ELISA试剂盒在奶牛早期妊娠检测中的应用

准确、快速、操作便捷的奶牛早期妊娠诊断技术是规模化奶牛场提高繁殖效率和养殖经济效益的重要手段。本试验通过采用ELISA试剂盒(牛快速可视孕检试剂盒),在2016年3月~2017年2月期间,对北京市房山区某规模化牛场的荷斯坦奶牛的168头份血样进行检测,并将检测结果与55~60d的直肠检查结果进行比较。结果表明,不同胎次奶牛的空怀检测准确率为97.68%~98.52%,怀孕检测准确率为98.51%~98.83%。ELISA检测作为奶牛早期妊娠诊断的措施,对规模化牛场具有重大的意义。     

营养因素对奶牛繁殖效率的影响

奶牛的繁殖性能受到遗传、营养、环境和管理等诸多因素的影响,但随着现代育种水平的提高和环境的改善,日粮营养已成为提高奶牛繁殖繁殖效率关键因素。奶牛繁殖效率的高低直接影响奶牛的产奶量,影响奶牛场的经济效益,关乎一个奶牛场的生存和发展。而影响奶牛繁殖效率的营养因素很多,如能量、蛋白、维生素、必须脂肪酸、矿物质及日粮中的毒素等,对奶牛的繁殖效率影响很大,在日常生产管理中应该加强调控。     

4种ELISA试剂盒检测禽白血病病毒效率比较

对采集鸡蛋清、泄殖腔肛拭子以及蛋清或泄殖腔肛拭子检测阳性的鸡只之血清接种DF-1细胞的上清液,分别采用A、B、C、D 4种ELISA试剂盒进行ALV-P27抗原的3次试验检测。结果显示,A试剂盒的蛋清和病毒分离的敏感度最高,B试剂盒对肛拭敏感性最高。A试剂盒的3次试验检测的符合率都在87%以上,并且较稳定,结果可信度高;C试剂盒的符合率在79%以上,相对稳定;B和D试剂盒的符合率都不稳定。     

ELISA法孕检在提升奶牛繁殖效率方面的应用

奶牛的繁殖效率是衡量养殖水平高低的重要标准。提高配种受孕率、缩短胎间距是提升繁殖效率的具体方法。笔者采用ELISA试验,定期对配种奶牛进行孕检,及早发现未受孕奶牛并进行适当干预,以达到减少空怀期,缩短胎间距的目的。     

影响奶牛产后繁殖效率的因素

除了产犊间隔、产犊季节、品种、年龄和胎次等因素外,分娩前后奶牛的营养状况、泌乳早期奶产量、胎儿状态、围产期和产后疾病,程度不同地影响母牛产后繁殖效率。     

国内外克伦特罗ELISA检测试剂盒评价

根据B/B0-50%抑制浓度、检测范围、标准溶液浓度梯度、板内变异、板间变异、样品添加检验、实际样品检验等方面的比较结果对两种克伦特罗ELISA检测试剂盒(A: 中国兽医药品监察所研制, B: 德国 r-Biopharm公司研制)进行评价。结果表明,试剂盒A的50%抑制浓度低于1.0 ng/mL; 检测范围在0.10~3.0 ng/mL之间;标准溶液浓度梯度中包括1.0 ng/mL这一限定值;板内变异系数小于13.7%,板间变异系数小于8.8%;样品回收率在70%~110%之间;实际样品检验和试剂盒B检样的阳性符合率为95.5%。试验证明,试剂盒A与试剂盒B的水平相当。     

不同季节及气候区对奶牛繁殖效率的影响

为了探讨我国不同季节和气候区奶牛受热应激影响的严重程度,本文采用一般线性模型,基于一牧云系统对27个具有代表性的大中型牧场(牧场规模1 000头)2015年和2016年各月份受胎率及21d怀孕率进行了评估。结果显示:半干旱区的牧场奶牛受胎率(0.497±0.1141)显著高于干旱区(0.4578±0.1308)和半湿润区(0.3905±0.099),干旱区域的牧场奶牛受胎率显著高于半湿润区(P0.05)。全年8月份受胎率最低(0.3830±0.0204),11月份受胎率最高(0.4810±0.0138);8月与7月、9月受胎率差异不显著,但显著低于其他月份的受胎率(P0.05)。三个气候区之间奶牛的繁殖效率受热应激影响持续时间和强度也有所差异,繁殖效率受奶牛热应激的影响在半湿润区大于干旱区,且主要应对阶段在7～9月份,而半干旱区繁殖效率受奶牛热应激影响较小,但热应激效应可能持续到10月份,处在不同气候区域的牧场需要结合牧场实际情况提前采取措施预防热应激。     

