萌发两个状态下,GAD活性较储藏期都有很大提高,且浸泡时酶活总体水平高于萌发期酶活总体水平,其中大豆GAD在25℃,浸泡10h时活性最高,为2.45U。     

固相萃取-高效液相色谱串联质谱法测定油菜薹中反式维生素K1含量

为准确测定反式维生素K1的含量,建立了基于固相萃取-高效液相色谱串联质谱的甘蓝型油菜（Brassica napus L.）菜薹反式维生素K1高灵敏检测技术。样品经正己烷提取、中性氧化铝柱净化后,用C30反相色谱柱,以甲醇 （含0.025%甲酸+2.5 mmol/L甲酸铵）为流动相,采用选择反应监测（selected reaction monitoring, SRM）模式进行定量分析,20 min内可实现顺反异构体色谱分离。方法学考察结果显示,反式维生素K1在范围内线性关系良好,相关系数为0.9985。该方法检出限为0.29 μg/kg,定量限为0.95 μg/kg。回收率为87.5%～117.6%,精密度（RSD）在0.72% ～9.59%之间。利用该方法对油菜薹和反式维生素K1含量高的3种蔬菜进行分析,发现油菜薹中反式维生素K1含量为340.08 μg/100g,高于小白菜（B. rapa spp. chinensis,260.93 μg/100g）、西兰花（B. oleracea var. Italic Planch, 167.65 μg/100g）和结球甘蓝（B. oleracea var. capitata,151.11 μg/100g）。本文建立的蔬菜中反式维生素K1准确定量分析方法操作简单、灵敏度高、结果准确。同时比较发现油菜薹是一种富含维生素K1的蔬菜。      

微波炉萃取鲜、粗、细茶叶中的农残及气相色谱检测

本文主要介绍用普通家用的变频微波炉萃取鲜茶叶、粗茶叶、细茶叶中的各种有机氯农药残留，采用氟罗里硅土柱层析净化方法，以AN-5毛细管柱、GC—ECD的气相色谱法进行检测分析。此种方法萃取效果快而好，溶剂使用量少、操作简便快速，一个样品在2—2．5h内就可完成，可满足茶叶中多种农药残留检测的需要。其中对“鲜茶叶的农残检测”进行初步实验。是“茶叶的农残从源头控制。快速检测鲜茶叶农残”的难题的一个尝试。     

大豆异黄酮的提取优化与测定

试验优化了大豆异黄酮的提取方法,建立了一套适用于实验室提取、测定异黄酮含量的高效液相色谱法(HPLC)标准体系。优化后建立的提取条件为:脱脂大豆样品粉末,加入体积浓度为80%的色谱级甲醇10 mL,室温下放置2 h,置于超声功率200 W条件下80℃水浴12 h,12 000 r·min~(-1)离心15 min,取上清液经0.45μm微孔滤膜过滤,待测液4℃保存。优化后的HPLC法:流动相选择甲醇-水(体积比30∶70),柱温设置40℃,波长为254 nm,流速为1 mL·min~(-1),进样体积10μL,进样时间26 min,采用峰面积法计算。结果表明:优化的HPLC法提取大豆异黄酮的效率高、精度高,可为实验室内高效提取大豆异黄酮提供技术参考。     

The activity ratio of glutamine synthetase to sucrose synthase: A physiological feature explaining the variation in grain nitrogen-based protein content of rice

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不同提取工艺对茶树菇多糖得率及抗脂质过氧化作用的影响

采用水提醇沉法提取茶树菇多糖,设计单因素试验和正交试验以探讨提取温度、pH值和细胞破碎方式等因素对茶树菇多糖得率及抗脂质过氧化能力的影响.从而优化茶树菇多糖的提取工艺.正交试验结果表明:最佳理论提取工艺条件:温度为80℃,pH值为7.5,细胞破碎方式为冻融3次;最佳直观分析提取工艺:温度为80℃,pH值为7.5,细胞破碎方式为超声波30 min.验证试验结果表明,二者差异不显著.考虑到成本、能耗等问题最终确定最佳提取工艺为温度为80℃,pH值为7.5,细胞破碎方式为超声波30min.     

Improving the Efficiency of Antioxidant Extraction from Mango Peel by Using Microwave-assisted Extraction

The purpose of this study was to analyze the extraction efficiency of antioxidants from mango peel by comparing two techniques: microwave-assisted (MAE) and traditional solvent (TE) extraction. The number of extraction steps, water content in the extractant, peel weight-to-solvent volume ratio in extractions and extraction time all had an influence on obtaining extracts with high antioxidant capacity, but the extraction technique and the water content in the extractant were the factors with the greatest effect. Using three steps, a water content of 50 % in the ethanol:water extractant, an extraction time of 60 min and a weight-to-volume ratio of 1:10 or 1:50 (w/v) led to the highest antioxidant activity and phytochemicals content in extracts. The extraction time needed to extract phytochemicals from mango peel was similar when MAE and TE were used. However, the antioxidant capacity and phytochemical content were around 1.5–6.0 times higher in the extracts obtained by MAE.     

花生白藜芦醇合成酶基因家族序列克隆及分析

本研究以花生H2007为材料,从花生基因组中扩增出约500bp的白藜芦醇合成酶基因（Resveratrol synthase,RS）的保守序列,该序列与已发表的来源于花生的RS推导的蛋白序列相似性为91%。根据获得序列设计巢式基因特异性引物,以紫外辐射后花生叶片总RNA反转录成的cDNA作为模板,通过3’-RACE （Rapid Amplification of cDNA Ends）,获得15个不同RS基因的片段,序列分析结果表明, 扩增得到的15个白藜芦醇合成酶基因片段与已报道的基因的序列相似性为86%-98%。RS的部分编码区聚类分析的结果表明这15个序列遗传距离在0.05之内(图5)。15个RS基因的3’-UTR碱基长度不等,最短的有69bp,最长的有244bp,两两比较相似性为23%～100%。四组RS基因的部分编码区聚类分析结果与3’-UTR 区相同。     

茶多糖生物活性及提取纯化的研究进展

茶多糖是一种碳水化合物聚合体,具有降血糖、降血脂、提高机体免疫力、抗凝血、抗血栓、耐缺氧、抗紫外线、杭X射线辐射等一系列特殊保健功能。本文综述了茶多糖的组成、结构、多种特殊功能和茶多糖的提取纯化及其应用。