减毒沙门氏菌为载体的口服生长抑素DNA疫苗对草鱼的安全性

幼草鱼灌服10^8、10^9、10^10cfu／mL减毒沙门氏菌为载体的口服生长抑素DNA疫苗ZJ111／pcDNA3-SS，另设野生型鼠伤寒沙门氏菌（10^9cfu／mL）和PBS对照组，试验期20d，观察并比较各组死亡率。另取150g左右的草鱼灌服PBS、10^8cfu／mL ZJ111／pcDNA3-SS和10^8cfu／mL野生型鼠伤寒沙门氏菌组，7d后屠宰取肝和脾脏，做透射电镜切片观察。结果显示，灌服10^9cfu／mL ZJ111／pcDNA3-SS的幼鱼在试验期间死亡2尾，灌服10^8cfu／mL ZJ111／pcDNA3-SS和PBS的幼鱼采食和生长正常，灌服野生型S．typhimurium和10^10cfu／mL ZJ111／pcDNA3-SS的幼鱼死亡率分别为76．67％、26．67％。灌服10^8cfu／mL ZJ111／pcDNA3-SS的草鱼肝、脾细胞形态正常，肝脏线粒体略微肿胀，内质网间距略有增大，但病变特征不明显；10^8cfu／mL的zJ111／pcDNA3-SS对草鱼具有相对安全性。     

以减毒沙门氏菌为载体的GM-CSF与生长抑素DNA疫苗的安全性和稳定性

将含GM-CSF基因与生长抑素(SS)的融合真核表达质粒pGM-CSF/SS转入减毒沙门氏菌株CS022。选择40只22~24 g的雌性小鼠,随机分成4组,其中1组为对照组,口服生理盐水;2~4组为试验组,分别用上述重组减毒沙门氏菌株CS022以108、109、1010CFU的剂量口服免疫小鼠,2周后以相同的剂量加强免疫,研究pGM-CSF/SS真核表达质粒在体内的稳定性和减毒沙门氏菌对小鼠的安全性。同时通过体外传代,研究该真核表达质粒在体外的稳定性。结果表明:108、109CFU剂量口服小鼠,成活率达100%,而1010CFU剂量口服小鼠成活率降低至90%,腹泻率达50%。体外传10代和口服免疫4周后从小鼠肝脏和脾脏分离的减毒菌用琼脂糖凝胶电泳和酶切鉴定法证实,减毒菌中的重组质粒在体外和侵入小鼠体内过程中具有较好的稳定性。质粒DNA在传10代以后,虽然每代的质粒DNA含量有些变化,但总体趋势基本是恒定的,第10代时,质粒DNA的含量与第1代的含量差异不显著。上述结果提示,利用该减毒沙门菌作为载体传递pGM-CSF/SS DNA疫苗免疫小鼠具有相对安全性和稳定性,为进一步有效激发机体的免疫应答提供了前提。     

减毒沙门氏菌运送的口服DNA疫苗研究进展

DNA疫茁被誉为疫苗技术领域一场新的革命,但如何优化质粒DNA的免疫途径和运送方法以激发有效的免疫应答成为研究的热点.采用减毒胞内菌通过黏膜自然感染途径运送DNA疫苗成为近年来研究的热点[1].沙门氏菌是一类重要的人兽共患病原菌,目前利用它作为载体原核表达各种外源抗原已得到广泛的研究并取得良好的免疫效果;而利用沙门氏菌作为DNA疫苗运送载体的研究方兴未艾,已显示出诱人的前景.本文就减毒沙门氏菌作为外源DNA运送系统的入侵途径、诱导产生免疫应答的机制以及免疫预防传染病等方面的应用作简要综述.     

沙门氏菌的基因工程减毒以及在DNA疫苗载体中的应用

沙门氏菌是最常见的人畜共患的重要病原菌,引起人和动物肠热症、胃肠炎、败血症等,呈全球性分布.通过基因工程技术对沙门氏菌进行减毒,感染宿主细胞后可在体内长期存活并诱导产生保护性免疫反应.同时,沙门氏菌是一种侵袭性胞内菌,减毒沙门氏菌运载编码有外源基因的真核表达质粒可在体细胞内进行持续表达,诱导产生特异性的体液和细胞免疫应答.因此,减毒沙门氏菌既可作为针对同源抗原的活疫苗,也可作为诱导针对其他病原微生物产生保护性反应DNA疫苗的载体[1].本文综述了沙门氏菌的基因工程减毒以及在DNA疫苗载体中应用方面的最新进展.     

