Thin layer chromatography in studies of cereal lipids

Zusammenfassung Verderb im Getreidekorn konnte chemisch charakterisiert werden durch Herabsetzung nichtpolarer und polarer Lipide, Bildung freier Fettsäuren und rasches Verschwinden von wenigstens 5 Ninhydrinoder Dragendorff-positiv polaren Lipiden. Der Abbau der polaren Lipide erfolgte rascher und intensiver als die Bildung freier Fettsäuren oder das Verschwinden der Triglyceride. Während des Lagerungsverfalls von Weizen werden mindestens 4 Bestandteile gebildet, wie Autofluoreszenz unter ultraviolettem Licht erkennen ließ. Freie Fettsäuren verschwanden und. Triglyceride wurden während der Reife der Weizencaryopse gebildet. Carotinoidfarbstoffe verschwanden mit der Entwicklung und Reife der Weizencaryopse. Studien an einzelnen Caryopsen des reifenden Weizens ließen eine Zunahme der Monogalactosylglyceride, der Digalactosylglyceride und des Phosphatidylcholins erkennen. Die Endospermlipide des Weizens waren mengenmäßig reicher an polaren Lipiden als die Kleie oder der Keimling. Digalactosylglycerid ist hauptsächlich im Endosperm lokalisiert. Der Sitz des Phosphatidylcholins ist in den äusseren Schichten der Weizencaryopse. Phosphatidylcholin und wahrscheinlich Phosphatidylserin verschwinden während der Keimung. Sproß und Wurzel von keimenden Weizencaryopsen enthalten mengenmäßig mehr an einer Mischung von Hydrocarbonen und Sterolestern und freien Fettsäuren aber weniger von Triglyceriden als die Caryopsen selbst.

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Résumé La détérioration des grains est accompagné d'une diminution des lipides polaires et non polaires, de la formation d'acides gras libres et de la disparition rapide d'au moins 5 lipides polaires donnant des réactions positives à la ninhydrine et du Dragendorff. L'hydrolyse des lipides polaires est plus rapide, plus complète que la formation d'acides gras libres ou la disparition des triglycérides. Au cours de la détérioration du blé stocké, au moins 4 composés se forment, qui montrent une auto-fluorescence en lumière ultraviolette. Les acides gras libres disparaissent et les triglycérides se forment au cours de la maturation du blé. Les pigments caroténoides disparaissent lorsque le grain de blé se développe et murit. L'étude de grains de blé individuels en cours de maturation révèle une augmentation des monogalactosylglycérides, des digalactosylglycérides et de la phosphatidylcholine. Les lipides de l'endosperme du blé sont notablement plus riches en lipides polaires que ceux du son ou du germ. Les digalactosylglycérides sont localisés principalement dans l'endosperme; la phosphatidylcholine se situe dans les couches périphériques du grain. La phosphatidylsérine et probablement la phosphatidylsérine disparaissent durant la germination. La plumule, les racines du blé germé contiennent notablement plus de mélange et d'esters d'hydrocarbones de stérides, et d'acides gras libres et moins de triglycérides que les grains eux-mêmes.

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with 16 figs.

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Contribution No. 479, Department of Flour and Feed Milling Industries. Modified from a paper presented at the International Rye Congress, Poznan, Poland, May 1965.     

La chromatographie sur couche mince: Principes et possibilités

Résumé Après un bref rappel des avantages de la chromatographie de surface sur la chromatographie sur colonne, on compare les avantages et les inconvénients respectifs de la chromatographie sur couche mince et de la chromatographie sur papier. Les méthodes générales de la chromatographie sur couche mince (CCM) sont présentées (préparation des couches, types de couches, dépot des échantillons à analyser, CCM analytique, CCM préparative, moyens de développement des chromatogrammes). Les principes généraux des divers types de chromatographie (adsorption, partage direct, partage inversé, relargage, exclusion-diffusion, échange d'ions, spécifique) qui peuvent être mis en oeuvre sont rappelés et des exemples concrets sont donnés dans chaque cas. Les problèmes de l'électrophorése et de la chromato-electrophorése sur couche mince sont également évoqués. Bien que cette méthode analytique soit le plus simple et le puissant moyen de séparation des corps en mélange, il est nécessaire de rappeler que bien des erreurs de conception sont à la base de son manque de développement dans certains domaines (chromatographie des substances hydrosolubles par exemple). A titre d'exemple on rappelle que la première chromatographie de relargage et la première chromato-electrophorése basse tension n'ont été réalisées que tout récemment.

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Summary After a brief summary of the advantages of surface chromatography compared to column chromatography, the respective advantages and inconveniences of thin-layer and paper chromatography are compared. The general methods of thin-layer chromatography are presented (preparation of the layers, types of layers, deposition of the samples to be analyzed, analytical TLC, preparative TLC, methods for developing the chromatograms). The general principles of the various types of chromatography (adsorption, direct partition, reverse partition, salting out, exclusion-diffusion, ion-exchange, specific chromatography) that may be used are reminded of, and concrete examples given in each case. The problems of electrophoresis and thin layer chromato-electrophoresis are also treated. Though this analytical method be the simplest and most powerful means for the isolation of components in mixtures, it is necessary to remind that quite a number of errors in the conception are responsible for its lack of development in certain fields (water soluble substances chromatography, for instance). As an example one might remember that the first salting-out chromatography, and the first low-tension chromatoelectrophoresis have been developed only very recently.

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Zusammenfassung Die Vorzüge der Oberflächen-Chromatographie gegenüber der Säulen-Chromatographie wurden kurz aufgezählt und die Besonderheiten der Dünnschicht- und der Papier-Chromatographie verglichen. Die Grundlagen der DC werden erklärt (Vorbereitung der Schicht, Arten der Schicht, Auftragen der Proben, analytische DC, vorbereitende DC, Entwicklungsverfahren der Chromatogramme). Anschließend werden die grundsätzlichen Verfahren der verschiedenen Typen von Chromatographie erörtert (Adsorption, direkte Trennung, inversierte Trennung, Aussalzen, Diffusion, Ionenaustausch, spezifische Verfahren), die praktisch infrage kommen. Für jeden Typ werden Beispiele gegeben. Die Probleme der Elektrophorese und der Elektrophorese-DC werden ebenfalls behandelt. Obwohl diese Analysenmethode das einfachste und stärkste Trennverfahren für Stoffgemische ist, so muß daran erinnert werden, daß ihre Entwicklung in gewissen Gebieten durch Fehler in der Auffassung gehemmt worden ist, zum Beispiel ihre Anwendung für wasserlösliche Stoffe. Verfasser weist darauf hin, daß die erste Aussalz-DC und die erste Niederspannungs-Chromato-Elektrophorese erst ganz kürzlich realisiert wurden.

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Avec la collaboration technique de MademoiselleCh. Thommegay et de MademoiselleA.-M. Drapier.     

Application de la CCM à l'étude des huiles volatiles

Résumé Nous avons employé la méthode de chromatographie sur couche mince pour l'identification et la séparation des composants de quelques huiles essentielles bien connues comme Sandalwood, Patchouly et Vetiver huiles. Après avoir mis au point les meilleures conditions de séparation: (qualité, composition et préparation de l'adsorbant, composition de l'agent de développement, temps, température), on a choisi l'agent le plus approprié pour le développement des composants contenant de différents groupes fonctionnels.L'identification des principaux composants des huiles, faute d'agents de référence propres, a été exécutée d'une part en fonction des valeurs Rf de la littérature, d'autre part par l'élution et par chromatographie en phase gazeuse des composants séparés par chromatographie en couche mince.On a élaboré le spectrogramme des composants principaux de l'huile Patchouly pure et de ceux séparés par CCM, en employant un spectrophotomètre de type UR-20, pour déterminer la composition qualitative et quantitative de l'huile. La mise au point des procédés combinés employés pour la détermination de la composition qualitative et quantitative des huiles essentielles fera l'objet de notre prochain programme de travaux.

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Summary We employed the method of thin-layer chromatography for the separation and identification of some well-known essential oils as Sandalwood, Patchouly and Vetiver oils. After having cleared up the factors securing satisfactory separation (quality, composition and preparation of the adsorbent, composition of the developing agent, time and temperature), the most suitable reagent for the developing of the components containing different functional groups has been chosen.For want of pure reference agents, we identified the main oil components partly on the basis of the Rf values of the literature, partly by the elution and by gas-chromatography of the components separated by thin-layer chromatography.We registered the spectrogram of the main components separated by thin-layer chromatography and of those of pure patchouly oil, employing a spectrophotometer of Type UR-20, in order to determine the quality and quantity of the components of the oils. Detailed elaboration of the combined methods serving for the qualitative and quantitative determination of the composition of essential oils will be the program of our further research work.