克仑特罗CLEIA试剂盒与ELISA试剂盒的检测效果比较

经克仑特罗CLEIA试剂盒与ELISA试剂盒检测效果比较。结果表明,CLEIA试剂盒检测时间为33 min,而ELISA试剂盒则需要50 min,采用CLEIA试剂盒方法检测比ELISA试剂盒方法更加节省时间;CLEIA试剂盒IC50为40 ng/L,对猪尿和猪肉的最低检测限分别为20.1 ng/L和90.7 ng/kg,而ELISA试剂盒IC50则为125.2 ng/L,对猪尿和猪肉的最低检测限分别为23.5 ng/L和99.3 ng/kg,CLEIA试剂盒方法检测灵敏度高于ELISA试剂盒方法。     

奶牛早期妊娠诊断及妊娠相关糖蛋白(PAG)ELISA检测技术进展

奶牛配种后,及时且准确了解奶牛的妊娠状况至关重要。奶牛早期妊娠诊断可显著缩短平均育种间隔,提高奶牛养殖效率。随着早期妊娠诊断技术不断发展,检测牛妊娠相关糖蛋白(PAG)逐渐被人们重视,尤其是酶联免疫吸附试验(ELISA)得到更多的开发与利用。目前国外已有PAG ELISA牛妊娠检测试剂盒用于检测怀孕早期PAGs,该方法快速、准确、灵敏,而国内现存的试纸条准确率低。本文综述了传统的奶牛早期妊娠诊断方法和PAG ELISA方法的发展现状,对ELISA检测方法在动物繁殖领域的应用进行展望。     

用ELISA试剂盒检测分析的注意事项

正随着我县畜产品安全检验室的建立和完善,基层检验人员通过不断的理论学习并在实际操作中不断摸索经验,检验水平不断提高,本人也在工作之余总结了ELISA试剂盒在"瘦肉精"检测分析操作中几个关键环节的应注意的问题,现归纳如下:1连续加液环节的关键问题1.1加液环节建议"吸二打一"方式加酶标工作液、抗体工作液洗板、底物及终止液等环节,属于连续加液操作,建议采用"吸二打一"的方式,"吸二打     

雌二醇残留ELISA检测试剂盒的研制

采用包被单克隆抗体直接竞争ELISA法研制一种检测食品中雌二醇残留的ELISA试剂盒。将不同浓度的雌二醇添加到鸡肉样品中,用制备的试剂盒检测雌二醇残留,结果样品的加标回收率在73.1%～102.7%之间,变异系数<20%。对试剂盒的灵敏度、特异性、精密度、准确度和有效期进行测定,结果表明:研制的试剂盒最低检出限为0.5μg/L;在4℃条件下试剂盒有效期可达6个月。用ELISA试剂盒检测雌二醇残留可批量分析样品,具有快速、简便、灵敏、经济的特点,可广泛应用于食品中雌二醇的监测。     

能量、蛋白质及维生素对奶牛繁殖效率的影响

1能量奶牛从出生到周而复始连续不断产犊和产奶,能量因素起着至关重要的影响。依据泌乳阶段的不同,成母牛的体膘应始终维持在2.0~3.5。低于2.0会致繁殖功能受损,延滞产后发情和配种,情期受胎率降低9%以上;高于3.5,则会与过肥妊娠育成牛相似,造成难产增多和分娩后代谢障碍。     

阿莫西林残留ELISA检测试剂盒质量验证

为了对用于检测牛奶中阿莫西林残留的酶联免疫吸附试验(ELISA)检测试剂盒进行质量验证,试验采用不同梯度浓度的方法进行研究。结果表明:阿莫西林标准品浓度在0.5~13.5μg/L范围内具有较好线性关系,50%竞争抑制浓度为2.0μg/L,试剂盒对牛奶中阿莫西林的最低检测限为4.6μg/L。牛奶中分别添加5.0,10.0μg/L的阿莫西林标准品,回收率在72.2%~108.7%之间,批内变异系数小于8.9%,批间变异系数小于11.9%;试剂盒可在37℃条件下保存7 d,可同时检测牛奶中阿莫西林、青霉素、氨苄西林、萘夫西林等药物的残留总量。与仪器方法进行实际样品检测相比,ELISA方法检测结果具有良好的可信度。     

