应用SSR标记技术鉴定登海11号玉米杂交种纯度的研究

以登海11号玉米杂交种及其亲本和9对玉米SSR位点引物为材料,筛选出了适合该杂交种纯度鉴定的SSR位点引物;并对利用幼苗和干种子为材料提取DNA的效果进行了比较,建立了一套利用SSR标记技术进行玉米杂交种纯度鉴定的技术规程.该操作程序简单、快速、对仪器设备要求较低,易于推广.     

利用PCR仪快速提取甜菜基因组DNA

为了寻找一种快速提取甜菜基因组DNA的方法,以甜菜干种子、幼苗、种仁以及甜菜叶片干粉为原料,利用PCR仪结合碱裂解法快速提取甜菜基因组DNA,利用微量分光光度计检测取DNA的浓度,并用甜菜SSR引物对提取的DNA进行扩增。结果表明,在4 种材料中均检测到了DNA,干种子、幼苗、种仁以及叶片干粉中提取的DNA平均浓度分别为432、197、158、448 ng/μL,无论是DNA原液还是稀释到20 ng/μL的工作液,均能在SSR-PCR反应中扩增出清晰的条带。该方法提取甜菜基因组DNA简单、快速,仅需要NaOH和HCl两种药品,提取的DNA完全可以用于SSR-PCR反应,为快速鉴定甜菜品种纯度和真实性提供了技术支持。     

SSR技术在玉米种子纯度鉴定上的应用(下)

(上接第三期第157页) 3.1.4玉米单株幼苗DNA提取方法在玉米种子纯度检测中的实际应用 另取50株农大108幼苗、2株父本黄C幼苗、2株母本X178幼苗,利用本文介绍的快速提取方法提取单株幼苗DNA,进行农大108种子纯度检测,结果见图6.从图6可以看出,农大108父本黄C和母本X178各只有一条带,母本带分子量大,父本带分子量小,而农大108的带型为父母本互补,有两条带,带型清晰,没有缺管现象发生.其中箭头所指的泳道扩增结果只有一条带,与母本X178带型一样,为母本自交苗,是由于制种过程中抽雄不及时或抽雄不彻底导致母本X178自交结实造成的.因此,利用单株幼苗快速提取的DNA完全可以满足利用SSR分子标记技术进行玉米种子纯度鉴定的需要.     

种子纯度和品种真实性鉴定中提取玉米DND方法的比较分析

本文通过比较和分析了SSR分子标记技术的三大类DNA提取方法CTAB法、SDS籽粒快速提取法、快速碱煮法，在种子纯度和品种真实性检验中的效果，发现鉴定玉米品种真实性和种子纯度最理想的DNA提取方法是CTAB小量提取DNA法，对于快速检测的理想DNA提取方法是快速碱煮法。     

茎瘤芥总DNA提取研究

以茎瘤芥种子为材料采用SDS法和以茎瘤芥幼苗叶片为材料采用CTAB法,提取茎瘤芥总DNA.通过琼脂糖凝胶电泳和紫外吸收光谱对提取获得的DNA进行分析.结果表明,以茎瘤芥种子为材料选用SDS法和以茎瘤芥幼苗叶片为材料选用CrAB法提取的总DNA纯度和完整性均较好.其中,后者提取效果较好.     

一种玉米叶片基因组DNA快速提取新方法的初步研究

在玉米分子标记辅助育种工作中,需要对大量群体的个体样本进行分子标记分析,其中DNA的高效快速提取是关键的技术环节。以异硫氰酸胍为主要提取试剂,结合使用组织研磨器(Qiagen Tissuelyser),建立了一种玉米叶片基因组DNA的快速提取新方法。利用此方法提取玉米叶片基因组DNA,具有使用药品少、操作步骤简单、快速、成本低、DNA质量稳定等优点,通常情况下每人每个工作日可以提取300个DNA样品。此DNA提取方法可有效地用于玉米分子标记分析。     

水稻SSR分析快速提取总DNA法

为满足水稻SSR分析需要大规模DNA样品的要求,以水稻幼苗叶片为材料,采用改良的CTAB法提取水稻基因组DNA.经质量和纯度检测结果显示：改进的方法程序简单,药品用量少,省时省力,且提取DNA的OD260/OD280均在1.8～1.9之间,琼脂糖凝胶电泳和PCR扩增条带清晰、无污染、无降解.表明该方法适用于SSR分析的水稻基因组DNA的提取,所得DNA的质量和纯度完全满足试验要求.     

