环丙沙星人工抗原的合成与鉴定

采用碳二亚胺法将半抗原环丙沙星与卵清蛋白和牛血清白蛋白进行偶联。采用非变性凝胶电泳法和紫外分光光度法对偶联物中环丙沙星与载体蛋白的分子结合比进行分析。紫外分光光度法表明，环丙沙星与卵清蛋白和牛血清白蛋白的分子结合比分剐为6：1和13：1。非变性凝胶电泳显示，即使只有6个环丙沙星分子与栽体蛋白偶联，偶联物在凝胶中的迁移轨迹与栽体蛋白和偶联剂处理的载体蛋白对照样品均有明显不同。结果表明，非变性凝胶电泳法和紫外分光光度法可用于环丙沙星与卵清蛋白和牛血清白蛋白分子结合比的定性分析和定量分析。     

洛美沙星人工抗原的合成及鉴定

通过化学方法制备了洛美沙星的免疫抗原和包被抗原;分别采用碳二亚胺（EDC）法和氯甲酸乙丁酯法把洛美沙星与BSA进行偶联制备了人工免疫抗原LOM-BSA,EDC法制备了包被抗原LOM-OVA,经非变性PAGE、紫外分光光度法测定了人工合成抗原的偶联比,EDC法和氯甲酸乙丁酯法制得的LOM-BSA两分子结合比率分别为4∶1和11∶1,LOM-OVA中两分子结合比率为12∶1。这为洛美沙星单克隆抗体的制备奠定了基础。     

盐酸四环素人工抗原的合成及鉴定

本试验旨在合成盐酸四环素人工抗原,为其单克隆抗体的制备奠定试验基础。将盐酸四环素(TCH)发生霍夫曼降解和重氮化反应生成重氮盐,再与蛋白质载体(BSA,OVA)偶联生成免疫原和包被原,对偶联产物采用三氯化铁及紫外扫描法鉴定偶联成功,且免疫原和包被原的摩尔结合比分别约为3.4∶1和4.2∶1。用免疫原免疫BALB/c小鼠,用间接ELISA检测抗体效价,采用竞争ELISA法测IC50,获得了效价为1∶51200I、C50为16.91 ng/mL的多克隆抗体,最终证明人工抗原制备成功。     

苯乙醇胺A人工抗原的合成及鉴定

采用重氮化法将苯乙醇胺A分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联,制备免疫抗原苯乙醇胺A(PEAA)-BSA和检测抗原PEAA-OVA。经紫外扫描法和SDS-PAGE鉴定表明偶联成功,偶联比分别为15∶1、17.4∶1。用PEAA-BSA免疫BALB/c小鼠,采用间接ELISA法检测抗体效价,采用竞争ELISA法检测IC50值,获得了效价4.1×105以上、IC50值为0.2μg/L的多抗血清,证明合成了具有免疫原性的人工免疫原。     

庆大霉素人工抗原的合成与鉴定

庆大霉素（gentamicin,GM）属于氨基糖甙类抗生素,抗菌谱较广,对革兰阳性菌和革兰阴性菌都有作用,对革兰阴性菌作用强。在兽医临床和畜禽的养殖生产中,常用于治疗动物的消化道疾病和呼吸道疾病。随着庆大霉素在畜牧业中的应用越来越广泛,其在动物体内的残留问题也日益严重。研究旨在为GM残留免疫学检测方法的建立奠定基础。     

沙丁胺醇人工抗原的合成与鉴定

通过沙丁胺醇(SAL)与琥珀酸酐的醇解反应制备SAL的琥珀酸衍生物,用EDC法将SAL琥珀酸衍生物偶联于载体蛋白BSA和OVA,合成免疫原BSA-SAL和包被原OVA-SAL,用紫外扫描(UV)、SDS-PAGE进行鉴定;用BSA-SAL免疫BALB/C小鼠,间接ELISA测定多抗上清(pAb)效价,阻断ELISA鉴定其敏感性,交叉反应试验鉴定其特异性。结果表明,BSA-SAL的UV与BSA、SAL的相比发生了改变;通过UV分析,SAL-HS与BSA的分子结合比约为7.2∶1;通过系列ELISA鉴定,获得了高价、敏感、特异的pAb,为SAL残留免疫学检测方法的建立奠定了基础。     

新霉素人工抗原的合成与鉴定

用水溶性碳化二亚胺(EDC)法将新霉素(NEO)偶联于栽体蛋白牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(O-vA),合成免疫原BSA-NEO和包被原OVA-NEO,用红外扫描(IR)、SDS-PAGE法进行鉴定;用BSA-NEO免疫BALB/C小鼠,问接ELISA测定多抗上清(pAb)效价,阻断ELISA鉴定其敏感性,交叉反应试验鉴定其特异性.结果表明,BSA-NEO的红外光谱与BSA相比发生了改变,BSA-NEO的电泳条带与BSA的相比出现了明显的拖尾现象;通过系列ELISA鉴定,获得了高价、敏感、特异的pAb,为NEO残留免疫学检测方法的建立奠定了基础.     