减毒沙门氏菌载体在兽用疫苗研发中的应用

减毒沙门氏菌可以作为DNA疫苗载体表达外源抗原基因,已受到医学界的广泛重视。本文对沙门氏菌的减毒、载体疫苗的优越性及作为口服活载体疫苗在动物病毒、细菌和寄生虫疫苗的最新应用成果进行了综述。     

减毒鼠伤寒沙门氏菌载体在兽医疫苗中的运用

重组疫苗的研究中,减毒鼠伤寒沙门氏菌可以作为真核表达载体。其原理是将免疫原基因片段连接到某种真核质粒中,然后将质粒导入减毒鼠伤寒沙门氏菌,构建针对该特异病原的重组活疫苗。本文介绍了减毒鼠伤寒沙门氏菌作为DNA载体,在动物细菌、病毒和支原体重组活疫苗中的运用。     

减毒沙门氏菌为载体传递DNA疫苗诱导对新城疫病毒的免疫保护

探讨了以减毒鼠伤寒沙门氏茵为栽体传递新城疫病毒DNA疫苗的安全性、免疫原性和可行性。将含新城疫病毒(NDV)F48E9株融合蛋白(F)基因的真核表达质粒pcDNA3-F的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌ZJ111株(ZJ111／pcD-NA3一F菌株)，以10^8CFU进行首免，2周后二免，三免后4周攻击强毒株F48E9，观察其安全性和免疫原性，同时设只含空载体pcDNA3的ZJ111／pcDNA3菌株对照及口服PBS对照。结果表明：重组ZJ111／pcDNA3-F菌株具有良好的安全性。对强毒株攻击的保护率达64．7％。重组ZJ111／pcDNA3-F菌株不仅能诱导雏鸡产生NDVELISA抗体，而且诱导产生的法氏囊B淋巴细胞和胸腺T淋巴细胞增殖反应显著高于ZJ111／pcDNA3时照组。这些结果提示，减毒沙门氏菌为载体不仅可直接将NDVF基因呈递给鸡体细胞进行表达，产生抗NDV的体液免疫，而且还可诱导细胞免疫应答。     

携带新城疫病毒F基因DNA疫苗的减毒鼠伤寒沙门氏菌的构建及其免疫原性

根据GenBank中发表的新城疫病毒(NDV)融合蛋白(F)基因序列,设计1对引物,通过RT-PCR扩增出鹅源NDV分离株JS5F基因(约1700bp),测序确认后,将其克隆入真核表达载体pVAX1,获得重组真核表达质粒pVAX1-F。pVAX1-F经脂质体转染COS-7细胞,间接免疫荧光试验检测出F基因在COS-7细胞中的表达产物。将pVAX1-F转化减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207,构建成功携带DNA疫苗的重组沙门氏菌SL7207(pVAX1-F)。重组菌以109CFU/只的剂量2次免疫BALB/c小鼠,免疫小鼠可以检测到特异性针对NDVF蛋白的血清抗体和小肠粘膜抗体应答,SL7207(pVAX1-F)免疫组抗体水平显著高于SL7207(pVAX1)组(P<0.05)。将SL7207(pVAX1-F)以109CFU/只剂量口服免疫1日龄雏鸡,免疫保护试验结果显示,SL7207(pVAX1-F)免疫组对鸡具有良好的保护率(77.27%),与空白对照组和SL7207(pVAX1)空载体组之间存在显著性差异(P<0.05)。结果表明,该运送DNA疫苗的减毒沙门氏菌系统在体内能成功释放所携带的质粒,并能刺激机体产生免疫应答,可对NDV强毒攻击提供良好的免疫保护作用,提示该疫苗候选株对新城疫的控制有重要应用前景。     

减毒沙门氏菌作为口服活疫苗载体的研究进展

文章就沙门氏菌相关基因的特点、减毒沙门氏菌载体激发的免疫应答、进入机体免疫系统的机制、减毒沙门氏菌的应用、载体疫苗的优越性及潜在危险性几方面综述了减毒沙门氏菌作为口服疫苗载体的研究进展,为新型菌苗的研制提供一种新的思路。     

细菌重组减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗研究进展

鼠伤寒沙门氏菌 ( St)是一种肠道致病菌 ,通过基因突变可构建许多鼠伤寒沙门氏菌减毒株 ,例如 :X40 72、X42 17、X45 5 0、X4989、X4990、 X40 64、 SL 3 2 61、 GID10 1、 GID10 5、GID10 6和 BRD5 0 9等 ,它们均是两个或多个基因的精确突变 ,其基因型和表型均很稳定 ,可用作构建细菌性疫苗的表达载体。国内外学者相继研制了肺炎链球菌、结核杆菌、百日咳杆菌、产单核细胞李斯特菌、鼠疫耶尔森菌、土拉弗郎西斯菌、铜绿假单胞菌、淋病奈瑟菌、牛布氏杆菌、破伤风梭菌、炭疽芽孢杆菌、沙眼衣原体和猪肺炎支原体等细菌的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗。文章着重讨论了这些疫苗的构建及其免疫机制等方面的研究进展 ,从而为新型菌苗的研制提供一种新的思路     

减毒鼠伤寒沙门菌活疫苗载体研究进展

活载体疫苗技术的发展促使产生了更多的疫苗设计新思路.沙门菌是一种肠道细菌,目前已通过基因突变的方法构建了许多种减毒株,如GID101、GID105、X4064、ZJⅢ、Ty800、X4632、X4550、X4072和X3730等,这些减毒株被突变掉了两个或两个以上的基因,然而其基因型和血清型仍很稳定,所以人们常将其用作基因疫苗的表达载体或运送载体.现在已有许多种细菌、病毒和寄生虫的减毒沙门菌活载体疫苗被研制成功.文章对沙门菌的减毒方法,减毒沙门菌的免疫机理以及其用途和作为疫苗载体的优缺点做了简述.     

