ELISA技术检测猪瘟抗原和兔化弱毒苗免疫效果的探讨

笔者在1986年4至6月间作了207头份的猪瘟抗体检测,测出不同水平的抗体194头份,同时检测了147头份的猪瘟抗原,检出阳性6份,它与酶标记抗体检测猪肾(直接法)作了符合率试验,其结果完全一致。一、材料与方法(一)材料 1.猪血清、尿液、肝、脾、心、肺、肾,取我市城关等八区一镇的207头份的,经过不同时期猪瘟兔化弱毒疫苗免疫的猪全血3—4毫升及肝脾心肾肺,全血经     

猪伪狂犬病血清抗体两种检测方法的比较

应用酶联免疫吸附试验和免疫金标检测试纸两种方法，同时对64头份猪血清样品进行猪伪狂犬病血清抗体检测，试验结果显示：两种方法检测的64头份猪血清中伪狂犬病抗体阳性率均为62．5％(40／64)，符合率达到100％。两种方法都具有微量、特异、准确的优点。前者需要用酶标仪等仪器，试验时间相对较长，成本高，但能用准确的数字表达抗体水平；后者不需要任何仪器设备，试验时间短，成本低，适用于基层兽医站、养殖场使用，以及大面积开展猪伪狂犬病抗体检测的使用。     

应用ELISA间接法检测猪流行性腹泻抗体的研究

应用猪流行性腹泻病毒(PEDV)吉(J)毒株猪胎肠单层细胞培养物,以冻融法制备抗原,建立了酶联免疫吸附试验(ELISA)间接法检测PED抗体的方法。对30头份经直接免疫荧光技术证实的PED病猪群血清测定,97％为阳性;检测32头份无PED猪场猪血清,93％为阴性。对1份PED“华毒株”,1份“川毒株”以及3头份“吉毒株”PED免疫血清测定,均为阳性。对猪传染性胃肠炎血清、猪轮状病毒病血清、疑似猪血球凝集性脑脊髓炎血清、鸡传染性支气管炎血清及猪梭菌性肠炎血清共16头份检测均为阴性,证明PEDV不与TGEV等其它3种冠状病毒血清发生交叉反应。89头份疫区猪血清的区域性试验阳性率为75％(67/89);对82头份屠宰猪血清测定,53％阳性。抗原包被板保存期试验表明,包被板在-20℃可保存2个月。     

猪瘟免疫程序筛选优化研究

猪瘟是目前危害养猪业的主要疾病之一,其主要控制方法是免疫。为了制定科学合理的猪瘟免疫程序,特进行本试验。试验主要采用猪瘟兔化弱毒疫苗于不同日龄、不同剂量对母猪、生长育肥猪进行注射免疫,然后定期采集试验猪血清检测猪瘟抗体水平。结果显示,母猪于产后30d4头份剂量免疫,其抗体水平保持最好,至分娩前2周抗体仍保持在7d以上,其所生仔猪母源抗体log2值4以上持续到40日龄以后;生长育肥猪30日龄4头份剂量首免,60日龄6头份剂量二免。应坚持猪瘟抗体水平监测,依据本场具体情况随时调整猪瘟免疫程序,从而达到控制猪瘟的目的。     

检测猪伪狂犬病血清抗体的斑点酶联免疫吸附试验方法的建立和评价

以斑点酶联免疫吸附试验(简称 Dot-ELISA)检测128份接种伪狂犬病病毒(PRV)前后的实验猪血清及49头份现地猪血清,并与微量病毒中和试验(MIVN)作比较.结果,Dot-ELISA 能检出抗 PRV 特异抗体,与MIVN 的检出符合率为95.9%,两种方法无显著性差异(P>0.05).Dot-ELISA 检出人工感染猪血清抗体的时间(接毒后第5天)早于 MIVN(接毒后第9天).Dot-ELISA 检测猪血清 PRV 抗体,具有特异性强、敏感性高、快速简便等优点,适合于大批检疫和流行病学调查.     