氟苯尼考人工抗原的合成与鉴定

氟苯尼考(FF)为新一代氯霉素的替代品,以其广谱、高效、吸收迅速、分布广泛、安全、动物专用等特点,在国内外畜牧和水产业迅速获得广泛应用.但是如果使用不当或滥用,则会导致药物残留以及耐药性问题的出现,危害人类健康.为此,许多国家已经建立了其最高残留限量.为保障我国人民的消费安全,提高我国动物源食品在国际市场上的贸易,必须建立适合FF的残留检测方法[1].     

达氟沙星人工抗原的合成与鉴定

采用碳二亚胺偶联法将达氟沙星分别与牛血清白蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)载体蛋白偶联,制备达氟沙星人工抗原DFLX-BSA和DFLX-OVA,并用FeCl3显色反应、紫外扫描和酶联免疫吸附试验对制备的人工抗原进行鉴定.结果表明:DFLX与BSA和OVA的偶联比为14: 1和16: 1时可成功地制备达氟沙星人工抗原.     

二氟沙星人工抗原的合成与鉴定

通过化学方法合成了二氟沙星人工免疫原和包被原；采用碳二亚胺法将半抗原二氟沙星与载体蛋白BSA连接制备人工免疫原；并采用氯甲酸异丁酯法将二氟沙星与载体蛋白OVA连接制备人工包被原，经FeCl3显色反应、紫外扫描分析和动物免疫试验证实人工抗原合成成功。这对抗二氟沙星单克隆抗体的制备具有重要意义。     

莱克多巴胺人工抗原的合成与鉴定

用戊二酸酐将盐酸莱克多巴胺活化成莱克多巴胺-戊二酸酐半醛,用混合酸酐法将莱克多巴胺-戊二酸酐半醛与KLH和BSA偶联,合成免疫原和包被抗原,经核磁共振法和紫外吸收法鉴定,偶联成功.用紫外吸收法测定免疫原和包被抗原的偶联比分别为24：1和2.5：1.用免疫原免疫新西兰白兔,采用间接ELISA法检测抗体效价,采用间接竞争ELISA法检测IC50值,获得了效价为1：6 000以上、IC50值为10 ng/mL的多克隆抗体,证明合成的人工免疫原具有免疫原性.     

人工抗原的鉴定

综述了目前国内外对人工抗原的鉴定方法,即:紫外分光光度法、红外分光光度法、电泳法、质谱法.并分析了各鉴定方法的优缺点,认为质谱法是鉴定人工抗原的最佳方法.     

酸性红73人工抗原的合成与鉴定

为进一步制备酸性红73新型人工抗原,试验采用N,N-羰基二咪唑(CDI)法合成酸性红73的免疫原和包被原,经紫外扫描和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定偶联成功,酸性红73与牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OA)的偶联比分别为9∶1和5∶1。免疫后所得兔源多克隆抗体,采取双向琼脂扩散实验和方阵滴定法确定包被抗原和抗体的最适工作浓度分别为1∶4000、1∶8000。     

多西环素人工抗原的合成与鉴定

建立多西环素人工抗原(Doxycycline,DOX)的合成及鉴定方法。采用戊二醛偶联法将DOX分别与载体牛血清白蛋白(BSA)及卵清蛋白(OVA)偶联制备免疫抗原(DOX-BSA)和包被抗原(DOX-OVA)。经SDS-PAGE电泳法、紫外可见吸收光谱鉴定,证实人工抗原成功合成,偶联比分别为8.6∶1和3.8∶1。结果表明建立了一种新的DOX抗原合成方法,为进一步制备特异性DOX抗体和建立检测食品中DOX的酶联免疫方法奠定了基础。     

多西环素人工抗原的合成与鉴定

将多西环素（doxycycline,DOX）进行化学修饰引入羧基或氨基等活性基团,然后与牛血清白蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）偶联合成人工免疫原DOX—PABA—BSA、DOX—BSA和包被原DOX—PABA—OVA、DOX～OVA,并用紫外吸收（UV）、凝胶电泳（SDS—PAGE）和EUSA方法对人工抗原进行鉴定;将合成的人工抗原DOX—PABA—BSA、DOX—BSA分别免疫BALB／C小鼠,用间接ELISA方法测定多抗（pAb）效价,用竞争ELISA方法鉴定其敏感性,用交叉反应试验鉴定其特异性。结果表明,二个免疫组6只小鼠血清抗体效价均在1：6400以上,DOXpAb对DOX的50％抑制浓度（IC50）在39．79～53．13μg/L,抗血清与四环素类药物交叉反应很低。本实验为建立多西环素ELISA残留免疫学检测方法和并制备多西环素试剂盒奠定了基础。     