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Zusammenfassung Die Methode der Dünnschichtchromatographie wurde für die Trennung und Identifizierung der Komponenten einiger wohlbekannter ätherischer Öle sowie Sandelholz-, Patchouly- und Vetiver-Öle verwendet. Nach Aufklärung der die entsprechende Trennung sichernden Umstände (Qualität und Zusammensetzung, sowie Vorbereitung des Adsorbens, Zusammensetzung des Anfärbereagenz, Zeit, Temperatur) wurde für die Entwicklung der die verschiedenen funktionellen Gruppen enthaltenden Komponenten das geeigneteste Reagenz gewählt.Die Identifizierung der Hauptkomponenten der Öle wurde, mangels Referenzsubstanzen, teils auf Grund literarischer Rf-Werte, teils durch die Eluierung und durch Gaschromatographie der mittels Dünnschichtchromatographie getrennten Komponenten durchgeführt.Wir haben auf dem UR-20 Typ Spektrophotometer das Spektrogram des reinen Patchouly- Öles und der durch Dünnschichtchromatographie getrennten Hauptkomponenten des Öles, zwecks qualitativer und quantitativer Aufklärung der ölbindenden Komponenten, aufgenommen. Das Programm unserer weiteren Arbeit bildet die ausführliche Ausarbeitung der für die Bestimmung der quantitativen und qualitativen Zusammensetzung der ätherischen Öle dienenden kombinierten Methoden.

     

La CCM dans l'etude des isomeres de position et geometriques des acides gras mono- et polyinsatures

Résumé On a employé la chromatographie en couche mince de gel de silice G imprégné de nitrate d'argent et celle imprégné de nitrate d'argent ammoniacal pour séparer les isomères géométriques des acides avec dix-huit atomes de carbone, respectivement mono- et polyinsaturés.L'emploi de la chromatographie en couche mince, comme technique de séparation, en coordination avec la chromatographie en phase gazeuse, la spectrophotométrie U.V. et I.R. nous a permis l'identification des différents isomères.Avec cette méthode on a pu aussi déterminer les isomères géométriques et de position de certains acids polyinsaturés conjugués, c'est à dire le 9, 11- et le 10, 12- octadécadiénoïques.Les méthodes que nous avons décrites peuvent être aussi appliquées pour révéler les isomères géométriques et de position des lipides alimentaires.

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Summary Thin layer chromatography on Silica Gel G and silver nitrate, and silver nitrate and ammonium hydroxide was used in the separation of geometrical isomers of C₁₈ fatty acids mono- and polyunsaturated, respectively.The use of thin layer chromatography, as a preparative technique, in coordination with gas chromatography, infrared and ultraviolet spectrophotometry allowed the identification of each isomer.By this method geometrical and positional isomers of some conjugated polyunsaturated acids like 9,11- and 10,12-octadecadienoic, were also determined.The method described can be applied to the study of geometrical and positional isomers in food lipids.

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Zusammenfassung Die DC auf AgNO₃-Kieselgel G und [Ag(NH₃)₂] NO₃-Kieselgel G wurde für die Trennung der geometrischen Isomeren der mono — und polyungesättigten C₁₈ — Fettsäuren verwendet.Die Anwendung der Dünnschicht-Chromatographie, als Vorbereitungstechnik, hat zusammen mit der Gaschromatographie und mit der I.R. — und U.V. — Spektrophotometrie die Identifizierung von verschiedenen Isomeren erlaubt.Die Stellungs- und die geometrischen Isomere von einigen konjugierten poly-ungesättigten Fettsäuren (wie 9,11- und 10,12-C₁₈-di-ungesättigten Fettsäuren) sind durch diese Methode bestimmt worden.Die beschriebenen Methoden können zur Erkennung der geometrischen und Stellungs-Isomere, die in den Fetten der Nährstoffe enthalten sind, angewandt werden.

     

Thin layer chromatographic studies of the carotenoids of tea

Thin layer chromatographic techniques were used in the study of the carotenoids of the tea leaf. This method gave clear cut separations in half an hour and required small quantities of starting material. Another advantage being the ability to use corrosive reagents on the chromatoplate. Shandon thin layer chromatographic equipment was used.Preliminary qualitative work showed that at least fourteen carotenoids were present in the tea leaf. The extraction procedure described included a saponification to remove the chlorophylls and the lipids. The carotenes and the monohydroxyxanthophylls were separated on silica gel plates while the polyhydroxyxanthophylls and epoxides were separated on kieselguhr plates which had been previously impregnated with vegetable oil. The Rf values and other chemical data were presented. The nine carotenoids identified were -carotene, phytoene, phytofluene, lycopene, -carotene, cryptoxanthin, violaxanthin, lutein and zeaxanthin. Among the unidentified carotenoids were two red carotenoids, probably keto compounds, and two 5,6 epoxides.

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Zusammenfassung Zur Untersuchung der Carotinoide des Teeblattes wurde die Dünnschichtchromatographie herangezogen. Diese Methode liefert innerhalb einer halben Stunde eine klare Trennung der einzelnen Komponenten und erfordert nur geringe Mengen des Ausgangsmaterials. Ein anderer Vorteil liegt darin, daß man agressive Reagenzien anwenden kann. Es wurde die Shandon Dünnschichtchromatographie-Ausrüstung verwendet.Vorversuche ergaben, daß mindestens vierzehn Carotinoide in den Teeblättern vorliegen. Die beschriebene Extraktionsmethode schließt eine Verseifung ein, um das Chlorophyll und die Lipide zu entfernen. Die Carotine und Monohydroxyxanthophylle wurden auf Kieselgel-Platten getrennt, während die Polyhydroxyxanthophylle und die Epoxide auf Kieselgur-Platten fraktioniert wurden, die zuvor mit Pflanzenölen imprägniert waren. Die Rf-Werte und andere chemische Daten werden angeführt. Die neun identifizierten Carotinoide sind: -Carotin, Phytoen, Phytofluen, Lycopin, -Carotin, Cryptoxanthin, Violaxanthin, Lutein und Zeaxanthin. Unter den noch nicht identifizierten Carotinoiden waren zwei rote Carotinoide, wahrscheinlicht Keto-Verbindungen, und zwei 5,6-Expoxide.

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Resume Les techniques chromatographiques sur couche mince ont été utiliseés dans l'étude des carotenoides des feuilles du thé. Cette methode a permis de bonnes séparations en une demie heure avec de petites quantités de materiaux de départ. De plus, elle permet l'utilisation des produits corrosifs sur la couche mince. Les expériences ont été effectuées à l'aide d'une couche mince type Shandon. Les travaux préliminaires qualitatifs ont montré la présence de quatorze carotenoides dans les feuilles du thé au moins. La procédure d'extraction décrite contient la saponification, afin d'éliminer la chlorophylle et les lipides. La séparation chromatographique des carotines et des monohydroxy xanthophylles a été effectuée sur une couche mince silica-gel, tandis que, celle des polyhydroxy xanthophylles et des epoxides a été effectuée sur une couche mince de kieselguhr impregnée auparavant d'une huile végétale. Les valeurs de R_F et des données chimiques sont presentées. Les neufs carotenoides identifiés sont carotène, phytoène, phytofluène, lycopène, caratène, cryptoxanthène, violaxanthène, luteène, zeaxanthène. Parmi les carotenoides non-identifiées se trouvent; deux carotenoides rouges, probablement des composés céto, et deux, 5, 6 époxides.

     

Nouvelles techniques de separations chromatographiques a l'aide de couches minces sur support flexible: Eastman Chromagram

Résumé La chromatographie sur couche mince donne lieu chaque jour à des applications nouvelles. Sa mise au point sur support souple a par exemple, permis de réaliser des progrès dans plusieurs domaines.Grâce à la possibilité de courber la feuille, on a pu faire des séparations sur cône, en conservant la finesse de séparation de la couche mince, et en profitant des possibilités de concentration croissante avec la migration, caractéristique de la technique sur cône.En chromatographie quantitative, ou dans certains cas de séparation, on a pu sur des couches suffisamment épaisses isoler complètement les produits séparés en découpant les taches ou les zones avec des ciseaux. Cette technique peut être employée simultanément avec la chromatographie sur cône. Dans le cas de séparations sur couche de polyamide non insolubilisée, il a été possible, après séparation, de clarifier la couche par des vapeurs d'éthanol. Après découpage et pelliculage de la couche chromatographique, on a pu faire ensuite des spectrophotomètries par transmission dans le visible et l'ultra-violet jusqu'à 240 nm afin de caractériser les produits séparés. L'étude du déplacement des bandes d'absorption par rapport à une spectrophotométrie en solution a été faite dans quelques cas expérimentaux.D'autre part, en travaillant sur des couches très minces (silice, alumine, résine micro-coagulée de type polycarbonate) on a pu accroître le pouvoir résolvant de la couche, c'est à dire diminuer les prises d'essais à 0,2, µl et réduire la distance de séparation à moins de 4 cm.Des exemples de séparations notamment de colorants, de vitamines, de corps gras, de sucres, de pesticides sont cités dans ces divers domaines.

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Summary Thin-Layer chromatography finds new applications each day. Its use of a flexible support, for instance, made possible advancement in several fields.Thanks to the possibility of bending the sheet it was possible to make separations on a cone, while preserving the fineness of separations obtained on thin-layer and taking advantage of the possibilities of concentrations increasing with the migration, characteristic of the technique on cones.In quantitative chromatography, and in certain cases of separation, it was possible, on sufficiently thick layers, to completely isolate the separated products by cutting out the spots or zones with scissors. This technique can be used simultaneously with cone chromatography. In the case of separations on layers of unsolibilized polyamide, it was possible, after separation, to clarify the layer with ethanol vapours. After cutting out and turning the chromatographic layer into a film, it was possible to achieve spectrophotometries by transmission in the visible and the ultraviolet zone until 240 nm in view to characterize the isolated products. The study of the migration of absorption bands compared to a solution spectrophotometry has been done in a few experimental cases.On the other hand, by operating on very thin layers, (silica, alumina, micro-coagulated resin of polycarbonate type) it was possible to increase the resolving power of the layer, which means that it was possible to diminish the importance of the experimental sample to 0.2 µl, and reduce the distance of separation to less than 4 cm.Examples of separations, more particularly of dyes, vitamins, fats, sugars, pesticides, are given in these various fields.

