运用伊氏锥虫抗原变异规律进行免疫的初步研究

为了克服锥虫抗原变异对宿主免疫反应的干扰，探索伊氏锥虫病高效保护性抗原，根据伊氏锥虫在宿主体内第一次发生变异产生的变异抗原免疫原性相同的规律，设计了伊氏锥虫变异前抗原（VSG1）和第二次变异所产生的抗原（VSG2）复合物作免疫原，对小鼠进行免疫与单用变异前抗原免疫鼠相比较，两组鼠都用带变异前抗原的虫攻击，另以未免疫的鼠作对照，结果VSG1＋VSG2免疫组小鼠8只全部获得保护，单用VSG1免疫组小鼠10只和未免疫组小鼠10只血中全部出虫而死亡，前者比后者出虫时间和存活时间延长，提示运用伊氏锥虫抗原变异这一规律设计的这种免疫复合物，能激收缩主克服虫体抗原变异对免疫保护的干扰。     

伊氏锥虫在小鼠体内抗原变异规律及免疫保护试验

为了探索伊氏锥虫抗原的变异规律及其用于免疫预防的可能性，首先对伊氏锥虫安微株单虫克隆2个早期变异体ShTatl.1、ShTat1.2采用蛋白酶抑制剂TLCK处理，分离纯化这2种变异体的VSG，用ShTat1.1 VSG免疫KM小鼠，ShTat1.1锥虫攻击免疫鼠后6d分离锥虫，经间接免疫荧光试验（IFT）和班点酶标记试验（Dot-EIA)鉴定为ShTat1.2，说明同一克隆锥虫感染兔，小鼠第1次发生抗原变异后产生的变异体相同。依据这一规律，设计了免疫预防保护试验，试验小鼠分3组：一组为未免疫对照组，一组为ShTat1.1VSG单一抗原免疫组，另一组为ShTat1.1 VSG,ShTat1.2 VSG混合免疫抗原免疫组，各组均以ShTat1.1锥虫攻击，结果ShTat1.1 VSG ShTat1.2VSG免疫组小鼠全部获得保护，单用ShTat1.1 VSG免疫组小鼠和未免疫小鼠血中全部出虫、死亡，前者比后者出虫时间、存活时间延长。提示运用伊氏锥虫抗原变异这一规律设计的这种复合抗原，能激发宿主克服虫体抗原变异对免疫保护的干扰。     

伊氏锥虫不同地理株对小鼠致病性的比较试验

伊氏锥虫是地理分布广泛的锥虫，可以引起骆驼、马、黄水牛、犬和大小鼠等动物的伊氏锥虫病，宿主中以马、犬和大小鼠等为高度易感动物，感染后往往发病急，死亡快，由于其因地理和宿主条件的不同而表现出感染力和毒力的差异[1]，我们进行了不同地理株对小鼠的感染力及其毒力的比较观察。材料和方法材料1、伊氏锥虫：伊氏锥虫云南株于1987年在宜良分离自云南水牛体内，广东株于1981年在阳江分离自广东水牛体内，安徽株分离自安徽水牛体内，江苏株分离自江苏高邮水牛体内，新疆株分离自新疆骆驼体内，以上伊氏锥虫都经小鼠繁殖后保存于液氮中…     

克隆伊氏锥虫不同VAT的某些生物学特性研究

对伊氏锥虫安徽株单虫克隆ＳｈＴａｔｌ感染兔体后３、６、９和１８ｄ所分离的４个抗原变异体ＳｈＴａｔｌ．１、ＳｈＴａｔｌ．２、ＳｈＴａｔｌ．３和ＳｈＴａｔｌ．５的生长特征、对人血清敏感性和对小白鼠致病力三个方面进行了比较研究。结果表明不同抗原变异体的生物学特性不完全一致,它提示伊氏锥虫的抗原变异可能伴有虫体其它生理生化特性的改变。     

伊氏锥虫同工梅,蛋白质和抗原组分的比较研究

本文采用生化技术对八个中国伊氏锥虫株及一个布氏锥虫株的同工酶、蛋白质的抗原组分进行比较研究。根据同工酶电泳结果，可将伊氏锥虫和与其形成形态上不能区分的布氏锥虫区别开来，亦可将伊锥虫分为两个酶株群（Ｚ１、Ｚ２）。根据ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳，等电聚焦电泳和免疫印迹试验的结果，可将酶株群Ｚ１分成五个同多肽群（株）。本研究结果表明：中国伊氏锥虫遗传传 变异程度较低，是一个相对稳定的种群。     

伊氏锥虫同工酶、蛋白质和抗原组分的比较研究

本文采用生化技术对八个中国伊氏锥虫株及一个布氏锥虫株的同工酶、蛋白质和抗原组分进行比较研究。根据同工酶电泳结果,可将伊氏锥虫和与其形态上不能区分的布氏锥虫区别开来,亦可将伊氏锥虫分为两个酶株群(Z1、Z2)。根据SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、等电聚焦电泳和免疫印迹试验的结果,可将酶株群Z1分成五个不同多肽群(株)。本研究结果表明,中国伊氏锥虫遗传变异程度较低,是一个相对稳定的种群。     

