三株链霉菌噬菌体研究

从土壤中分离到三株链霉菌噬菌体HPA1、HPA2、HPA3,对它们的形态学和稳定性进行了研究。在营养琼脂培养基平板上,它们所形成的噬菌斑形状各不相同,噬菌体HPA1所形成的噬菌斑大小中等且透明;HPA2的噬菌斑较大,中间透明边缘模糊,似日晕状;而HPA3的噬菌斑较小,针眼状。电镜观察指出,三株噬菌体的头部外形都呈球形,但其大小和尾部长度有所不同。HPA1长尾,HPA3短尾,而HPA2无尾。它们的宿主范围较窄。除链霉菌的某些属外,它们不能侵染链孢囊及其他属的放线菌。其中HPA2对氯仿和温度的耐受力都较强,且在60℃时,仍有21％能够存活。     

梅花鹿生茸区骨膜细胞基因片段测序分析

在已经构建的梅花鹿生茸区骨膜细胞cDNA表达文库的基础上对文库中的噬菌斑进行随机挑取筛选,对筛选出来的噬菌斑进行质粒亚克隆、鉴定及表达序列标签序列测定和生物信息学分析。通过随机筛选及生物信息学分析的方法发现,在梅花鹿生茸区骨膜细胞中有特殊意义的基因或者基因片段。随机挑选表达频率比较高的11个基因片段中有6个基因片段具有重要意义,对这6个基因片段进行了生物信息学分析,为进一步的鹿茸生物学研究打下了基础。     

柑桔基因组DNA的MADS盒基因噬菌斑原位杂交

以大三岛脐橙基因组DNA为材料，用拟南芥AP1和矮牵牛FBP1的混合质粒DNA为模板，采用随机引物法标探针对柑桔基因组DNA文库进行噬菌斑原位杂交，结果表明，柑桔基因组中也存在控制花特异表达的MADS盒基因。     

4种噬菌体对寄主青枯菌的敏感性及作用受体分析

【目的】明确不同噬菌体混合对茄劳尔氏菌(青枯菌)Ralstonia solanacearum裂解能力和对噬菌体抗性产生的影响,了解4种噬菌体的作用受体。【方法】将4种噬菌体P1556-1、P1556-2、P7-1和P1521两两混合后,比较其在青枯菌平板上产生的噬菌斑大小;噬菌体与青枯菌混合培养测定青枯菌对噬菌体的抗性;通过噬菌体与脂多糖和膜蛋白的吸附试验测定噬菌体的作用受体。【结果】噬菌体P1556-1产生的噬菌斑最大,裂解青枯菌的能力强。4种噬菌体两两混合产生的噬菌斑与单一噬菌体产生的噬菌斑大小没有显著差异,但可延缓抗噬菌体的青枯菌产生。噬菌体P1556-2可被青枯菌的脂多糖吸附,P1521能被脂多糖和膜蛋白吸附,而P1556-1和P7-1均不能与脂多糖和膜蛋白作用。【结论】不同噬菌体混合不能提高其裂解青枯菌的能力,但可以延缓抗性青枯菌的产生;不同噬菌体作用受体不同。     

一种利用噬菌体裂解大肠杆菌Rosetta菌株菌体的方法

Escherichia coli Rosetta菌株是基因克隆表达的重要宿主菌,为了探索裂解E.coli Rosetta菌体的新方法,从污水中分离到1株能裂解E.coli Rosetta菌株的噬菌体,命名为ETP-1,并研究其生物学特性和裂解效率。结果表明,EPT-1在双层平板上形成直径为1~3 mm的噬菌斑;噬菌斑透明,周围有晕环;该噬菌体的潜伏期为20min,裂解期为70 min,在55℃以上以及p H值大于11时,噬菌体失去活性。在6 h内,噬菌体可裂解73%的E.coli Rosetta菌体,ETP-1裂解其宿主细胞为E.coli Rosetta菌株菌体的破碎提供了新的方法。     