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Zusammenfassung Die Dünnschichtchromatographie findet immer neue Anwendungsbereiche. Die Technik mittels flexiblen Trägern erlaubte auf verschiedenen Gebieten nennenswerte Fortschritte.Infolge der Möglichkeit, das Band zu biegen, konnte man Trennungen gemäß der Konustechnik durchführen, wobei die Trennfeinheit der dünnen Schicht gewahrt blieb und von der mit der Migration anwachsenden Konzentrierung, die charakteristisch ist für die Konustechnik, profitiert wurde.In der quantitativen Chromatographie, oder für bestimmte Trennungen, konnte man auf genügend dicken Schichten die getrennten Stoffe durch Abschneiden der Flecke oder der Zonen völlig isolieren. Diese Technik kann ebenfalls für die Konus-Chromatographie zur Anwendung kommen. Im Fall der Trennungen auf unlöslich gemachten Polyamid-Schichten war es nach der Trennung möglich, die Schicht mittels Ethanoldämpfen zu klären. Nach Schneiden und Zubereiten der chromatographischen Schicht konnte man anschließend Spektrophotometer-Aufnahmen durch Übertragung in den sichtbaren und Ultraviolettbereich bis 240 nm herstellen, die der Charakterisierung der getrennten Produkte dienten. Das Studium der Verschiebung der Absorptionsstreifen im Verhältnis zur Spektrophotometeraufnahme in Lösung wurde für einige Versuche durchgeführt.Man hat andererseits bei Versuchen mit sehr dünnen Schichten (Siliziumdioxyd, Aluminiumoxyd, mikrokoaguliertes Harz vom Polykarbonate-Typ) das Lösungsvermögen der Schicht vergrößern können, was zu einer Verringerung der Proben auf 0.2 µl und des Trennabstandes auf weniger als 4 cm führte.Beispiele von Analysen der Farbstoffe, der Vitamine, von Fetten, Zuckern und Pestiziden werden gegeben.

     

Proof and thin layer chromatographic separation of phenolic antioxidants

Summary For the stabilisation of fats and oils, especially those of animal origin and the products with high fat content different antioxydants are lately used, from which the most common are the phenolic ones. With regard to their low admissible amount (0.01–0.05%) it is necessary not only for their determination but also for their proof to use suitable and sensitive methods. We have developed the method for the proof of phenolic antioxydants in fats and oils by means of thin layer chromatographic separation on silica gel and polyamide powder. For the separation of gallic acid and its esters the best result was achieved with solvent system containing 20–35% acetic acid in chloroform. At this concentration of acetic acid the differences in R_f values for the homologic sequence are largest. With the suitable arrangement it is possible with this procedure to proof also NDGA, BHA and BHT.Good results were achieved also with the separation of phenolic antioxydants on thin layers with polyamide powder. For the separation of gallic acid and its esters a solvent system containing carbon tetrachlorid and ethanol (7 : 3) was most suitable. Best separation of esters of gallic acid from NDGA and BHA was achieved with a solvent system containing methanol-aceton-water (6 : 1 : 3). For the detection of phenolic antioxydants their nitrosation with succes was used. This detection is very sensitive and suitable for the identification of these substances after their thin layer chromatographic separation.

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Zusammenfassung Zur Stabilisierung von Fetten und Ölen besonders tierischen Ursprungs und von Produkten, die an solchen Fetten reich sind, verwendet man in letzter Zeit in zunehmenden Maße verschiedene Oxydations-Inhibitoren, die größtenteils phenolischer Natur sind. Da die zulässigen Konzentrationen dieser Stoffe niedrig sind (0.01–0.05%), müssen zu ihrer Bestimmung, aber auch zu ihrem Nachweis, geeignete und empfindliche Methoden angewendet werden.Zum Nachweis phenolischer Oxydations-Inhibitoren in Fetten und Ölen wendeten wir einerseits die chromatographische Trennung auf dünner Silikagel-Schicht an, andererseits die Trennung auf einer dünnen Schicht Polyamidpulver. Zur Trennung von Gallussäure und Gallussäure-Ester bewährte sich Chloroform in verschiedenen Verhältnissen mit Essigsäure (am besten in Konzentration von 20–35%). Bei dieser Konzentration der Essigsäure sind die Unterschiede in den Rf-Werten in der homologen Reihe am größten. Durch geeignete Anordnung der Systeme sind auf diese Weise außer den Gallaten auch NDGA, BHA und BHT abzutrennen bzw. nachzuweisen.Gute Ergebnisse wurden auch bei der Trennung dieser Stoffe auf dünnen Polyamid-Schichten erzielt. Zur Trennung der Gallussäure-Ester wurde ein Gemisch von Tetrachlormethan und Äthanol im Verhältnis 7 : 3 verwendet. Zur Trennung der Gallate von NDGH und BHA wählten wir ein Gemisch von Methanol, Aceton und Wasser im Verhältnis 6 : 1 : 3. Zum Nachweis dieser Stoffe bewährte sich deren Nitrosierung. Dieser Nachweis ist hochempfindlich und eignet sich zur Identifikation dieser Stoffe nach deren chromatographischer Abtrennung auf dünner Schicht.

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Résumé A la stabilisation des graisses et des huile surtout d'origine animale, et des produits à haute teneur en ces graisses, on emploie actuellement largement différents antioxydants dont la plupart est de nature phénolique. Vu les concentrations admissibles assez basses de ces substances (0.01–0.05%) il est nécessaire d'appliquer pour leur détermination et même pour les repister, une méthode convenable et sensible.A la démonstration des antioxydants phénoliques dans les graisses et les huiles nous avons appliqué tantôt la séparation chromatographique sur une couche mince de silicagel, tantôt la séparation sur une couche mince de poudre polyamidé. A la séparation de l'acide gallique et des esters d'acide gal., le chloroforme en proportions différentes avec l'acide acétique (la meilleure concentration de 20–35%) nous affirma son épreuve. A cette concentration d'acide acétique il y a des différences plus grandes des valeurs Rf dans la série homologique. Par un arrangement convenable des systèmes il est possible de séparer de cette façon outre des gallates resp. démontrer même NDGA, BHA et BHT.De bon résultats furent atteints aussi pour la séparation de ces substances sur des couches minces de polyamide. Pour la séparation des esters d'acide gallique le mélange de tétrachlore carbonique et d'éthanol en proportion 7 : 3 fut employé. A la séparation des gallates de NDGH et BHA ce fut le mélange de méthanol et d'acétone et d'eau en proportions 6 : 1 : 3. Pour la détection de ces substances la nitrosation qui nous donna la meilleure preuve. Cette détection est très sensible et appropriée à l'identification de ces substances après leur séparation chromatographique sur une couche mince.

     

L'utilisation de la chromatographie sur couches minces pour separer quantitativement les flavonols des anthocyanes des extraits et jus de raisin et des vins en vue du dosage de ces colorants jaunes

Résumé Les recherches sur les flavonols du raisin et du vin prennent une importance croissante, notamment à cause des propriétés vitaminiques et physiologiques de ces polyphénols et de l'intérêt que présentent ces colorants jaunes en génétique.Dans le cas du raisin, on constate qu'il n'existait pas jusque-là de méthode adéquate d'isolement quantitatif des flavonols. Or la chromatographie sur couche mince permet une séparation fine des divers polyphénols, et en particulier des flavonols, sans qu'un traitement préalable du vin soit nécessaire. Cette technique donne en outre la possibilité de récupérer facilement ces flavonols en vue de leur dosage.Au cours des recherches entreprises dans cette direction à la Station Centrale de Technologie des Produits Végétaux (I.N.R.A.) de Narbonne, on a d'abord sélectionné la cellulose comme support et deux solvants de développement. Le mode opératoire établi, fondé sur la chromatographie bidimensionnelle conduit simultanément à la séparation entre flavonols et anthocyanes et à la séparation individuelle des divers flavonols, glucosides et aglucones, qu'il est ainsi possible d'identifier et de doser après grattage et élution.Le dosage global est fondé sur la mesure, à 430 mµ, de l'exaltation de la densité optique due à la formation d'un complexe avec l'aluminium. Dans les conditons précisées, l'exaltation est proportionnelle au nombre de molécule-grammes de flavonols par litre et indépendante de la nature des flavonols. La rutine est prise comme étalon. La précision des résultats est de ± 4 mg/l.Le choix de la chromatographie sur couche mince de cellulose permet l'utilisation de cette méthode dans le cas des moûts, des jus et des extraits.L'application de cette méthode montre que les vins rouges peuvent contenir de l'ordre de 100 mg de ces colorants jaunes par litre (vendange éraflée). Les vins blancs sont très pauvres (de l'ordre de 5 mg/l), sauf s'ils proviennent d'une vinification avec macération des pellicules auquel cas ils sont aussi riches en flavonols que les vins rouges.