DOT—ELISA检测猪瘟免疫抗体的研究

本文成功地建立了Dot—ELISA(斑点酶联免疫吸附试验)检测猪瘟免疫抗体,经猪丹毒、猪巴氏杆菌高免血清对照及猪瘟强毒攻毒试验证实;Dot—ELISA检测猪瘟免疫抗体是特异的。Dot—ELISA、ELISA和兔体中和三种方法比较,Dot—ELISA法具有简便、快速、敏感性高,特异性强。用Dot—ELISA法检测115头免疫猪血清抗体,免疫抗体在效价1:2—1:128之间,1:32—1:64以上滴度占95％。猪瘟攻毒试验结果:免疫猪的猪瘟免疫抗体保持在1:32以上,均能抗过猪瘟强毒的攻击。     

斑点免疫金渗滤法检测猪瘟抗体的研究

以猪瘟抗原包被硝酸纤维素膜，然后用胶体金标记SPA，建立检测猪瘟抗体水平的斑点免疫金渗滤法检测试纸盒。通过胶体金标记金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)直接显色，阳性者出现红色斑点，结果易于判断。整个试验过程仅需5min，操作简单，与猪兰耳病、猪伪狂犬病、猪细小病毒、新城疫和禽流感等阳性血清不发生交叉反应。同时将该法与目前猪瘟的常规检测方法Dot—ELISA法和间接血凝试验同时对200份猪血清进行猪瘟抗体检测比较，符合率达98．4％和98．9％。说明该法微量、特异、敏感可靠，检测时间短，效果直观，非常适用于猪瘟的早期诊断和普查以及疫苗免疫效果后抗体水平的检测。     

三种猪瘟抗体检测方法比较

猪瘟是养猪场猪的常见病，要解决这一问题，必须坚持对猪场进行经常性的猪瘟免疫监测。目前，我国对猪瘟抗体的测定方法有：中国农科院兰州兽医研究所生产的“液体猪瘟正向间接血凝抗原试剂盒”、中国农科院哈尔滨兽医研究所生产的“猪瘟DOT－ELISA试剂盒”和最近由厦门进出境检验检疫局与厦门大学抗癌研究中心合作研制的猪瘟抗体免疫金标试纸条三种方法。最近，我们分别应用上述方法对采自长泰、龙海地区猪场的１２０头份猪血清进行检测，现报告如下：１材料与方法１．１被检猪血清采自福建省龙海苗圃猪场、长泰联盛猪场、龙海白水猪场…     

用于检测猪瘟抗体的免疫金标试纸条的研制与应用研究

以猪瘟抗原包被硝酸纤维素膜的检测区，在其下端附着胶体金标记的猪瘟抗原，组成免疫金标试纸条，根据胶体金免疫层析原理，用该试纸条建立检测猪瘟抗体水平的免疫金标检测法。再用本试纸条检测法与Dot-ELISA及间接血凝法对298份猪、鸡、鸭、鹌鹑、兔、鼠、羊血清进行猪瘟抗体检测，结果符合率达100%。试验结果表明，本法与Dot-ELISA及间接血凝法一样特异、敏感和微量，而且检测时间短、直观，结果容易判定，适用于大面积猪瘟抗体监测普查。     

应用斑点-ELISA检测猪伪狂犬病

应用混合纤维素酯微孔滤膜作固相支持物进行斑点-ELISA(Dot-ELISA),对1337头份猪血清作了猪伪狂犬病血清抗体的检测。应用猪伪狂犬病高免血清和自然感染阳性血清作阻断试验,证明了本实验的特异性。猪瘟高免血清、猪细小病毒阳性血清、猪轮状病毒阳性血清、猪流行性腹泻阳性血清及未注过苗的健康猪血清均为阴性。与常规的病毒血清中和试验(NT)进行比较,Dot-ELISA阳性检出率为28.19％(53/188),NT阳性检出率为20.74％(39/188),前者的敏感性显著地高于后者。本法的优点是操作简便、省时、快速,不需特殊仪器设备,可用肉眼判定,诊断膜与试验标本膜可长期保存,适于基层单位的诊断和流行病学调查。     