花生球蛋白基因克隆及其表达分析

利用噬菌斑原位杂交技术从花生未成熟种子cDNA文库中筛选到一个花生种子贮藏蛋白基因全长cDNA,该cDNA包含一个1 886 bp的开放阅读框,可编码536个氨基酸残基,Northern分析发现,该基因在种子发育早期开始表达,在之后的各个时期表达水平均较高。     

紫外线照射辣椒叶片cDNA文库构建及部分防御信号基因cDNA的检测

对抗病的朝天椒地方品种,以紫外线(UV)处理叶片并提取叶片总RNA,采用SMARTTMcDNA文库构建试剂盒构建了一个cDNA文库.该文库含有2.6×106个独立的噬菌斑克隆,扩增后滴度达到1.5×109pfu.μL-1,随机挑取的噬菌斑PCR检测发现重组率达90.0%.在搜索、拼接与植物WRKY、bZIP、AP2和E2等重要调节基因同源的辣椒表达序列标签(ESTs),获得重叠群的基础上,分别设计上述基因ESTs重叠群特异性引物,以cDNA文库为模板进行PCR扩增.结果表明,部分上述基因cDNA存在于文库中.因此,本研究所构建的文库可用于进一步分离响应UV的重要调节基因cDNA的分离.     

一种基于历史记录的网络流量数据采样方法

通过将宏观网络流量的变化特征分解成为具有历史记忆特点的周期变化特征和具有随机变化特点的趋势变化特征，提出了一种基于历史记录的网络流量数据采样方法（NFDS—HM）．实验表明：NFDS-HM采样算法对实际网络流量曲线进行拟合的结果，在其所获得的样本数量比Poisson采样过程所获得的样本数量减少25％的情况下，其期望值失真率、方差失真率分别降低了16．4％和16.2％.     

玉米枯萎欧氏杆菌(Erwinia stewartii Dye)两种类型噬菌体性状的比较研究

从不同材料上陆续分离到5株中央有透明区的晕斑型噬菌体,这些噬菌体的寄主范围专化,只侵染玉米枯萎欧氏杆菌的强致病力菌株。铁盐对游离状态和吸附状态的噬菌体都具有相同程度的灭活作用,但作用的浓度有所不同。经一系列其他性状的研究把这些噬菌体分为两个类群。EZPI型以ZP6为代表,其噬菌斑直径较大,18小时晕斑和中央亮区直径分别为4和2.5毫米,热钝化温度为54℃/10分,对介质的酸碱度比较敏感,吸附比率在10％左右,潜育期为35—40分钟,平均裂介量为139,粒体形态属短尾形(Bradey分类C组)。EZPⅡ型以ZP11为代表,其噬菌斑较小,18小时晕斑和中心亮区直径分别为2和O.4—0.5毫米,热钝化温度为74℃/1O分,对介质的酸碱度有较大耐性,吸附比率在35—51％,潜育期长达75—80分钟,平均裂介量为205,粒体形态为蝌蚪形,尾长不收缩(Bradey分类B组)。在血清学方面两组噬菌体也有不同。     

紫外线辐射的葡萄幼果cDNA文库的构建

以紫外线辐射的葡萄幼果为材料提取总RNA,用SMARTTMcDNA文库构建试剂盒构建cDNA文库,初始文库含有1.5×106个独立的单克隆,扩增后滴度达到1.2×108pfu.mL-1.随机挑取噬菌斑进行PCR检测,发现重组率在92.9%以上.     