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Summary Investigations on flavonols of grapes and wine are growing in importance, especially because of the vitaminic and physiological properties of these polyphenols and of the interest presented by these coloured compounds in genetics.In the case of grapes one may see that up to now there was no adequate method for the quantitative isolation of flavonols. Now thin-layer chromatography makes possible a precise separation of the various polyphenols, and particularly of flavonols without any previous treatment of the wine being necessary. This technique gives also the possibility of easily recovering these flavonols in view of their quantitative determination.In the course of investigations undertaken in this direction by the Central station of Technology of vegetable products (INRA) of Narbonne, cellulose as support and two developing solvents were selected. The operatory procedure, such as it was established, based on bi-dimensional chromatography, leads simultaneously to a separation between flavonols and anthocyans, and to the individual separation of the various flavonols, glucosides, and aglucones, that it is possible to identify and determine quantitatively after scraping and elution.The overall quantitative determination is based on the measuring at 430 mµ, of the increase of the optical density due to the formation of a complex with aluminium. In the conditions of the experiment this increase is proportional to the number of molecule-grams of flavonols. Rutin is taken for standard. The precision of the results is ± 4 mg/l.The choise of chromatography on thin-layer of cellulose enables this method to be used in the case of musts, juices, and extracts.The application of this method shows that red wines can contain as much as 100 mg of those yellow-coloured substances per liter (after destemming). White wines are very poor (of about 5 mg/l) except when they are macerated with their skins during the elaboration of the wine, in which case they are as rich in flavonols as are the red wines.

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Zusammenfassung Die Forschungen über die Flavonole der Rebe und des Weines werden immer bedeutender, besonders wegen der physiologischen Eigenschaften dieser Polyphenole, auch als Vitamin, und dem genetischen Interesse dieser gelben Farbstoffe. Im Fall der Rebe stellt man fest, daß es bisher keine entsprechende Methode zur quantitativen Isolierung der Flavonole gab. Die DC erlaubt aber eine feine Scheidung der verschiedenen Polyphenole, besonders der Flavonole, ohne vorherige Behandlung des Weines. Diese Technik gibt übrigens die Möglichkeit, diese Flavonole zur Bestimmung leicht zu gewinnen. Im Verlauf der Forschungen in dieser Richtung hat man in der Zentrale für Technologie der Pflanzenprodukte (I.N.R.A.) von Narbonne die Cellulose als Träger und zwei Entwicklungslösungsmittel gewählt. Dieser Arbeitsvorgang, die zweidimensionale Chromatographie, führt sowohl zur Trennung der Flavonole und Anthocyane, als auch zur individuellen Trennung der verschiedenen Flavonole, Glucoside und Aglucone, die auf diese Weise identifiziert und nach dem Abkratzen und Eluieren bestimmt werden können. Die quantitative Bestimmung basiert auf der Messung bei 430 mµ, der Erhöhung der optischen Dichte mittels Bildung eines Komplexes mit Aluminium. Unter den Versuchsbedingungen steht diese Erhöhung im Verhältnis zur Zahl der Gramm-Mole der Flavonole je Liter und ist unabhängig von der Natur der Flavonole. Das Rutin dient zur Eichung. Die Genauigkeit der Ergebnisse ist ± 4 mg/l. Die Wahl der DC auf Cellulose erlaubt die Verwendung dieser Methode für Moste, Säfte und Extrakte. Die Anwendung dieser Methode zeigt, daß die Rotweine diese gelben Farbstoffe in der Größenordnung von 100 mg/l enthalten können (Weinlese nach Abbeeren). Die Weißweine sind sehr arm (in der Größenordnung von 5 mg/l), außer wenn bei der Weinbereitung der Most lange auf der Maische steht. Im letzten Fall sind sie so reich an Flavonolen wie die Rotweine.

     

Thin layer-chromatographic separation of fat soluble and water soluble food dyes

Summary The use of fat soluble and water soluble food dyes in food technology requires reliable proofs and precise identification of these substances in foodstuffs. This problematic has been studied more detailed in our Institute. During these studies some suitable procedures for thin layer chromatographic separation of these substances have been developed.For the separation of fat soluble food dyes the chromatography on thin layers of aluminium oxide and the chromatography on thin layers of starch with reversed phases were used. In the first case good separation was achieved with a solvent system containing petroleum ether and carbon tetrachlorid and their mixtures. In the second case the starch plates were impregnated with paraffin or vegetable oil, and as mobile phases a solvent system containing methanol-water-acetic adic (16 : 3 : 1) and others solvent mixtures currently used in paper chromatography were used.Water soluble food dyes were separated on thin layers of polyamide powder, which was used also for their quantitative isolation from foodstuffs. The best results were achieved with basic solvent system, for example, with a mixture containing ammonia-methanol water (5 : 15 : 80).The developed analytical procedures are suitable for the proof and the separation of fat soluble and water soluble food dyes in all foodstuffs.

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Zusammenfassung Die Verwendung von wasser- und fettlöslichen Lebensmittelfarben erfordert verläßlichen Nachweis und genaue Identifikation dieser Stoffe in den Lebensmitteln. Wir haben diese Problematik in unserem Institut eingehend studiert und einige Verfahren der chromatographischen Trennung dieser Stoffe mittels DC erarbeitet.Zur Trennung der fettlöslichen Farbstoffe verwendeten wir einerseits DC-Platten mit Aluminiumoxid, andererseits führten wir die Trennung dieser Stoffe auf einer dünnen Stärkeschicht mit umgekehrter Phase durch. Im ersten Falle wurde eine gute Trennung mit Laufmitteln erreicht, die Petroläther und Tetrachlormethan und deren Gemische enthalten. Im zweiten Falle wurde als stationäre Phase Paraffinöl, als mobile Phase eine Gemisch von Methanol, Wasser und Essigsäure im Verhältnis 16 : 3 : 1 und andere Gemische in gleichen Verhältnissen verwendet, die sich bei der Papier-Verteilungschromatographie bewährt haben.Wasserlösliche Farbstoffe wurden auf einer dünnen Schicht von Polyamidpulver getrennt, das auch zu deren quantitativer Isolation aus den Lebensmitteln verwendet wurde. Die besten Ergebnisse wurden mit alkalischen Laufmitteln erzielt, z.B. mit dem Gemisch von Ammoniak, Methanol und Wasser im Verhältnis 5 : 15 : 80.Die erarbeiteten analytischen Verfahren für Nachweis und Trennung fett- und wasserlöslicher Lebensmittelfarben bewährten sich für alle Lebensmitteltypen.

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Résumé L'utilisation des colorants alimentaires solubles dans l'eau et dans la graisse exige des preuves sûres et l'identification exacte de ces substances dans les aliments. Nous avons étudié ces problèmes en détail à notre institut et élaboré quelques procédés de séparation chromatographique de ces substances par chromatographie sur couche mince.A la séparation des colorants solubles dans la graisse, nous avons utilisé d'une part des couches versées sur l'alumine, d'autre part la séparation de ces substances sur une couche mince de fécule à phase inverse. Au premier cas une bonne séparation fut atteinte aux systèmes comprenant l'éther de pétrole et le tétrachlore carbonique, ou leurs mélanges. A l'autre cas on applique, comme une phase ancrée, de l'huile paraffinique, comme une phase mobile, du mélange de méthanol, d'eau et d'acide acétique en proportion 16 : 3 : 1 et d'autres en mêmes proportions qui avaient fait leurs preuves à la chromatographie de séparation sur le papier.Les colorants solubles dans l'eau furent séparés sur une couche mince de poudre polyamidé qui avait été de même appliqué à leur isolement quantitatif de l'aliment. Les meilleurs résultats furent atteints avec les systèmes alcalins p.e. avec le mélange de méthanol, d'ammoniac et d'eau en proportions 5 : 15 : 80.Les procédés analytiques élaborés pour des preuves et les séparations des colorants solubles dans la graisse et dans l'eau prouvèrent leur attestation avec tous les types de matières alimentaires.

     

Chemical constituents of Hypogymnia enteromorpha

The lichenHypogymnia enteromorpha (Ach.) Nyl. was sequentially extracted by a solvent series that ranged from non-polar to highly polar liquids. The principal extracellular lichen products isolated from this species were thiophaninic acid, physodalic acid, physodic acid, atranorin, and ventosic acid. The carbohydrate D-arabitol was isolated from the more polar extracts. The isolated constituents were identified by means of mixed melting points, specific color tests, thin layer chromatographic R_f values, infrared spectroscopy, nuclear magnetic resonance spectroscopy, mass spectrometry, and elemental analysis. Quantitative estimates of the amounts of these lichen constituents present in the plant are presented. Three components, thiophaninic acid, ventosic acid, and D-arabitol are here reported for the first time to be constituents of this lichen.