锥虫不同分离株克隆及其等电聚焦分析

将两个伊氏锥虫及一个马媾疫锥虫的不同分离株分别接种用球磷酰胺处理的小鼠，获得五个克隆，用等电聚焦比较其蛋白质差异。结果表明，三个分离株之间有明显区别；马媾疫锥虫显著不同于伊氏锥虫；分离株不同克隆间区别较小，其中广东水牛株两克隆间带型相同，安徽水牛两克隆间带型略有区别。证明伊氏锥虫克隆间变异较小，锥虫不同分离株间变异较大，马媾疫锥虫与伊氏锥虫之间变异最大。     

伊氏锥虫新疆株在动物体内抗原变异程序的观察

为了探明伊氏锥虫在动物体内抗原变异,以伊氏锥虫新疆株克隆感染兔,每３天采兔血１次,共采血５次,并用环磷酰胺处理的小白鼠对各分离期锥虫予以克隆,获得５个锥虫克隆群体,经ＡＢＣ－酶标试验和间接免疫荧光试验,对各克隆锥虫抗原进行鉴定,结果：获得５个表面抗原性互不相同的克隆群体,说明伊氏锥虫新疆株第１次抗原变异发生在４－６日内,以后每３天变异１次,本研究为进一步探明伊氏锥虫抗原变异规律打下了基础。     

伊氏锥虫抗原变异规律

国内外已有众多文章报道了伊氏锥虫表面抗原变异现象的特点，但均较零散，本文将这些报道进行分析综合，从中找出共同点，归纳出伊氏锥虫抗原变异的一些规律，计有伊氏锥虫抗原变异的频率、抗原变异的程序、变异体的数量、优势变异体和非优势变异体，伊氏锥虫感染动物后第一次发生抗原变异的时间和特点等，作者并对尚需继续探索的有关规律性的研究内容也提出了看法。     

伊氏锥虫不同虫株免疫保护试验

伊氏锥虫在我国流行面广，因而地理株众多。在进行免疫诊断时，已发现用某株锥虫制成的抗原对其他株锥虫病的诊断出现敏感性和特异性不均一的现象［’1。王祥生等用异种锥虫进行了交叉兔疫试验’‘’。有关不同株锥虫之间交叉免疫保护试验，还未见有人研究，本试验对此作了初步探讨。材料与方法】．虫株新疆骆驼株（XJCA）和安徽水牛株（AHB）均为本实验室液氮保存。2．试验动物昆明系小白鼠30只，体重20g左右，雄性。购自上海医科大学实验动物中，乙。3．抗原制备保存于液氮中锥虫取出复苏后经小白鼠继代，大白鼠扩增后，按an－ham等（1…     

伊氏锥虫感染力及其毒力的比较试验

伊氏锥虫是家畜主要的致病锥虫。不但感染众多的宿主,而且地理分布也十分广泛.其感染力及毒力因地理和宿主条件的不同而表现出差异.宿主中以马、大和大小鼠等为高度易感动物,感染后往往发病急、死亡快,而牛、兔和豚鼠等动物则较差,其感染呈慢性经过.我们通过小鼠及豚鼠人工感染试验对伊氏锥虫云南株和广东株的感染力及其毒力进行了比较观察。     

应用单克隆抗体检查伊氏锥虫抗原变异

用广西骡株伊氏锥虫可溶性抗原免疫的BALB/C小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP_2/O)融合,获得了在ELISA中能与广西骡株伊氏锥虫可溶性变异表面糖蛋白反应的2个分泌IgG_1的单克隆抗体(McAb)。用McAb于ELISA抑制试验对四份不同期的广西骡株伊氏锥虫阳性血清的抗体成分进行了分析,结果四份锥虫阳性血清对于McAb与相应抗原决定簇的结合均未出现明显的抑制作用。表明血清样本间很少或完全没有与McAb相类似的抗体。这证明伊氏锥虫存在多个血清型亦即变异抗原型。     

同一克隆两个不同变异体的伊氏锥虫在兔体内抗原变异研究

为了解伊氏锥虫在兔体内感染后期抗原变异的情况及较同一克隆不同变异体锥虫在兔体内抗原变异情况,用伊氏锥虫安徽株单虫克隆ＳｈＴａｔ１．２感染兔,在兔体３０天中每隔３天及感染后５１、５４、５７天（兔５８天死亡）分离兔血中锥虫并克隆,获得１３个克隆锥虫群体,经间接免疫荧光试验和ＡＢＣ酶标记试验鉴定为１０个抗原性互不相同的抗原变异体（Ｖａｒｉａｂｌｅ Ａｎｔｉｇｅｎ Ｔｙｐｅ,ＶＡＴ）,其中早期（感染锥虫３     