类金属砷螯合物人工抗原的合成与鉴定

为了合成砷元素人工免疫抗原及人工鉴定抗原,制备砷的多克隆抗体,建立ELISA快速检测方法,以异硫氰酸苄基乙二胺四乙酸(ITCBE)为螯合剂,将砷与载体蛋白BSA和OVA偶联,制备人工免疫抗原As³⁺-ITCBE-BSA和人工鉴定抗原As³⁺-ITCBE-OVA;经核酸蛋白仪浓度的检测、紫外分光光度计扫描以及SDS-PAGE定性鉴定,用原子荧光光谱法检测抗原中As³⁺的含量。结果显示:合成的As³⁺-ITCBE-BSA和As³⁺-ITCBE-OVA蛋白浓度分别为4. 692和5. 726 mg/mL;紫外扫描最大吸收峰发生偏移,电泳条带对于各自载体蛋白稍微滞后,均显示抗原合成成功; As³⁺的含量分别为0. 254、0. 190 mg/mL,偶合率达到70. 67%和52. 81%。提示:抗原合成成功,可用于重金属砷多克隆抗体的制备。     

呋喃妥因残留代谢物人工抗原的合成与鉴定

利用对醛基苯甲酸对呋喃妥因代谢物1-氨基乙内酰脲(1-Aminohydantoin hydrochloride,AHD)进行衍生化,衍生物1-氨基乙内酰脲-4-羧苯基肟(CPAHD)通过混合酸酐法与牛血清蛋白(bovine serum albumin,BSA)偶联,用紫外扫描(UV)和变性凝胶电泳(SDS-PAGE)对偶联物进行验证。将偶联成功的人工全抗原(CPAHD-BSA)免疫BALB/c小鼠,通过间接酶联免疫吸附法(ELISA)测定小鼠血清抗体效价为1:32 000。用间接竞争ELISA鉴定抗体特性,结果显示:抗体对AHD与对硝基苯甲醛的衍生物(NPAHD)的灵敏度高,IC50为30.63μg/L,特异性好,与CPAHD有部分交叉反应外,与其他3类硝基呋喃类药物及代谢产物无交叉反应(交叉反应率<0.01%)。结果表明,用CPAHD-BSA作免疫原免疫小鼠可诱导产生针对AHD衍生物(NPAHD)的特异性抗体,为进一步制备AHD单克隆抗体和研制快速筛选检测试剂盒奠定了基础。     

沃尼妙林人工抗原的合成与鉴定

沃尼妙林(valnemulin,Val)是新一代截短侧耳素(pleuromutilin)类半合成的动物专用抗生素,属二萜烯类,与泰妙菌素属同一类药物,主要用于猪支原体肺炎、猪痢疾、猪结肠炎和猪回肠炎的治疗[1-3]。现已上市的沃尼妙林原料药为盐酸沃尼妙林,其化学结构式见图1,化学名为[[2-[[(2R)-2-氨基-3-甲基-1-氧代丁基]氨基]-1,1-二甲基乙基]硫基]乙     

磺胺甲恶唑人工抗原的合成与鉴定

为检测磺胺甲恶唑(SMZ)的残留,用重氮化方法将SMZ偶联于载体蛋白BSA和OVA上,合成了免疫抗原BSA-SMZ和包被抗原OVA-SMZ。经紫外扫描、SDS-PAGE电泳鉴定后,免疫BALB/c小鼠,制备多抗血清;利用间接ELISA法测定多抗血清效价,竞争ELISA测定多抗血清的敏感性和特异性。结果表明,所合成的免疫抗原效果较好,6只免疫小鼠多抗血清的效价均大于1∶1.28×104,5号小鼠的多抗血清敏感性最高,半数抑制浓度为47.1ng/mL,与其他磺胺类药物无交叉反应,具备良好的特异性。试验成功合成了SMZ人工抗原,并制得了敏感性高、特异性好的鼠源多抗血清,为SMZ单克隆抗体制备及其免疫学快速检测方法的建立奠定了基础。     

马波沙星人工抗原的合成及其免疫原性的鉴定

合成、鉴定了马波沙星(MBF)人工抗原,为马波沙星单克隆抗体的制备及其免疫学检测方法的建立奠定基础。以牛血清白蛋白(BSA)、鸡卵清蛋白(OVA)为载体蛋白,采用碳二亚胺法分别合成马波沙星免疫抗原(MBF-BSA)和包被抗原(MBF-OVA),并使用紫外分光光度法、SDS-PAGE、ELISA方法鉴定人工抗原合成效果。初步鉴定结果显示,MBF-BSA与MBF-OVA均偶联成功;用免疫抗原MBF-BSA免疫小鼠,经ELISA方法检测,五免后血清中抗体效价可达1∶5.12×105,半数抑制率为90.20 ng/m L。研究表明,马波沙星人工抗原合成成功,其免疫抗原具有良好的免疫原性,免疫小鼠可获得高效价、高特异性多克隆抗体。