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Zusammenfassung Die FlechteHypogymnia enteromorpha (Ach.) Nyl. wurde stufenweise mit mehreren Lösungsmitteln extrahiert, die in ihren Zusammensetzungen von unpolar bis zu hochpolar reichten. Die wichtigsten extrazellularen Produkte, die von dieser Flechtenspezies isoliert wurden waren Thiophaninsäure, Physodalsäure, Physodsäure, Atranorin und Ventossäure. Das Kohlenhydrat D-arabit wurde von den etwas mehr polaren Extrakten isoliert. Die isolierten Bestandteile wurden durch Mischungsschmelzpunkte, spezifische Farbproben, dünnschicht-chromatographische R_f-Werte, Infrarotspektroskopie, NMR-Spektroskopie, Massenspektrometrie und Elementaranalyse identifiziert. Quantitative Bestimmungen erfolgten hinsichtlich der Flechten-Bestandteile. Die drei Verbindungen Thiophaninsäure, Ventossäure und D-arabit werden hier zum erstenmal als Bestandteile dieser Flechte beschrieben.

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Résumé On a soumis le lichenHypogymnia enteromorpha (Ach.) Nyl. à une séquence d'extractions à l'aide d'une série de solvants comprenant des liquides de nature non-polaire jusqu'à très polaire. Les principaux produits extracellulaires de lichen isolés de cette espèce comprennent l'acide thiophéninique, l'acide physodalique, l'acide physodique, l'atranorine et l'acide ventosique. On a isolé l'hydrate de carbone D-arabitol parmi des solvants de haute polarité. L'identification des constituants se fit à l'aide des points de fusions, les épreuves colorimetriques spécifiques, les valeurs R_f de chromatographie sur couche mince, la spectroscopie infrarouge, la spectrometrie de masse et l'analyse élémentaire. Des évaluations quantitatives du niveau de ces composants de lichen présents dans cette plante sont presentées. Trois composés, l'acide thiophaninique, l'acide ventosique et le D-arabitol sont rapportés ici pour la première fois comme constituants de ce lichen.

     

Chromatographie sur couche mince des oses et oligosaccharides

Résumé Après un rappel des différents supports et solvants utilisés par divers auteurs (Stahl), l'auteur propose deux solvants qui donnent une séparation efficace et rapide de certains oligosaccharides (stachyose, raffinose, saccharose...) sur Kieselgel G. Il est indiqué à titre d'exemple la séparation d'une série d'oligomannosides et des couples mannobiose-mannobiitol d'une part et mannotriosemannotriitol d'autre part, ces derniers n'étant pas séparables sur papier. Les avantages de cette technique sont, à côté de la rapidité et de la facilité de révélation, la possibilité de chromatographier des échantillons non desionisés, et l'application facile à la chromatographie quantitative. Par contre, certains couples de sucres tels que galactose-saccharose ou lactose-raffinose ne sont pas séparés de façon satisfaisante.

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Summary After recalling the various supports and solvents employed by different searchers, the author proposes two solvents giving a rapid and effective separation of certain oligosaccharides (stachyose, raffinose, sucrose ...) on Kieselgel G. As an example the author describes the separation of a series of oligomannosides and of the couples mannobiose — mannobiitol on one side, and of the couples mannotriose — mannotriitol on the other side, the separation of these groups by paper chromatography being impossible. The advantages of this technique are, besides its rapidity and ease of the development, the possibility to make a chromatographical analysis of non de -ionized samples, and the ease of its application to quantitative chromatography. On the other hand the separation of sugar couples such as galactose- saccarose or lactose- raffinose is not achieved satisfactorily.

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Zusammenfassung Nach Aufzählung von Trägern und Lösungsmitteln, die von verschiedenen Autoren benützt worden sind (Stahl), nennt die Autorin zwei Lösungsmittel, welche eine wirksame und rasche Trennung bestimmter Oligo-saccharide (Stachyose, Raffinose, Saccharose) auf Kieselgel G geben. Man zeigt, als Beispiel, die Trennung einer Reihe von Oligo-mannosiden und eines Paares Mannobiose-Mannobiitol und andererseits eines Paares Mannotriose-Mannotriitol; die letzteren sind auf Papier nicht trennbar. Die Vorteile dieser Technik sind, neben der Geschwindigkeit und Leichtigkeit der Entwicklung, die Möglichkeit der Chromatographie von nicht desionisierten Proben und die leichte Anwendung für quantitative Chromatographie. Manche Zucker-Paare jedoch, wie Galactose-Saccharose oder Lactose-Raffinose, werden nicht befriedigend getrennt.

     

Étude de la biosynthèse des alcanes dans l'epiderme des feuilles d'Allium Porrum L.

Résumé Des expériences sur la biosynthèse des alcanes ont été réalisées sur la feuille d'Allium porrum: l'épiderme et le parenchyme sont des sites de synthèse indépendants, mais dans les cires, les paraffines incorporent 20% du total de l'activité de la fraction lipidique, alors que ce taux est inférieur à 1% dans les lipides internes. L'étude de la biosynthèse des hydrocarbures a donc été réalisée sur les lipides des cires épicuticulaires. Les acitivés specifiques des acides gras et des hydrocarbures ayant incorporé divers précurseur, ont été déterminées. Il apparaît que les acides gras à très longue chaîne renferment l'essentiel de l'activité de la fraction des acides et que leurs activités spécifiques sont comparables à celles des hydrocarbures. Un mécanisme rendant compte des phénomènes observés a été proposé. Selon cette hypothèse, le système enzymatique, localisé dans les épidermes, synthétise des acides gras qui sont décarboxylés lorsqu'ils ont une longueur de chaîne suffisante. Les hydrocarbures et les acides gras relâchés du systême avant la décarboxylation sont excrétés vers les cires, où ils ne sont plus réactionnels.

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Biosynthesis of hydrocarbons in Allium Porrum

Tests on the biosynthesis of alcanes in the leaves ofAllium Porrum have been carried out: Independent syntheses take place in the epidermis and the parenchyma. The paraffins are responsible for 20% of the lipidic fraction in the waxes but for less than 1% in the internal lipids. Therefore the study of the biosynthesis of the hydrocarbons has been carried out on the lipids of the waxes of the epidermis. The specific activities of the fat acids and the hydrocarbons, incorporating earlier stages, have been determined. It seems that the fat acids with a long chain include the essential part of the acid fraction and that their activities are comparable to those of the hydrocarbons. A hypothesis has been established which would account for the phenomena which have been observed. According to this hypothesis the enzymatic system which is located in the epidermis decarboxylates synthesized fat acids when the chain is long enough. The hydrocarbons and the fat acids which are released by the system prior to the decarboxylation are excreted into the waxes where they can no longer react.

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ZUSAMMENFASSUNG Untersuchungen über die Biosynthese der Alkane imAllium Porrum-Blatt wurden durchgeführt: In der Epidermis und im Parenchym finden voneinander unabhängige Synthesen statt. In den Wachsen sind die Paraffine für 20% der Gesamtaktivität der Fettfraktion verantwortlich, in den Lipiden jedoch für weniger als 1%. Das Studium der Biosynthese der Kohlenwasserstoffe wurde daher anhand der Wachse der Epidermis betrieben. Die spezifischen Aktivitäten der Fettsäuren und der Kohlenwasserstoffe, einschließlich verschiedener Vorstufen, wurden bestimmt. Es scheint, daß die Fettsäuren mit langer Kette den wesentlichen Bestandteil der Säurefraktion bilden und daß ihre spezifische Aktivität der der Kohlenwasserstoffe vergleichbar ist. Eine Hypothese wurde aufgestellt, die die beobachteten Phänomene in Betracht zieht. Nach dieser Hypothese synthetisiert das Enzymsystem der Epidermis die Fettsäuren, die decarboxyliert werden, wenn die Kette lang genug ist. Die vom System vor der Decarboxylierung freigelassenen Kohlenwasserstoffe und Fettsäuren werden in die Wachse ausgeschieden, wo sie nicht mehr reaktionsfähig sind.

     

Studies on Hashish I. Isolation & identification of cannabinols and effect of certain factors

Fractionation of the Hashish constituents as well as the isolation of certain constituents on a preparative scale was carried out using several physio-chemical techniquesviz. solvent fractionation, column and thin-layer chromatographic methods. Six constituentsviz. cannabidiolic acid, cannabidiol, cannabinol, tetrahydrocannabinol, cannabichromene and a positive Beam component (cannabidiol isomer) were isolated and identified using chromatographic data and ultraviolet spectrophotometry. Separation of the Hashish constituents was also achieved by gas-liquid chromatography. The effect of certain factorsviz. silica gel, acidity and alkalinity was studied revealing a remarkable change.

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Zusammenfassung Die Trennung von Haschisch Bestandteilen sowie ihre Isolierung durch physikalischchemische Methoden z.B. Lösungsmittel Verteilung, Säulen-und Dünnschicht-Chromatographie wurde untersucht. Sechs Komponenten: Cannabidiolsäure, Cannabidiol, Cannabinol, Tetrahydrocannabinol, Cannabichromene und eine positive Beam Komponente (Cannabidiol isomer) wurden getrennt und durch Chromatographie und UV-Spectrophotometrie nachgewiesen. Die Trennung der Haschisch-Komponenten gelang auch durch GLC. Der Einfluss einiger Faktoren wie Silica Gel, Säure und Alkali wurde studiert.