Dot—ELISA检测猪血清中伪狂犬病病毒抗体方法的建立和评价

建立了检测猪血清中伪狂犬病病毒(PRV)特异抗体的斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA),并通过对人工感染和自然感染猪血清以及野外试验猪血清的检测与微量血清中和试验(MSN)作了比较。结果表明, Dot-ELISA具有特异性和敏感性,能检测出猪血清中PRV特异性抗体,与MSN检出符合率在95％以上。经统计分析,差异不显著(P>0.05)。Dot-ELISA可检出早期感染猪血清中PRV抗体,可应用于猪伪狂犬病的临床实验诊断。     

ELISA法检测猪瘟抗体消长规律的试验研究

本试验采用间接ELISA方法,检测猪瘟(CSF)常规免疫仔猪的CSF抗体水平。试验分A、B两组,A组首免注射4头份猪瘟兔化弱毒疫苗,B组首免注射2头份猪瘟兔化弱毒疫苗;二免两组均注射2头份猪瘟兔化弱毒疫苗。试验结果表明,注射疫苗后10d,开始产生抗体,20d-30d抗体达到峰值,二免后抗体峰值维持40d以上。首免4头份的仔猪比首免2头份的仔猪CSF抗体峰值出现的早,维持时间长。     

猪流行性腹泻抗体PPA—ELISA检测方法的建立及其应用

应用纯化猪流行性腹泻病毒抗原(PEDV)和酶标葡萄球菌A蛋白(PPA)建立的A-ELISA,通过对免疫猪血清PEDV抗体的动态测定及临床自然感染猪血清抗体水平的检测表明,该法敏感、特异、简便、快速,尤适于基层猪场大批血清样品抗体水平的普查与检测.     

三种猪瘟抗体检测技术的应用比较

应用猪瘟正向间接血凝法 (IHA)、斑点酶联免疫吸附试验 (Dot ELISA)以及猪瘟抗体免疫金标试纸条对规模化养猪场 1 38份不同阶段猪血清进行猪瘟免疫抗体水平的同步监测 ,检测结果 :IHA ,Dot ELISA ,金标试纸条测出经产母猪的猪瘟抗体阳性率分别为 83 3 %、80 0 %、80 0 % ,其平均值为 81 1 % ;三种方法测出后备母猪的猪瘟抗体阳性率分别为 53 3 %、53 3 %、50 0 % ,其平均值为 52 2 % ;三种方法测出 2 0日龄仔猪的猪瘟抗体阳性率分别为 69 2 %、76 9%、76 9% ,其平均值为 74 3 % ;测出 40日龄猪的猪瘟抗体阳性率分别为 76 9%、80 8%、80 8% ,其平均值为 79 5 % ;测出育肥猪的猪瘟抗体阳性率分别为 30 8%、30 8%、34 6 % ,其平均值为 32 1 %。经过统计学x2 检验 ,对于不同阶段猪三种方法两两之间检测结果均差异不显著 (P >0 0 5) ,表明上述三种方法均可用于猪瘟抗体的检测。     

猪常见传染病的免疫接种方案

为了研究不同日龄不同饲养环境的猪,应用口蹄疫,猪瘟,猪蓝耳病三种疫苗做三苗两针试验,对免疫注射后三种疫苗的抗体效价进行检测对比,县动物疫病预防控制中心于2012~2013年在部分散养户中做了免疫方法试验。选不同日龄的猪进行三苗两针试验,并在注射后21日对其采血清做抗体检测,检测结果显示,本方法与常规免疫注射的结果相似,然后,我们又选择小型规模猪场试验,同样对其做抗体检测,结果与散养户做的基本一致。2014年此方法在我县全面以推广,兴仁县动物疫病预控中心同时分别在五个规模养殖场采用常规方式各注射200不同日龄的猪做对照组,场内其他猪采用三苗两针方式注射,注射结束后21 d,每个试验猪场随机采不同日龄试验猪100头份,和对照组100头份,即三苗两针方式注射的猪血清进行抗体检测结果比较分析。结果显示,常规方式注射的抗体阳性率为:猪口蹄疫87%,猪瘟92%,猪蓝耳病83%;三苗两针注射的抗体阳性率为:猪口蹄疫85%,猪瘟88%,猪蓝耳病86%,两种方法的抗体阳性率基本一致,不同环境和不同日龄也无明显差异。     