酸奶生产中的噬菌体污染

利用噬菌斑形成、产酸抑制等方法进行检测,对酸奶工厂存在的嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)噬菌体和保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)噬菌体进行了初步的研究。结果表明,嗜热链球菌噬菌体为烈性噬菌体,而保加利亚乳杆菌噬菌体为温和噬菌体。     

过氧化氢诱导猪卵巢颗粒细胞自噬及其对凋亡的影响

[目的]本试验旨在研究抑制氧化应激诱导的自噬对猪卵巢颗粒细胞凋亡的作用。[方法]采用流式细胞术和细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK8)检测不同浓度(0、50、100和150μmol·L~(-1))过氧化氢处理12 h对猪颗粒细胞的凋亡诱导作用和细胞活力的影响;Western-blot检测微管相关蛋白1轻链3(LC3,包括LC3-Ⅰ和LC3-Ⅱ)和自噬相关蛋白P62/SQSTM1的表达量变化,转染GFP-LC3质粒检测自噬体的数量;利用3-甲基腺嘌呤(3-MA)提前4 h抑制自噬后再氧化应激12 h,用流式细胞术检测细胞的凋亡率,CCK8检测细胞活力。[结果]氧化应激12 h后,细胞活力随过氧化氢浓度提高显著降低,凋亡率显著上升。在氧化应激前6 h LC3-Ⅱ相对表达量先增加后减少,P62的相对表达量先减少再增加;转染GFP-LC3质粒后,自噬体数量极显著上调,6 h后显著下降,上述结果表明在氧化应激早期自噬增加,持续氧化应激自噬受到抑制。若提前4 h用3-MA抑制自噬,再用过氧化氢处理12 h,抑制自噬后细胞凋亡率较单独氧化应激组显著下降,细胞活力也显著上升。[结论]氧化应激能诱导猪卵巢颗粒细胞的凋亡和早期自噬,若抑制早期自噬,凋亡率会下降。     

中国美利奴绵羊55L9BAC克隆基因的筛选与序列的初步分析

利用绵羊55L9 BAC(细菌人造染色体)克隆制备探针,采用噬菌斑原位杂交方法,从中国美利奴细毛羊cDNA文库中筛选与免疫相关的基因,并对筛选得到的候选基因进行测序及软件分析.初步筛出12个候选阳性克隆.经过测序和比对,推测有8个独立的序列可能与绵羊的免疫及疾病相关,其中2个基因可以在已提交的BAC序列中定位.     

黑龙江镜鲤基因组DNA文库的构建

纯化镜鲤体组织的高分子量基因组DNA,经限制性内切酶Sau3A Ⅰ部分消化后,10％-40％蔗糖密度梯度离心分离并回收9—23kb的DNA片段。以λDASHⅡ为克隆载体,与9—23kb的DNA片段进行连接和包装,构建了镜鲤的基因组DNA文库。随机选取5个独立的噬菌斑,提取DNA后用EcoR Ⅰ与BamH Ⅰ进行酶切分析,证明克隆插入率为100％。经测定,该文库的滴度是108pfu/mL,根据公式N=ln(1-P)/In(1-f),99％的镜鲤基因组包含在该基因组文库中。以鲤IGF-Ⅱ基因探针对该基因组文库进行Southem杂交,筛选到相关的阳性克隆,证明这是一个较为完整的镜鲤基因组DNA文库。     

氯离子对土壤中氮肥的行为及微生物数量和酶活性的影响

在土培条件下，研究了不同ＣＩ浓度对氮肥转化，土壤微生物数量及酶活性影响。表明ＣＩ对土壤中细菌，放线菌，真菌的总量无明显影响，但能明显减少亚硝酸细菌数量，因而土壤中ＮＯ３－Ｎ形成减少，ＣＩ还能提高滨海盐土中磷酸酶和脲酶及潮土中磷酸酶的活性，经显著性检验，达１％显著水平，但在低丘红壤，施ＣＩ－５００－１０００ｍｇ／ｋｇ土的处理，两种酶活性的降低，经显著性检验，达５％显著水平。     

黑龙江镜鲤基因组DNA文库的构建

纯化镜鲤体组织的高分子量基因组DNA,经限制性内切酶Sau3A Ⅰ部分消化后,10％-40％蔗糖密度梯度离心分离并回收9—23kb的DNA片段。以λDASHⅡ为克隆载体,与9—23kb的DNA片段进行连接和包装,构建了镜鲤的基因组DNA文库。随机选取5个独立的噬菌斑,提取DNA后用EcoR Ⅰ与BamH Ⅰ进行酶切分析,证明克隆插入率为100％。经测定,该文库的滴度是108pfu/mL,根据公式N=ln(1-P)/In(1-f),99％的镜鲤基因组包含在该基因组文库中。以鲤IGF-Ⅱ基因探针对该基因组文库进行Southem杂交,筛选到相关的阳性克隆,证明这是一个较为完整的镜鲤基因组DNA文库。     