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Résumé La séparation des constituants du Hashish et l'isolement de certains constituants par une méthode préparative a été effectué utilisant plusieurs techniques physicochimiques viz. séparation au solvent, chromatographie sur colmne et sur couche mince. Six constituants viz. acide cannabidiolic, cannabidiol, cannabinol, tétrahydrocannabinol, cannabichromene et un produit positif au réactif de Beam (isomère du cannabidiol) ont été isolé et identifié selon les résultats obtenus par chromatographie et par spectrophotométrie ultra-violette. La séparation des constituants du Hashish a aussi été effectué par la chromatographie gas liquide. L'effect de certains facteurs viz. le gel de silica, l'acidité et la basicité ont été étudié révélant un changement assez notoire.

     

Die Mikroflora des Ackerbodens in Abhängigkeit von verschiedenen Fruchtfolgen

Zusammenfassung Durch den wiederholten Anbau artgleicher Kulturpflanzen werden im Boden Rückstände angereichert, die die Ausbildung spezifischer Dominanzen innerhalb einer Mikropopulation auslösen können.Die möglichen Populationsverschiebungen werden mit denen verglichen, die nach einer Bodenbearbeitung oder Anwendung von Agrochemikalien auftreten können.Die Beziehungen zwischen der mikrobiellen Aktivität des Bodens und der Entwicklung von Kulturpflanzen werden im Hinblick auf Höhe, Sicherheit und Qualität des Ertrages diskutiert.

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Repeated cropping with the same plant species results in an increase of residues in the soil which may cause the build-up of specific dominances within the micropopulation.The potential shifts in the population are compared with those occurring as a consequence of mechanical treatment as well as after the application of agrochemicals.The relations between the microbial activity of the soil and the development of crop plants are discussed with emphasis on quantity, stability and quality of yields.

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Résumé Plusieurs reprises d'une monoculture provoquent, dans le sol, l'enrichissement de résidus qui peuvent produire la prédominance de certaines espèces microbiennes.Les changements possibles de la population sont comparés avec ceux-là qui peuvent sortir de la culture du sol ou de l'application de certains produits chimiques.Les relations entre l'activité microbienne du sol et le développement des plantes cultivées sont discutées en vue de quantité, qualité et sûreté du rendement.

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Vortrag, gehalten auf der gemeinsamen Tagung der Internationalen Vereinigung zur Erforschung der Qualität von Nahrungspflanzen (CIQ) und der Deutschen Gesellschaft für Qualitätsforschung (Pflanzliche Nahrungsmittel) (DGQ) in Mainz (25.–27. März 1969) am 26.3.1969.     

Biochemical basis of vegetable breeding

Summary The breeding of vegetables on biochemical constituents, important for human nutrition, depends upon certain features which have to be taken into account when successful breeding is intended. This matter is largely discussed. It is very important to point out correct sampling, which preceeds the biochemical determination.The rôle of biochemical constituents, important for human beings (proteins, essential aminoacids, starch, sugar, essential fatty acids, vitamins, minerals etc.) is discussed. Examples are given to show good results on breeding vegetables of high biological value.

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Biochemische Grundlagen der Gemüsezüchtung

Zusammenfassung Bei der Züchtung von Gemüse auf wertgebende biochemische Inhaltsstoffe müssen unbedingt gewisse Voraussetzungen erfüllt werden, die unerläßlich sind und die eingehend erörtert werden. Hauptvoraussetzung ist die Probeentnahme, die der biochemischen Bestimmung vorausgeht.Diskutiert wird dann die Rolle der biochemischen Bestandteile die für die menschliche Ernährung wichtig sind (Eiweiß, essentielle Aminosäuren, Stärke, Zucker, essentielle Fettsäuren, Vitamine, Mineralstoffe usw.). An einzelnen Beispielen werden Züchtungserfolge im Hinblick auf hohen Biologischen Wert dargelegt.

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La base biochimique de la sélection des légumes

Resumé La sélection des légumes sur les constituants chimiques de valeur, ne peut être pratiquée sans prendre certaines précautions, qui sont longuement discutées. Il faut insister notamment sur l'importance capitale de la prise d'échantillons, qui précède la détermination chimique.Le rôle des constituants biochimiques qui ont une importance pour l'alimentation humaine (protéines, aminoacides essentiels, amidon, sucres, huiles essentielles, vitamines, substances minérales, etc.) est décrit dans quelques exemples de sélections réussies de légumes à haute valeur biologique.

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with 2 figs.

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Paper read on the Symposium Biochemical Principles of Food Industry on August 11th, 1961, Vth International Congress of Biochemistry in Moscow, USSR.     

Thin-layer chromatography of vitamin B12 and its analogues

Summary The separation of vitamin B₁₂ from its analogues is difficult because they are chemically closely related to cyanocobalamin.On the grounds of our experiments we suggested a new method for the separation of corphyrins on dry alumina (basic, second degree of activity according toBrockmann). As solvent system the mixture of isobutanol, isopropanol and water (1 : 1 : 1) was used. The separation with good compact spots was obtained of the following corphyrins: cyanocobalamin (vitamin B₁₂), factor B_{12 III}, pseudovitamin B₁₂, factor A, factor B and factor V (nB).A new simple and rapid method for separation of hydroxocobalamin and cyanocobalamin on thin layer of dry alumina (neutral, second degree of activity according toBrockmann) was reported by us. Advantage was taken of the property of hydroxocobalamin to form with NH₄ OH a compound of the cobalichrome type. Under these conditions cyanocobalamin does not change so that both compounds can be easily separated.The best separation was obtained by mixture of isobutanol, isopropanol and water (1.5 : 1 : 1.25) as solvent system (with addition of NH₄ OH until the ph was 8.5).On the grounds of the results from attempts on the separation of cyanocobalamin from its analogues we reported a method for quantitative determination of vitamin B₁₂ in microbial fermentations, commercial preparations, and concentrates. The method involved the precipitation of vitamin B₁₂ and other analogues (accompanying it) as coper-cyanide complexes, the decomposition of complexes with addition of NaCN-solution to obtain the dicyanocomplexes, the separation of cyanocobalamin on thin layer of dry alumina and its colorimetric determination to 361 nm.

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Zusammenfassung Die Trennung des Vitamin B₁₂ und seiner Abkömmlinge ist wegen der großen Ähnlichkeit mit dem Cyanocobalamin schwierig. Basierend auf unsere Experimente schlagen wir eine neue Methode zur Trennung der Corphyrine auf Tonerde (basisches Aluminiumoxid, 2. Aktivitätsgrad nachBrockmann) vor. Als Lösungsmittel wird eine Mischung Isobutanol, Isopropanol und Wasser 1 : 1 : 1 benutzt. Eine Trennung mit scharf begrenzten Flecken der folgenden Corphyrine wurde erhalten: Cyanocobalamin, Faktor B_{12 III}, Pseudovitamin B₁₂, Faktor A, Faktor B und Faktor V (nB).Eine neue, einfache und rasche Methode zur Trennung der Hydroxocobalamine und der Cyanocobalamine auf Dünnschicht mit trockener Tonerde (neutrales Aluminiumoxid, 2. Aktivitätsgrad nachBrockmann) ist von uns beschrieben worden. Man benutzte die Eigenschaft der Hydroxocobalamine, mit NH₄OH eine Verbindung der Gruppe der Cobalichrome zu bilden. In diesem Fall verändert sich das Cyanocobalamin nicht, so daß die zwei Verbindungen leicht getrennt werden können. Die beste Trennung wurde mit der Mischung Isobutanol, Isopropanol und Wasser (1,5 : 1 : 1,25) als Lösungsmittel erhalten (mit Zusatz von NH₄OH, bis pH = 8,5).Auf Grund der Trennungsergebnisse der Cyanocobalamine von verwandten Stoffen wird eine Methode quantitativer Bestimmung des Vitamin B₁₂ in mikrobiellen Gärungen, in Handelspräparaten und in Konzentraten beschrieben. Diese Methode schließt die Fällung des Vitamin B₁₂ und anderer Abkömmlinge als Kupfer-Cyan Komplexe, die Zersetzung der Komplexe durch Zusatz einer Lösung NaCN, um Dicyan-Komplexe zu bekommen, die Trennung der Cyanocobalamine auf Dünnschicht mit trockener Tonerde und deren kolorimetrische Bestimmung bei 361 nm ein.

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Résumé La séparation de la vitamine B₁₂ d'avec ses analogues est difficile du fait de leur grande similitude avec la cyanocobalamine.En nous basant sur nos expériences nous avons suggéré une nouvelle méthode de séparation des corphyrines sur de l'alumine anhydre (alumine basique, du 2ème degré d'activité selonBrockmann). Comme système solvant un mélange isobutanol, isopropanol, eau, (1 : 1 : 1) a été employé. Une séparation avec des tâches bien délimitées des corphyrines suivantes fut obtenue: cyanocobalamine (vitamine B₁₂), facteur B_{12 III}, pseudovitamine B₁₂, facteur A, facteur B et facteur V (nB).Une nouvelle méthode, simple et rapide, de séparation d'hydroxocobalamine et de cyanocobalamine sur couche mince d'alumine anhydre (alumine neutre, du 2e degré d'activité selonBrockmann) fut décrite par nous. On a utilisé la propriété de l'hydroxocobalamine de former avec le NH₄ OH un composé appartenant au type des cobalichrome. Dans ces conidtions la cyanocobalamine ne subit pas de modifications, de sorte que les deux composés peuvent être facilement séparés. La meilleure séparation fut obtenue à l'aide du mélange isobutanol, isopropanol, et eau (1,5 : 1 : 1,25) comme système solvant (avec addition de NH₄ OH jusqu'à pH 8,5).Sur la base des résultats des essais de séparation de la cyanocobalamine d'avec ses analogues on décrit une méthode pour la détermination quantitative de la vitamine B₁₂ dans les fermentations microbiennes, les préparations commerciales, et les concentrés. La méthode implique la précipitation de la vitamine B₁₂ et d'autres analogues l'accompagnant, sous forme de complexes cuivre-cyanure, la décomposition des complexes par l'addition d'une solution de Na CN afin d'obtenir des di-cyano-complexes, la séparation de la cyanocobalamine sur couche mince d'alumine anhydre et sa détermination colorimétrique à 361 nm.

