凹凸棒土—壳聚糖耦合固定化乳糖酶及其在低乳糖乳制备中的应用

采用凹凸棒土吸附与壳聚糖溶液包埋耦合的方法进行乳糖酶的固定化.结果表明,当凹凸棒土∶壳聚糖为5∶1、吸附时间为4 h、加酶量为260 U.g-1时,固定化酶活力达107.6 U.g-1、酶回收率为50.6%;所制得固定化乳糖酶的适宜温度和pH值分别为40~45℃及6.4~6.8;用固定化乳糖酶水解牛奶中的乳糖,在温度为45℃时间为1.5 h时乳糖水解率即达69.5%,38℃、3 h水解率为71.3%.     

乳糖转化试验及低乳糖奶初步研究

研究了不同作用条件下，乳糖酶对原料奶中乳糖的转化率，并对低乳糖奶的相关技术进行了初步研究。结果表明：37℃下，加酶量0.1%，水解4h，乳糖转化率达到了75．28％；而6℃下加酶量0．2％，水解20h左右，乳糖转化率达到了68．54％。     

乳杆菌乳糖酶的基因异源表达及酶学性质分析

采用简并引物PCR和TAIL-PCR方法,从乳杆菌Lactobacillus sp. B164中克隆得到一个乳糖酶基因bg42-164。基因全长2 031 bp,编码676个氨基酸和一个终止密码子,预测分子量76 kDa,无信号肽序列。将bg42-164连接pET-30a(+)载体并转入大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达后可检测到乳糖酶活力。SDS-PAGE分析乳糖酶BG42-164的蛋白分子量为76 kDa,使用组氨酸标签亲和层析方法进行蛋白纯化,并对纯化的乳糖酶BG42-164进行了酶学性质分析。该酶最适反应温度为50℃,经50℃处理30 min后,剩余酶活力保留80%以上,pH 6.0时该酶的水解活力最高。牛奶水解试验表明,乳糖酶BG42-164对乳糖的水解效果良好,5 mL牛奶中添加250 U酶蛋白,在50℃条件下2 h乳糖水解率为100%。该酶温度范围宽,乳糖水解效果好,为其在低乳糖奶生产中应用奠定了理论基础。     

低乳糖发酵乳的制备

目的:制备一款低乳糖发酵乳。方法:以12%全脂乳粉与6%蔗糖为基础,利用乳糖酶直接酶解,通过单因素实验及正交实验对乳糖酶的添加量、酶解温度及酶解时间进行优化,并对制备的发酵乳的发酵特性及质构进行分析。结果:酶添加量0.8μL/g,酶解温度46℃,水解时长4.5h,乳糖的水解率为99.54%。在此条件下制备低乳糖发酵乳,低乳糖发酵乳发酵过程中酸度变化快,酸度值为78.20°T,表观黏度在9.82～15.82Pa·s,触变性最大值为8.96Pa·s。     

右旋糖酐水解条件研究

高分子右旋糖酐水解制取右旋糖酐40,从右旋糖酐的粗酐干品、发酵液和粗酐溶液出发进行水解条件研究。结果表明,右旋糖酐粗酐干品的水解条件为,粗酐6%,盐酸0. 10%,温度95～100℃,时间2. 5 h;右旋糖酐发酵液的水解条件为,粗酐6%～8%,盐酸0. 16%,温度95～100℃,时间3. 0 h;右旋糖酐粗酐溶液的水解条件为,粗酐6%～8%,盐酸0. 09%,温度95～100℃,时间2. 5 h。三种粗酐中右旋糖酐的品质不同而产生三种不同的水解条件。     

牛乳超滤透过液中乳糖酶法水解的研究

研究了黑曲霉乳糖酶在牛乳超滤透过液中的应用，探讨了温度、乳糖浓度、酶使用量、时间及ｐＨ对透过液中乳糖水解的影响，通过试验确定了透过液中乳糖酶法水解的优化工艺条件（６０℃、乳糖浓度１２％、酶使用量４．０ｇ／１００ｇ乳糖、时间１６５ｍｉｎ），在此条件下，经１２０ｍｉｎ和１６５ｍｉｎ水解，水解度分别达到８２．４％和９２．１％．     