减毒沙门氏菌为载体传递鸡球虫DNA疫苗的安全性、稳定性与免疫原性

将携带鸡柔嫩艾芙耳球虫5401基因的真核表达质粒pcDNA3—5401的减毒沙门氏菌ZJ111菌株（ZJ111／pcDNA3—5401）口服接种于3日龄非免疫鸡，2周后进行第2次接种。结果表明．利用该减毒沙门氏菌作为戴体具有相对安全性，用限制性酶切分析和PCR鉴定证实，体内试验和体外培养的重组质粒在受体菌ZJ111菌株内比较稳定。用ZJ111／pcDNA3—5401（10^4cfu）口服接种非免疫鸡．2周后用相同剂量加强免疫1次，二免后2周用柔嫩艾笑耳球虫孢子化卵囊攻击，观察其免疫效果。结果表明，重组ZJ111／pcDNA3—5401菌既能诱导产生抗鸡柔嫩艾芙耳球虫抗体，也能显著增强淋巴细胞增殖水平（P〈0．05）；其抗球虫指数为164．98。试验结果显示，利用减毒沙门氏菌为戴体传递DNA疫苗具有良好的安全性、稳定性和免疫原性。     

减毒沙门菌在禽用疫苗应用中的研究进展

减毒沙门菌感染宿主细胞后,可诱导机体产生强烈的体液免疫、细胞免疫和黏膜免疫反应,不仅可以用作疫苗,而且也是理想的疫苗载体.文章对禽用疫苗中的减毒沙门菌活疫苗、减毒沙门菌携带的重组疫苗和DNA疫苗的研究进行了综述,以期为新型禽用疫苗的研究提供参考.     

表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗株的构建及动物免疫试验

本试验旨在构建表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) GP5蛋白的口服重组减毒鼠伤寒沙门氏菌活载体疫苗株.PCR克隆除去信号肽序列的PRRSV ORF5基因,将其插入到表达载体pYA3341中,构建重组质粒pYA3341-ORF5.将重组质粒电转入鼠伤寒沙门氏菌疫苗株X4550(缺失Asd、Cya、Crp基因),获得重组疫苗菌株X4550(pYA3341-ORF5).鉴定重组菌GP5蛋白的表达;测定重组菌定居特性及安全性;检测免疫小鼠血清抗体;流式细胞仪检测重组菌对小鼠T淋巴细胞CD4+和CD8+亚群的影响;最后进行免疫猪血清抗体检测.结果表明,酶切鉴定证实重组质粒构建成功;Western blot证实重组菌表达的GP5蛋白能与PRRSV阳性血清特异性结合;重组菌在体内可较稳定地定居于小鼠的肠系膜淋巴结和脾脏中,并在其中表达出GP5蛋白;小鼠口服试验证实重组菌无毒性作用;重组菌口服免疫小鼠可以产生抗GP5蛋白抗体且抗体具有中和活性;重组菌株能不同程度地使CD4+、CD4+/CD8+升高,而使CD8+下降,表明重组菌对细胞免疫功能具有调节作用;淋巴细胞增殖试验表明,重组菌能诱发小鼠产生较强的细胞免疫应答;重组菌口服免疫猪可以产生抗GP5蛋白抗体.本试验成功构建了能稳定表达PRRSV GP5蛋白的口服减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗株,为研究PRRSV口服基因工程疫苗奠定基础.     

以减毒鼠伤寒沙门氏菌为载体的重组NDV-HN口服疫苗的构建与鉴定

试验旨在构建表达鸡新城疫病毒(NDV)HN基因的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌SL1344ΔcrpΔasd(pYA3493-HN)。以pMD18-T-HN为模板,通过PCR扩增出NDV HN基因片段,定向插入原核表达载体pYA3493中,将重组表达质粒pYA3493-HN转入χ6097,再转入减毒鼠伤寒沙门氏菌SL1344ΔcrpΔasd,通过双酶切和PCR对质粒进行鉴定。结果表明,携带NDV HN基因片段的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌SL1344ΔcrpΔasd(pYA3493-HN)构建成功。本研究结果为开发鸡新城疫的口服基因工程活载体疫苗奠定了基础。