     

The analysis by TLC of the amino acids of protein hydrolysates and of biological fluids

Summary The degree of sensitivity and of resolution of amino acids which is possible with TLC is much higher than with paper chromatography. This makes TLC on cellulose powder an ideal system for the analysis of protein hydrolysates and biological fluids, particularly where expense prohibits the use of the more elaborate automatic ion-exchange analysers. Using a new pair of solvents and a thin layer of cellulose,Heathcote &Jones were able to separate unambiguously some 23 amino acids chosen for their likelihood to appear in such fluids. The technique is capable of resolving difficult pairs of amino acids such as leucine/isoleucine, valine/methionine and glycine/serine in under 6 hours. Some of the practical considerations and applications of the technique will be discussed.

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Zusammenfassung Im Vergleich mit der Papierchromatographie sind der Bestimmungs-und Empfindlichkeitsgrad, die mit der DC erreicht werden, wesentlich höher. Die DC auf Zellulosepulver ist aus diesem Grunde ein ideales Analysenverfahren für Proteinhydrolysate und biologische Flüssigkeiten, insbesondere in Fällen, wo die hohen Kosten die Anwendung der sehr vervollkommneten, automatischen Analysatoren mittels Ionenaustausch verhindern. Mit Hilfe neuer Lösungsmittel und einer Dünnschicht von Zellulose konntenHeathcote &Jones mit Präzision einige 23 Aminosäuren trennen, die in solchen Flüssigkeiten vorkommen. Diese Technik erlaubt den Nachweis von schwierigen Aminosäure — Paaren wie z.B. Leucin/Isoleucin, Valin/Methionin und Glycin/Serin in weniger als 6 Stunden. Einige praktische Erwägungen und Anwendungen dieses Verfahrens werden diskutiert.

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Résumé Le degré de sensibilité analytique et de résolution des amino acides qu'il est possible d'obtenir à l'aide de la CCM est beaucoup plus élevé qu'avec la chromatographie sur papier. Cela fait de la CCM sur poudre de cellulose un système idéal pour l'analyse des hydrolysats de protéines et des liquides biologiques, en particulier là où le coût élevé interdit l'emploi des analyseurs automatique par échange d'ions très développés. A l'aide d'un nouveau système de solvants et une couche mince de cellulose,Heathcote &Jones ont pu séparer d'une façon précise, quelques 23 amino acides sélectionnés selon la probabilité de leur apparition dans de tels liquides. Cette technique permet la résolution de couples difficiles d'amino acides tels que leucine/isoleucine, valine/methionine, et glycine/serine, en moins de 6 heures. Quelques considérations pratiques et quelques applications pratiques de cette technique seront discutées.

     

Etude far chromatographie sur couche mince des produits du rancissement der corps gras

Résumé Le rancissement autoxydatif des corps gras alimentaires qui altère profondément leurs qualités gustatives, conduit à la formation de petites quantités de mélanges complexes constitués essentiellement de dérivés carbonylés volatiles et d'acides à bas poids moléculaire. En étudiant les produits d'oxydation de l'acide oléique, les auteurs ont identifié les premiers sous forme de leurs di-nitro-phényl-hydrazones et les seconds sous forme de leurs dérivés hydroxamiques par diverses techniques de chromatographie sur couche mince.Les résultats obtenus ont permis de confirmer une hypothèse précédemment émise par les auteurs sur le mécanisme de l'altération des chaines grasses par autoxydation, ainsi que sur la nature de diverses impuretés susceptibles de se former.

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Summary The autoxidative rancidity of food fats which brings deep alterations to their gustatory qualities leads to the formation of small quantities of complex mixtures composed essentially of volatile carbonyl derivatives and low molecular weight acids.In studying the products of oxidation of oleic acid the authors have identified the first as their di-nitrophenyl hydrazones, and the seconds as their hydroxamic derivatives, by means of various thinlayer chromatographic techniques.The obtained results have enabled the authors to confirm an hypothesis recently voiced by them concerning the mechanism of autoxidative alteration of fatty chains as well as concerning the nature of the various impurities that may be formed.

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Zusammenfassung Das autoxydierende Ranzigwerden der Nahrungsmittelfette, das ihre geschmacklichen Qualitäten weitgehend mindert, führt zur Bildung kleiner Mengen komplexer Gemische, die im wesentlichen aus flüchtigen Carbonyl-Abkömmlingen und niedermolekularen Säuren bestehen. Bei der Untersuchung der Oxydationsprodukte der Ölsäure stellten die Autoren die ersten in Form ihrer Di-nitrophenyl-hydrazone, die letzteren in Form ihrer Hydroxamate mittels verschiedener DC-Techniken fest.Die Ergebnisse bestätigten eine kürzlich von den Autoren entwickelte Hypothese betreffend den Mechanismus des Abbaues der Fett-Ketten durch Autoxydation und die Natur der verschiedenen sich bildenden Verunreinigungen.

     

L'utilisation de la chromatographie sur couches minces de cellulose pour l'isolement quantitatif des anthocyanes diglucosides presentes a faible teneur dans les jus de raisin et les vins,en vue de leur dosage

Résumé La différenciation entre vins de cépages hybrides et vins de cépages deVitis vinifera (cépages européens) présente une grande importance:- Les vins qui proviennent, en totalité ou partiellement, de cépages hybrides n'ont droit à aucune appellation et en tant que vins de consommation courante ils ne peuvent pas être exportés vers l'Allemagne.Les méthodes de différenciation des vins rouges de cépages hybrides de ceux des cépages deVitis vinifera sont fondées sur la présence exclusive d'anthocyanesdiglucosides parmi les colorants rouges de la plupart des vins de cépages hybrides:- La présence de diglucosides indique donc l'origine hybride, même partielle.Jusqu'à présent les techniques utilisées étaient fondées sur le repérage visuel d'une de ces anthocyanes diglucosides, le diglucoside du Malvidol ou Malvoside, qui tout en étant la plus répandue présente la particularité de donner sur le papier chromatographique une tache fluorescente en rose à la lumière ultra-violette.Mais, du fait de l'existence d'artéfacts, cette détection visuelle conduit souvent à des conclusions erronées et, de plus, pour de faibles teneurs diglucosidiques, à des résultats qui varient selon l'observateur.De ce fait est apparue la nécessité de mettre au point une méthode d'isolement convenable et de dosage suffisamment précis de l'ensemble des anthocyanes diglucosides d'un vin ou d'un jus de raisin. Ce problème vient d'être résolu par la Station Centrale de Technologie des Produits Végétaux (I.N.R.A.) de Narbonne.La séparation des diglucosides anthocyaniques est obtenue commodément par chromatographie directe, bidimensionnelle, sur couche mince de cellulose. Ces diglucosides sont ensuite isolés par grattage et élution complète par l'eau. Il suffit ensuite de les doser par spectrophotométrie.L'isolement et le dosage des diglucosides sont possibles même si la teneur de ces colorants n'est que de quelques milligrammes par litre (exprimés en malvoside).Signalons que les vins rouges de l'année, issus des cépages hybrides courants accusent une teneur en anthocyanes diglucosides généralement supérieure à 1000 mg/l, alors que dans les vins deVitis vinifera, qui ont été étudiés à Narbonne par cette méthode, les diglucosides sont soit absents soit présents à l'ðat de traces inférieures à 5 mg/l.L'utilisation de la chromatographie sur couche mince de cellulose pour la séparation donne à cette méthode l'avantage d'être utilisable dans le cas des jus et des moûts également.

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Summary The differentiation between wines from hybrid varieties and wines from varieties belonging toVitis vinifera (european varieties) is of a great importance:- wines coming, totally or partially, form hybrid stock are not entitled to any denomination, and as wines of current use can not be exported to Germany.The methods of differentiation of red wines from hybrid stock from those fromVitis vinifera stock are based on the exclusive presence of diglucoside anthocyans among the colouring material of most wines coming from hybrid varieties:the presence of diglucosides indicates then a hybrid origin, even partially.Until now the techniques in use were based on the visual detection of one of these diglucoside anthocyans, the diglucoside of Malvidol, or Malvoside, which, besides its being the most commonly found, gives a fluorescent spot on chromatographic paper when irradiated by ultra-violet light.But owing to the existence of artefacts, this visual detection leads often to erroneous conclusions, and furthermore, for low diglucoside concentrations, to results varying with the investigator.Thus it became necessary to set up a convenient method for the isolation and for the precise quantitative determination of the whole of diglucoside anthocyans of a wine or grape juice. This problem has just been solved by the Central Station of Technology of Vegetable products (INRA), of Narbonne.The separation of diglucoside anthocyans is easily obtained by the use of direct bidimensional chromatography on a thin-layer of cellulose. These diglucosides are then isolated by scraping and complete elution with water. It is sufficient, after that to determine them by spectrophotometry.The isolation and quantitative determination of diglucosides are possible even when the content of this colouring material is no more than a few milligrams per liter. The precision of the results is ± 2 mg of diglucoside per liter (expressed in malvoside).