抗噬菌体菌株A46利用淀粉糖发酵2-KG的研究

抗噬菌体菌株A4 6可以利用淀粉水解糖代替结晶D -葡萄糖进行 2 -酮基 -D -葡萄糖酸( 2 -KG)的发酵。试验结果表明 ,用淀粉水解糖作碳源进行 2 -KG发酵的条件为 :接种量 8% ,发酵摇瓶装量 2 0ml,培养温度 31℃ ,发酵周期 72h ;发酵最佳配比为 :淀粉水解糖 16 .5% ,玉米浆 1.6 5% ,尿素 0 .0 0 3% ,KH2 PO4 0 .0 0 15%。     

乳糖酶突变体库的构建及高活性突变体的快速筛选

构建了亮白曲霉来源的β-半乳糖苷酶活性中心的第219位丝氨酸的毕赤酵母饱和突变体库以筛选水解活性提高的乳糖酶。另外,通过以毕赤酵母发酵基础盐诱导培养基代替传统的BMMY培养基来诱导表达β-半乳糖苷酶和其突变体。结果表明,诱导时间在48~60 h且粗酶液中总蛋白量在0.2~0.8 mg/mL时,各乳糖酶的活力均高于其在BMMY培养基中的活力;各乳糖酶的比活力在此阶段保持相对稳定,且与纯化后的酶比活力呈正相关,即各乳糖酶的比活力高低可以粗酶液中乳糖酶的比活力来相对定量。在此基础上,利用高通量的48孔培养板创建了一种简便、高通量从β-半乳糖苷酶突变体库中筛选高水解活力乳糖酶的方法,并应用该方法快速地从突变体库中筛选到3个水解活力显著提高的突变体S-38、S-35和S-1,比活力分别提高了10.3%,9.2%和6%,高通量的筛选方法是定向进化技术中的重要环节,为其顺利开展奠定了基础。     

酶法水解丝素蛋白最佳条件的研究

通过6种酶对家蚕丝素蛋白水解的试验表明,Alcalase 2.4 L水解效果最佳,Flavorzyme次之,并经正交试验确定Alcalase对丝素水解的最佳条件为:浓度8%的丝素溶液中加入1%的酶,在pH值85、5℃条件下反应6 h,水解度可达39.34%,回收率为76%。SDS-PAGE电泳实验证明,水解产物的分子量大致为6.2~7.8 kDa。在此基础上,添加1.5%的Flavorzyme继续水解,在pH值75、0℃条件下反应3 h,水解度为44.13%,回收率为59%。     

来源于嗜热古细菌Pyrococcus furiosus乳糖酶基因的原核表达及酶学性质分析

以嗜热古细菌Pyrococcus furiosus的基因组DNA为模板,通过PCR克隆获得乳糖酶基因celB。将celB基因插入到表达载体pET．30a（＋）上构建原核重组表达质粒pET-celB,转化大肠杆菌B121,阳性转化子在28％下经IPTG诱导4h后进行SDS．PAGE电泳和酶活性测定,结果表明celB基因在大肠杆菌中获得高效表达,乳“糖酶基因celB表达的乳糖酶蛋白CELB分子质量约为58kDa。CELB是耐高温酶,其酶促反应最适温度为105％,在95％至110％之间热稳定性较好;pH5．0时该乳糖酶水解活力最高,在pH5．0～10．0之间,pH稳定性较好,该酶对金属离子依赖性不强。     

猪肠道乳糖酶的研究进展

乳糖是仔猪的主要能量来源,乳糖酶对乳糖的消化吸收起着至关重要的作用。乳糖酶缺乏导致乳糖不耐受,产生肠胃胀气、腹痛甚至腹泻等症状,严重影响着仔猪的成长。本文围绕猪乳糖酶的来源、乳糖酶缺乏与腹泻以及乳糖酶缺乏的治疗展开综述,旨在对仔猪的饲养提供一定的参考价值。     