利用SSR标记鉴定桂单22号杂交一代种子纯度的研究

以桂单22号玉米杂交种及其亲本和10对玉米SSR位点引物为材料，筛选出了适合该杂交种纯度鉴定的SSR引物；并对利用嫩芽和干种子为材料提取DNA的效果进行了比较，建立了一套利用SSR标记技术快速，简便进行玉米杂交种纯度鉴定的技术规程。     

一种适用于棉花种子的DNA快速提取方法

对已报道的小麦、玉米等作物基因组DNA快速提取方法进行改良,首次在棉花上进行了尝试。以棉花种子为材料,用SDS法、NaOH法和简化法提取基因组DNA。结果表明,3种方法提取的DNA条带均较为清晰,完整性好,PCR扩增效果明显,结果稳定可靠。但DNA简化提取法整个提取过程操作简单、花费时间少、成本低,能在较短时间内完成大量样品的DNA提取。相比常规的以棉花叶片为材料的DNA提取法,本方法在降低试验成本的同时大大提高了工作效率。     

植物基因组DNA提取试剂盒提取玉米基因组DNA的条件优化

利用DNA提取试剂盒提取玉米基因组DNA,对其操作步骤进行改良优化,从而获得一种快速、简便的提取玉米基因组DNA的方法。在原试剂盒的操作步骤基础上,对实验材料用量、是否加入β-巯基乙醇、裂解时间、洗脱液用量等条件进行了优化,并使用两对引物所提取到的基因组DNA进行扩增,根据扩增效果确定DNA质量。优化后的方法可以在保证基因组DNA质量的前提下节省实验试剂和操作时间。     

芝麻DNA和RNA同步提取方法

高质量的DNA和RNA是分子生物学实验顺利进行的基础。本文首次针对CTAB法提取芝麻DNA和RNA的效果进行了研究,在此基础上改进了提取程序和相关技术参数,总结出一套可同步提取高质量芝麻DNA与RNA的方法。利用该方法提取的DNA及RNA经RAPD、SSR、SRAP、DDRT—PCR、AFLP、cDNA—AFLP等分子试验验证,质量好,符合后续试验的要求。这套方法为顺利开展芝麻分子生物学研究奠定了基础。     

外源DNA直接导入甜玉米自交系后代性状变异

提取糯质玉米DNA利用花粉管通道法导入甜玉米自交系，其后代植株产生了变异，主要表现在株高、穗位高、叶面积等性状上的差异。经三代种植观察，D3代各变异性状趋向稳定。经品质分析，可溶性糖含量基本保持不变，蛋白质，淀粉含量有所提高。从而为今后玉米不同种之间的DNA导入创造新的变异品系，提供可参考的理论依据。     

SSR技术在玉米种子纯度鉴定上的应用(上)

在对玉米种子纯度检测方法进行了广泛的调研与比较后,选定SSR方法进行优化研究,建立了新的玉米单株幼苗DNA提取方法,优化了操作系统,验证了技术的成熟性,筛选出了8对核心引物,用于192个杂交玉米组合的纯度检测工作,探索出了一套玉米种子纯度快速检测新方法.     