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Zusammenfassung Die Differenzierung der Weine von Hybrid- Rebstöcken und der Weine vonVitis vinifera (europäische Varietät) ist von großer Bedeutung: die Weine, welche ganz oder teilweise von Hybrid-Rebstöcken stammen, haben kein Recht auf eine Appellation. Als gewöhnliche Konsumweine können sie nicht nach Deutschland exportiert werden.Die Methoden der Differenzierung der Rotweine von Hybrid-Rebstöcken und aus Reben derVitis vinifera sind auf die ausschließliche Anwesenheit von Anthocyan-Diglucosiden unter roten Farbstoffen der meisten Weine von Hybrid-Rebstöcken gegründet: Die Anwesenheit von Diglucosiden zeigt also auch die teilweise hybridische Herkunft an. Bis jetzt waren die angewandten Techniken auf visuelle Feststellung einer dieser Antocyan-Diglucoside begründet und zwar des Diglucosids des Malvidols oder Malvesids, welches, obwohl sehr verbreitet, die Eigenschaft hat, auf chromatographischem Papier einen fluoreszierenden rosa-roten Fleck unter ultra-violettem Licht zu geben. Wegen des Auftretens von artéfacts jedoch ist diese visuelle Bestimmung oft irreführend und für niedere Diglucosidgehalte gibt sie Ergebnisse, die je nach dem Beobachter abweichen.Aus diesem Grunde ist es notwendig geworden, eine passende Isolierungsmethode zu erarbeiten, welche eine genügend genaue Bestimmung der Gesamtheit der Anthocyan-Diglucoside eines Weines oder Traubensaftes ermöglicht. Diese Aufgabe ist von der Zentrale für Technologie der Pflanzenprodukte (I.N.R.A.) Narbonne, gelöst worden. Die Trennung der Anthocyan-Diglucoside wird bequem mittels direkter, zweidimensionaller Chromatographie auf Cellulose Dünnschicht erhalten. Diese Diglucoside werden durch Abkratzen und vollständige Eluierung isoliert. In der Folge werden sie spektrophotometrisch bestimmt. Die Isolierung und Bestimmung der Diglucoside sind möglich, selbst wenn der Gehalt dieser Farbstoffe nur einige mg/l beträgt. Die Genauigkeit der Ergebnisse ist ± 2 mg Diglucoside je Liter (als Malvosid). Wir bemerken, daß die Rotweine des Jahres, aus gewöhnlichen Hybriden einen Gehalt an Anthocyan-Diglucosiden haben, der im allgemeinen höher als 1000 mg/l liegt, und daß die Weine desVitis vinifera, die in Narbonne untersucht worden sind, mittels dieser Methode keine Diglucoside, oder nur Spuren — weniger als 5 mg/l — aufweisen. Die Anwendung der DC auf Cellulose zur Trennung gibt dieser Methode, den Vorteil, auch für Säfte und Moste brauchbar zu sein.

     

Le metabolisme des lipides au cours de la maturation des pommes

Resume 1. Les principaux lipides neutres, phospholipides et galactolipides de la pulpe des fruits ont été analysés, dans plusieurs variétés. La maturation s'accompagne d'une diminution des galactolipides et du phosphatidylglycérol. L'emploi de divers précurseurs marqués permet d'établir que les biosynthèses de phospholipides sont constantes tout au long de la maturation, tandis que la biosynthèse des lipides neutres augmente dans les fruits mûrs. L'acide linoléique s'accumule dans les cellules de la pulpe. Le rôle de précurseur des autres lipides est mis en évidence pour l'acide phosphatidique.2. La biosynthèse et le renouvellement des lipides ont été suivis, à partir d'acétate –1–¹⁴C précurseur, dans différentes fractions cellulaires de la pulpe: mitochondries, microsomes, surnageant cytoplasmique. Le carbone radioactif s'accumule d'abord dans les lipides des microsomes puis passe dans les autres fractions. L'hypothèse d'un transfert des lipides d'une fraction à l'autre est discutée en comparant les résultats de marquage des fractions cellulaires in vivo et in vitro. Au cours de la maturation, on note un maximum d'activité biosynthétique dans toutes les fractions au moment de la crise climactérique puis une décroîssance de l'activité au cours de la sénescence, plus marquée à 18°C qu'à 6°C.3. Dans la pelure des fruits, croissance et maturation s'accompagnent d'une disparition de l'acide linolénique concommittante de la dégénerescence des chloroplastes. L'activité des lipoxydases est très élevée dans la pelure au cours de la maturation.4. Les cires et la cutine de la cuticule des pommes ont été analysées par diverses techniques chromatographiques et spectrométriques et leur biosynthèse a été suivie à l'aide de précurseurs marqués. La maturation s'accompagne de l'enrichissement des cires en types moléculaires à chaîne relativement courte, notamment en acides gras insaturés. Ces constituants légers des cires ne s'accumulent durablement qu'à basse température (0–4°C).

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1. The main neutral lipids, phospholipids and galactolipids extracted from the pulp of apples of several varieties, have been analyzed. The maturation phase is marked by a decrease in the content of galactolipids and phosphatidyl-glycerol. Several labelled precursors have been used to establish that phospholipid biosyntheses remain constant during the maturation phase while triglyceride biosyntheses increase in ripe fruits. Linoleic acid accumulates in pulp cells. Phosphatidic acid has been shown to represent a direct precursor of other lipids.2. Lipid biosynthesis and turn-over have been foilowed from 1-¹⁴C acetate in various cellular fractions of the pulp: mitochondria, microsomes, cytoplasmic supernatant. The radioactive carbon accumulates first in microsome lipids and passes then into the other fractions. The hypothesis of a transfer of lipids from microsomes to other fractions is discussed by comparing the results of the labelling of cellular fractions in vivo and in vitro. During the maturation phase, one can see an optimal biosynthetic activity in all fractions at the period of the climacteric rise, and then a decrease during the senescence phase, more pronounced at 18°C than at 6°C.3. In apple fruit peels, the growing and maturation periods are marked by the disappearance of linolenic acid, while chloroplasts degenerate. The activity of lipoxidases is high during maturation.4. The waxes and the cutin of apple cuticle have been analyzed by means of various chromatographic and spectrometric methods and the biosynthesis of these substances has been followed from radioactive acetate. The maturation phase is marked by the increase of certain constituents of waxes, namely those with relatively short molecular chains and polyunsaturated fatty acids. Those light wax constituents do accumulate durably only at low temperature (0°C).

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Zusammenfassung 1. Die aus der Pulpe verschiedener Apfelsorten extrahierten hauptsächlichsten neutralen Lipide, Phosphorlipide und Galactolipide wurden analysiert. Die Reifungsphase ist gekennzeichnet durch eine Abnahme des Gehaltes an Galactolipiden und Phosphatidylglycerin. Es wurden verschiedene markierte Vorstufen verwendet, um zu beweisen, dass die Phosphorlipidbiosynthese während der Reifungsphase konstant bleibt, die Triglyceridbiosynthese in reifen Früchten dagegen zunimmt. Die Linolsäure reichert sich in den Zellen der Pulpe an. Es konnte der Beweis erbracht werden, dass die Phosphatidsäure eine direkte Vorstufe für die anderen Lipide darstellt.2. Die Lipidbiosynthese und der Abbau wurden durch 1-¹⁴C Acetat in verschiedenen Zellfraktionen der Pulpe verfolgt: Mitochondrien, Mikrosomen, supernatantes Cytoplasma. Der radioaktive Kohlenstoff reichert sich zunächst in den Lipiden der Mikrosomen an und geht dann in die anderen Fraktionen über. Die Hypothese des Übergangs der Lipide von den Mikrosomen zu den anderen Fraktionen wird durch Vergleiche der Resultate der Markierung der Zellfraktionen in vivo und in vitro diskutiert. Während der Reifungsphase kann man eine optimale Biosyntheseaktivität in allen Fraktionen während der Periode des sich entwickelnden Klimakteriums und dann eine Abnahme während der Alterungsphase, stärker ausgeprägt bei 18°C als bei 6°C, beobachten.3. In Apfelschalen ist die Wachstums- und Reifungsperiode durch ein Verschwinden der Linolensäure gekennzeichnet, während die Chloroplasten degenerieren. Die Aktivität der Lipoxidase ist während der Reifung hoch.4. Wachs und Kutin der Apfelkutikula wurden mittels verschiedener chromatographischer und spektroskopischer Methoden analysiert und die Biosynthese dieser Substanzen wurde durch radioaktives Acetat verfolgt. Die Reifungsphase ist durch eine Zunahme gewisser Bestandteile des Wachses, namentlich solcher mit kurzen Molekülketten und mehrfach ungesättigten Fettsäuren gekennzeichnet. Diese leichten Wachsbestandteile reichern sich dauerhaft nur bei niedrigen Temperaturen (0°C) an.