初乳前接种猪瘟兔化弱毒疫苗猪的免疫效力

为排除母源抗体对仔猪猪瘟主动免疫的干扰,我省某些畜牧场对新生仔猪在哺乳前接种猪瘟兔化弱毒疫苗(猪瘟疫苗)。本文报道由免疫猪群抽样进行的中和抗体检测及保护力测定的结果。材料和方法一、试验猪:自两个市、县的各一处猪场选择产前45天作猪瘟疫苗免疫接种的母猪所产的初生仔猪,并立即与母猪隔开。一部分每只肌肉注射猪瘟疫苗1头份,注苗后2小时开始哺乳;另一部分不接种,留作对     

非典型猪瘟和隐性猪瘟的诊断和防制

疑某猪场发生非典型猪瘟，采取病死猪的脾、淋巴结，用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法检测猪瘟抗原，结果阳性，诊断为猪瘟。同时用ＳＰＡ－ＥＬＩＳＡ法对猪群开展猪瘟抗体的检测，先后采集７５头份仔猪血样（２０～２８日龄），８５０头份生产母猪血样。检测结果表明，猪瘟抗体水平低于保护值（ＯＤ＜０．３）的仔猪１１头，占抽检仔猪的１４．６％，母猪１０头，占生产母猪的１．１７％。为此对以上低抗体的猪用猪瘟兔化苗再次进行加强免疫接种，经１５天后检测其血清抗体的ＯＤ值，结果仍然没有升高。通过本试验证实，猪瘟低抗体的猪，对免疫的应答能力很差，低抗体的母猪还可能成为猪瘟的隐性感染者，并能垂直传播到下一代，是非典型猪瘟的传染源。淘汰低抗体的母猪，是控制和消灭非典型猪瘟的有效措施。     

非典型猪瘟和隐性猪瘟的诊断和防制

疑某猪场发生非典型猪瘟，采取病死猪的脾、淋巴结，用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法检测猪瘟抗原，结果阳性，诊断为猪瘟。同时用ＳＰＡ－ＥＬＩＳＡ法对猪群开展猪瘟抗体的检测，先后采集７５头份仔猪血样（２０￣２８日龄），８５０头份生产母猪血样，检测结果表明，猪瘟抗体水平低于保护值（ＯＤ〈０．３）的仔猪１１头，占抽检仔猪的１４．６％，母猪１０头，占生产母猪的１．１７％。为此对以上低抗体的猪用猪瘟兔化苗再次进行加强免疫     

后海穴注射猪瘟兔化弱毒苗的试验研究

利用不同剂量的猪瘟兔化弱毒苗后海穴免疫生长肥育猪600头．用正向间接血凝试验(IHA)检测出抗猪瘟病毒抗体的水平．并与传统方法耳根部注射免疫进行比较。结果显示．后海穴注射2头份猪瘟兔化弱毒苗产生的抗体水平最高，维持时间最长。1头份疫苗后海穴注射效果也比2头份的肌肉注射效果明显。表明后海穴注射疫苗能提前坚强免疫产生的时间．提高疫苗的免疫效应．是提高疫苗保护率的有效免疫途径之一。     

湖北省部分猪场弓形虫感染的血清学调查

应用酶联免疫吸附试验(ELISA)对湖北省部分猪场的弓形虫病进行血清学调查,共检测猪血清293头份.结果表明,阳性血清103头份,平均阳性率为35.2%,其中,母猪的感染率最高(53.8%),育肥猪次之(42.6%),仔猪最低(12.8%).