玉米单株幼芽DNA快速提取新方法

为了攻克利用DNA指纹技术进行玉米种子纯度鉴定中存在的技术难关,对玉米单株幼芽DNA快速提取方法进行了研究,结果表明：利用新方法提取DNA,不用液氮、不用研磨、不用离心、不用沉淀,不用SDS、不用CTAB、不用氯仿,并且提取的DNA不降解、完全可以满足利用SSR分子标记进行DNA指纹分析的需要。一个人提取100株幼芽(1个检测样品)DNA只需30min左右,1d可以提取2000株幼芽(20个检测样品)的。DNA,为DNA指纹技术在玉米种子纯度及真伪快速鉴定中的广泛应用解决了关键性技术难题。     

转基因玉米深加工产品中DNA提取方法的研究

对转基因玉米深加工产品中DNA的提取技术进行了研究。首先,通过经典CTAB法、CTAB初步改良法、CTAB有效改良法和煮沸法等4种方法提取了玉米片和爆米花中的DNA;其次,用琼脂糖电泳检测法将DNA进行了分离;再次,用紫外可见分光光度法检测出4种方法提取的DNA的纯度。结果表明,4种方法中的CTAB有效改良法提取DNA的完整性、纯度更好。     

利用SSR标记鉴定玉米杂交种纯度技术规程

在对玉米籽粒DNA提取和SSR扩增片段检测方法等研究的基础上,建立了一套利用SSR标记进行玉米杂交种纯度鉴定的技术规程.该规程主要特点为从粉碎干种子提取DNA和利用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离SSR扩增片段,便于对大量种子样品进行分析,对仪器设备要求较低,简单快速,易于推广.     

一种快速鉴定杂交水稻种子纯度的方法

以杂交水稻两优988及其亲本为材料,对96个单株幼苗采取96孔PCR板快提法与CTAB法分别提取DNA,进行纯度鉴定。结果表明,2种方法提取的DNA均能正常进行PCR扩增检测,且用引物RM 583扩增的条带清晰可辨,2种方法提取的DNA扩增出来的带型完全一致。     

利用SSR标记鉴定南校969杂交一代种子纯度

为了建立一套便捷、准确、稳定的玉米种子纯度鉴定方法,本研究以南校969玉米杂种一代及其亲本为材料,对20对均匀分布于玉米染色体上的SSR引物进行筛选,SSR引物phi085适合该品种纯度鉴定。对利用幼嫩胚芽和干种子为材料提取DNA的实验效果进行比较,建立了一套利用SSR标记技术简便高效进行玉米杂种一代纯度鉴定的技术体系。研究结果证明,利用玉米幼嫩胚芽和干种子胚提取DNA,通过一对SSR引物扩增和变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,可以方便地进行玉米杂交种纯度鉴定。     

玉米叶绿素含量测定方法研究

以玉米幼苗绿叶为试材，研究了6种叶绿素提取液的吸收光谱和提取效率及低温冷冻对叶绿素提取的影响，结果表明：6种叶绿素提取液的吸收光谱基本相似，可以沿用Arnon法的计算公式进行叶绿素含量的测定；室温下，浸提法要优于研磨法，混合液浸提叶绿素比单独用丙酮或乙醇浸提要快，其中丙酮乙醇（水）配伍提取速度较快而稳定，是最佳的叶绿素提取方法。叶片冷冻后快速浸提确实能加速叶绿素提取速度，但叶绿素易受光热破坏，故应注意遮光。     

一种适于SNP芯片分型的玉米种皮组织DNA提取方法

以京科968、郑单958两套三联体样品为材料,分别采用CTAB和改良CTAB法提取叶片和杂交种种皮的DNA,利用maize SNP384芯片(包括384个SNP位点)进行DNA指纹分析。结果显示:玉米叶片和种皮提取DNA获得基因型数据在成功率、数据质量上一致,均可获得较好的基因型数据;通过将杂交种种皮DNA与母本叶片DNA基因型数据的比较分析,三联体样品亲子关系分析,显示种皮DNA基因型能够代表杂交种母本DNA指纹。因此玉米种皮提取DNA结合SNP芯片检测技术能够在品种权保护和品种鉴定中发挥一定作用。