阳离子交换树脂D151固定化乳糖酶研究

以吸附率最高的阳离子交换树脂D151为载体,戊二醛为交联剂,用吸附交联法对黑曲霉乳糖酶进行固定化研究,优化固定化条件,以期改善乳糖酶性质,使黑曲霉乳糖酶适于低乳糖乳的生产。结果表明:固定化酶的最适温度为60℃,比游离酶低10℃;最适pH较游离酶稍向碱性方向移动;固定化酶比游离酶热稳定性降低;固定化酶与游离酶的酸碱稳定性有较大差异。在最适温度条件下,固定化酶较游离酶而言,在牛奶天然pH条件下使用更为适宜。在pH 6.5、50℃条件下,游离酶的半衰期仅为9 d;而固定化酶在此条件下反复使用20 d,仍具有59%的残余活力。该研究为工业化利用固定化酶生产低乳糖乳提供了技术依据。     

黑曲霉乳糖酶固定化前后酶学性质比较研究

[目的]为低乳糖乳制品的工业化生产提供技术支持。[方法]以阳离子交换树脂D151为载体,采用吸附交联法对黑曲霉乳糖酶进行固定化,进而研究了固定化乳糖酶的酶学特性。[结果]固定化乳糖酶和游离酶的最适温度分别为60和70℃。在低于50℃的条件下对固定化乳糖酶和游离酶进行保温处理,酶活力没有损失;在高于50℃的条件下对固定化乳糖酶和游离酶进行保温处理,其酶活力呈现下降趋势,且固定化乳糖酶的活力下降更为迅速。固定化乳糖酶和游离酶的最适pH值分别为4．5和4．0,其pH值稳定范围分别为2．5—4．5和5．0～7．0。pH=6．5时,固定化乳糖酶和游离酶的活力分别为其最适pH值下的87．5％和3．8％。固定化乳糖酶和游离酶的半衰期分剐为24和9d。[结论]在牛奶的天然pH值下,固定化乳糖酶比游离酶更适用。     

白腐菌TP21液体培养产漆酶条件的研究

研究了碳源、氮源、各种理化因素以及培养条件对白腐菌TP21漆酶分泌的影响.结果表明:木糖和多糖作碳源、酵母膏作氮源有利于漆酶的分泌,pH在4.0～6.0的范围内对漆酶的分泌影响不大,培养温度、接种量、通气量对漆酶的分泌有较大影响,培养基中添加诱导物对漆酶的产生有促进作用,特别是玉米秸秆价格低廉,是较好的选择.     

阳离子交换树脂固定化乳糖酶的研究

[目的]以阳离子交换树脂为载体,研究黑曲霉来源乳糖酶固定化条件,以期改善乳糖酶性质,使黑曲霉乳糖酶更适于低乳糖乳的连续生产。[方法]以吸附率最高的阳离子交换树脂D151为载体,通过先吸附后交联的方法固定乳糖酶,优化固定化条件。[结果]结果表明,加酶量为50．0U／g（载体）,吸附pH值为4．0,吸附温度是25℃,吸附时间24h,交联剂戊二醛浓度为4％,交联温度是30℃,交联时间是6h,固定化效果最好。获得的固定化酶活力可达11．8U／g（载体）,固定酶回收率为37．2％。[结论]该研究为工业化利用固定化乳糖酶连续生产低乳糖乳提供了技术依据。     

断奶仔猪的乳糖消化和吸收研究

通过随机区组设计,用高乳糖含量的乳清粉和不合乳糖的玉米豆粕饲料分别饲喂断奶仔猪发现：十二指肠段、空肠前段和空肠后段是乳糖消化和吸收的主要区域。乳糖能诱导断奶仔猪小肠产生乳糖酶。在血液循环系统中,随着离肠系膜距离越远,其血液中血糖浓度呈现从高到低的梯度变化。     

乳糖酶及其基因的研究进展

综述了动物和人的乳糖酶结构和功能以及乳糖酶基因的结构和表达特点，并探讨了乳糖酶基因多态性与乳糖不耐症的关系。