三种氯霉素ELISA检测试剂盒评价

本试验选择三种氯霉素检测试剂盒(分别产于美国(A)、英国(B)和德国(G))及不同的前处理方法对牛奶及鸡肝组织中的氯霉素残留进行检测。从B／Bo-50％抑制浓度、检测范围、标准溶液浓度梯度、板内变异、板间变异、样品添加试验、实际样品检测等方面对三种试剂盒及前处理方法进行对比试验，结果表明试剂盒A、B、G对缓冲液配制的药物标准液的50％抑制浓度均低于1ng／mL；三种试剂盒的检测范围分别为0．1—2．0ng／mL(A)，0．14—21．0ng／mL(B)，0．05—4．05ng／mL(G)；板内变异系数均小于11．3％，板间变异系数均小于17．4％；样品回收率在70％-120％之间。     

猪口蹄疫ELISA诊断试剂盒质量检测

利用参考血清,按试剂盒标明的使用方法,对上海优耐特生物医药有限公司提供的3批猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体和3批猪口蹄疫病毒NS非结构蛋白抗体ELISA诊断试剂盒的敏感性和特异性分别进行了检测.结果表明,2种试剂盒的敏感性和特异性均符合标准规定.     

反刍动物口蹄疫ELISA诊断试剂盒质量检测

利用参考血清,按试剂盒标明的使用方法,对上海优耐特生物医药有限公司提供的3批反刍动物口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体和3批反刍动物口蹄疫病毒NS非结构蛋白抗体ELISA诊断试剂盒的敏感性和特异性分别进行检测.结果表明,2种试剂盒的敏感性和特异性均符合相关标准的规定.     

用ELISA进行奶牛发情检查和早孕诊断

奶牛繁殖率高是牧场获得最佳经济效益的决定因素之一,因为产奶高峰通常是在产后21—90天获得的。繁殖率低,就会降低母牛的产犊胎数,影响奶牛生产性能的发挥。如要获得高的繁殖率,就必需了解奶牛的繁殖状况,对奶牛进行发情检查,以便及时配种;配种后还要进行早孕诊断,以便尽早挑出空怀牛。以往人们进行发情检查多采用肉眼观察,妊娠诊断多采用直肠检查的方法。以上方法虽然简便易行,但由于主观性强,加之劳动量大,影响了观察结果,妊娠与否也只能在配种后40多天才能检出。鲜奶中孕酮水平在母牛的发情期极低,以后5—6天逐渐上升,到发情周期的第12天达到相当高水平。如果母牛在前一个发情期配种受孕,孕酮将保持在较高状态以维持妊娠;如果未妊,     

不同ELISA试剂盒检测ALV-A的效果比较

为了比较3种ALV p27抗原ELISA试剂盒对外源性ALV检测效果的差异,本研究将1株滴度为4.64×10~4TCID_(50)/mL的ALV-A毒株GD-13分别以10~0、10~(-1)、10~(-2)、10~(-3)进行倍比稀释(每个稀释度病毒接种含量分别为2.32×10~3TCID_(50)、2.32×10~2TCID_(50)、2.32×10~1TCID_(50)、2.32TCID_(50))接种于24孔板的含10%FBS DF-1细胞悬液中,待细胞长满后换为1%FBS维持液,从更换维持液后第3天开始至第9天每天取细胞上清分别同时用3种不同的ELISA试剂盒(A、B、C)进行检测。结果显示,当病毒接种含量为2.32×10~3TCID_(50)时,A、B试剂盒最早可在换液后第3天检出病毒p27抗原阳性,C试剂盒最早在第4天才可以检出病毒阳性,检测阳性率均为100%(5/5)。当病毒接种含量为2.32×10~2TCID_(50)时,使用A试剂盒在接种后第6天能够检出,检测阳性率为80%(4/5);使用B试剂盒最早在接种后第5天可检测出,检测阳性率为20%(1/5);使用C试剂盒直到第9天才能检测出病毒,而且检测阳性率为20%(1/5)。当病毒接种含量为2.32×10~1TCID_(50)和2.32TCID_(50)时,使用A、B和C试剂盒均检测不出病毒。本研究结果表明,对于ALV-A的检测,无论是在检出时间还是检出率上B试剂盒都优于A、C试剂盒,提示不同商品化试剂盒的灵敏度存在一定的差异。本研究可为禽白血病病原学和净化检测提供参考。     

新城疫间接ELISA抗体检测试剂盒的研究

利用新城疫Clone30株病毒研制了检测新城疫抗体的ELISA试剂盒。抗原最佳包被浓度为1．086μg／ml，被检血清最佳稀释度为1：100，酶标结合物最佳工作浓度1：800，血清样品阴阳性临界值为0．34。本试剂盒和HIPRA的ND试剂盒检测64份血清相比较，结果表明本试剂盒的特异性和敏感性分别为90％和93．2％。试剂盒保存期试验结果表明，试剂盒可保存3个月。