伊氏锥虫多种克隆群体的采集及血清学检测

针对伊氏锥虫抗原变异，国内外学者对抗原变异规律进行了研究，对其抗原变异程序、变异数量、变异频率等有了一定的了解，在此基础上进行免疫学研究进而寻求防治锥虫病的免疫学手段。但多局限于某种动物个体感染锥虫后的一小段有限的时间进行，所获得的抗原变异型数量较少，因而很难澄清如：一个虫株究竟能有多少变异机会，是以怎样的程序变异的等问题。     

伊氏锥虫抗原变异型及其优势代表变异体的分离鉴定

以连续克隆分离的方法,从1株水牛伊氏锥虫中分离到40个克隆群体,从中分离鉴定出18个抗原变异型。经间接免疫荧光试验检测,发现其中2个抗原变异型（即HbTatl.18和HbTatl．15）分别能与约80％和60％克隆群体的血清发生较强的阳性反应,初步确定这2个抗原变异型为该虫株的优势代表变异体。这为伊氏锥虫免疫预防、免疫诊断、分子诊断以及遗传进化等的研究奠定了良好的基础。     

克隆伊氏锥虫2个VSG的分离纯化和电泳分析

用蛋白酶抑制剂ＴＬＣＫ对伊氏锥虫安徽株单虫克隆的２个抗原变异体ＳｈＴａｔ１．３和ＳｈＴａｔ１．５的变异表面糖蛋白（ＶＳＧ）进行了分离纯化，采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和等电聚焦电泳对ＶＳＧ的分子量和等电点进行比较研究。结果，ＶＳＧ的分子量约为４００００，等电点约为ｐＨ５．０，但２个抗原变异体的ＶＳＧ在分子量和等电点都有差异，提示其抗原变异由ＶＳＧ变化引起。     

基于18S rRNA基因测序基础上的锥虫分子分类学

利用18S rRNA基因序列分析方法,对我国湖北、广西、新疆和浙江4省的伊氏锥虫及1株布氏锥虫进行分子分类学研究.用分离的锥虫感染实验动物,自感染小鼠的红细胞或全血中提取基因组DNA,根据GenBank中已发表的雏虫18S rRNA序列设计1对锥虫通用引物,通过PCR扩增目的基因片段,将扩增产物连接到pGEM-T载体中,经酶切、PCR确定,进行序列测定.结果显示,7个锥虫分离株的18S rRNA基因大小为2 188 bp.利用DNAS-tar对试验所获得的这7株锥虫和GenBank中部分锥虫的18S rRNA基因进行比较分析,建立2个进化系统发生树.核苷酸同源性比较及系统发生树显示:自我国上述4省分离的伊氏锥虫来源于同一株系,布氏锥虫和广西分离的伊氏锥虫株的18S rRNA核苷酸与其他锥虫分离株仅有较小差异,与国外的6株锥虫的同源性为99%～100%,与另外7株的同源性为62%.     

应用质粒PTK探针鉴定锥虫的初步研究

用^32P标记质粒探针PTK1、PTK1.1和PTK1．2，对12株中国伊氏锥虫的斑点杂交试验显示，3个探针均能与8株具有正常动基体的伊氏锥虫杂交，而不与其余4株异常动基体伊氏锥虫杂交，对正常动基体株的敏感度为10^2虫体。探针PTK1亦能与马媾疫锥虫杂交，敏感度为10^2个虫体。但PTK1与布氏锥虫仅发生微弱的杂交反应．敏感度为10^5个虫体。试验表明伊氏锥虫株之间的kDNA微环是同源的，伊氏锥虫与马媾疫锥虫和布氏锥虫的kDNA微环存在着共同序列。     

同工酶分析在锥虫研究中的应用

<正> 锥虫为人类和牲畜的重要寄生原虫。广泛分布于南美、非州、中东以及亚州地区。由于锥虫的广布性和多宿主性,致使其大量繁衍,不断发生虫株变异而形成具有遗传特性的种内变异虫株。即使同种锥虫也因其地理及宿主条件的不同而表现出其感染力、致     

抗伊氏锥虫变异表面糖蛋白单克隆抗体的初步研究

应用淋巴细胞杂交瘤技术制备了2个抗伊氏锥虫变异表面糖蛋白的McAb。特异性实验结果表明,2个McAb只与伊氏锥虫同一变异型表面抗原发生特异反应,而不与同种异株或同株不同变异型伊氏锥虫发生交叉反应,亦不与路氏锥虫等不同种抗原反应。运用正辛酸与硫酸铵二步沉淀法纯化了腹水MeAb,纯化后的McAb活性没有明显降低。应用2个McAb,以ELISA抑制试验检测了4份伊氏锥虫血清,结果均未出现明显的抑制作用,表明血清样本间很少或完全没有与McAb相类似的抗体,进而说明伊氏锥虫存在多个血清型亦即变异抗原型。