生物制品公司周边环境中2株大肠杆菌噬菌体的分离鉴定

为了检测生物制品公司周边环境中噬菌体的种类及含量,以大肠杆菌(CMCC44102)为宿主菌,对生物制品公司污水处理厂污水样本中的噬菌体进行了分离纯化,并对纯化样本的一般生物学特性进行了鉴定。实验分离获得了2株噬菌体ΦL和ΦS,ΦL噬菌斑直径为1~2mm,ΦS噬菌斑直径为0.1~0.3mm。2株噬菌体在电镜下形态极为相似,均可见明显头部和尾部结构,头部呈正多面体,直径约为33nm;尾部较短,长约21nm,可见爪刺样结构。ΦL与ΦS的一般生物学特性大多相似,前者效价为2.129×10~(10) PFU/mL,后者为2.5645×10~(10) PFU/mL;2株噬菌体的最佳感染复数均为10;在37℃及以下温度均具有良好的稳定性;且均对宿主菌,即大肠杆菌(CMCC44102)具有高度属特异性。一步生长曲线结果表明,ΦL的潜伏期和爆发期均显著短于ΦS,说明ΦL生长能力强于ΦS。上述结果表明,生物制品公司周边环境中存在大量噬菌体,并对一些重要工程菌具有高度特异性,应高度关注并防止其对生物产品质量产生影响。     

果园间种不同绿肥对天敌的影响及对害虫的控制情况调查

在果园生态系统中，自然因素对生物的生存和发展起着调节作用，实验表明．果园间作绿肥，能明显增加果园内天敌的数量，有效地抑制害虫的发生发展，且不同绿肥，天敌的数量和种类不同，对苹果蚜虫，叶螨及其它害虫的控制率分别达到76．26～85．13％．33．57～52．23％。33．52～59．10％。     

利用T4快速检测T4宿主型大肠杆菌初探

【目的】建立一种定量检测噬菌体宿主菌的简捷方法。【方法】按体积比1∶9将4.4×109pfu/mL的T4工作液和已知活菌浓度的T4宿主型大肠杆菌工作液混合形成模拟样品,立即在37℃150 r/min下作用5 min完成侵染,接着采用离心、微滤分离技术清除样品中直径0.22μm以下的物质(包括游离T4),同时将颗粒物(包括受侵染的大肠杆菌)截留在微滤膜中。待受侵染大肠杆菌裂解后,用SM缓冲液将子代T4从微滤膜中洗滤出来,收集滤液得到转换样品。通过噬菌斑计数法测出转换样品子代T4数量,分析其与模拟样品T4宿主型大肠杆菌活菌数量的定量关系。【结果】模拟样品T4宿主型大肠杆菌活菌数的对数和转换样品子代T4数量的对数呈一元线性关系;参试菌株和试验条件决定着方程的斜率和截距。【结论】按照上述方法转换样品,并根据转换样品子代T4数量和上述一元线性关系,可以快速测定样品中T4宿主型大肠杆菌的活菌含量。     

麦豆连作田套种油菜对大豆害虫及其天敌的生态效应

１９８６、１９８７和１９９０年在皖北麦豆连作的夏大豆产区进行了于小麦生长后期套种油菜的试验，结果表明：套种油菜可有效地增殖豆田天敌数量，较对照田高１．６７～２．１４倍，从而大豆害虫得到有效控制。百株蚜量较对照减少６１．４％～７３．３％（豆蚜大发生年份）和２０％左右（豆蚜轻发生年份），豆天蛾数量减少３６．８％～９０％，大豆食心虫虫食粒率降低３４．９％