高山兀鹫肠道有益菌的分离鉴定与生物学特性研究

高山兀鹫(Gyps himalayensis)作为在青藏高原广泛分布的大型食腐类猛禽,对维持高原生态系统平衡和稳定具有十分重要的意义.长期以来,对于其腐食适应性机制的研究一直备受关注.为了解高山兀鹫肠道有益菌的多样性、耐药性以及抑制腐食病原菌的情况,采集野生高山兀鹫的新鲜粪便进行细菌分离培养、16SrRNA测序、生化鉴...     

健康奶牛生殖道乳酸茵的分离鉴定及生物学特性

通过MRS琼脂培养基厌氧培养技术,从产后7 d~60 d健康母牛子宫分泌物中分离得到7株乳酸菌,经生化试验鉴定2株为短乳杆菌,3株为海氏肠球菌,2株棉子糖肠球菌。生长曲线及产酸性能测定结果显示,所分离到的乳酸菌在培养2 h~4 h进入对数生长期,6 h~16 h进入生长稳定期;乳酸菌培养液在24 h内的pH由5.96~6.24下降为3.71~4.10。试验结果表明,所分离到的乳酸菌生长性能好、菌体密度高、产酸性能强,是一种有潜质的有益菌菌株。     

1株犬副流感病毒的分离鉴定及生物学特性研究

试验旨在分离鉴定犬副流感病毒(canine parainfluenza virus,CPIV),并对其生物学特性进行研究。用Vero细胞接种感染CPIV阳性犬肺脏组织,盲传4代,收集72 h病毒液进行RT-PCR鉴定、电镜观察、血凝试验、热敏性试验、紫外照射试验及病毒一步生长曲线的测定,同时扩增N基因进行序列分析,并构建系统进化树。结果显示,试验成功从出现咳嗽、流鼻涕等呼吸系统疾病症状的病犬肺脏中分离出1株CPIV,命名为CPIV-BJ01;RT-PCR扩增结果发现,在534 bp处有特异性目的条带。病毒电镜观察发现,其超微结构呈圆形、有囊膜、直径在80～200 nm之间;血凝试验显示,病毒在4和37℃均能凝集1%猪红细胞,与报道的CPIV血凝特性一致;病毒对热敏感,长时间高温下病毒毒价会随之下降;紫外照射可使病毒在短时间内对细胞的感染性急剧下降。病毒一步生长曲线测定结果显示,在12～48 h病毒高速增殖,细胞培养液中病毒滴度急剧上升,之后趋于稳定。CPIV N基因序列与19株有代表性的副流感病毒N基因相比,其核苷酸序列同源性为97.1%～99.8%。遗传进化分析表明,CPIV-BJ01与PIV5 1168-1(登录号:KC237064.1)和PIV5 ZJQ 221(登录号:KX100034.1)位于同一分支上,亲缘关系较近。     

1株犬副流感病毒的分离鉴定及生物学特性研究

试验旨在分离鉴定犬副流感病毒(canine parainfluenza virus,CPIV),并对其生物学特性进行研究。用Vero细胞接种感染CPIV阳性犬肺脏组织,盲传4代,收集72 h病毒液进行RT-PCR鉴定、电镜观察、血凝试验、热敏性试验、紫外照射试验及病毒一步生长曲线的测定,同时扩增N基因进行序列分析,并构建系统进化树。结果显示,试验成功从出现咳嗽、流鼻涕等呼吸系统疾病症状的病犬肺脏中分离出1株CPIV,命名为CPIV-BJ01;RT-PCR扩增结果发现,在534 bp处有特异性目的条带。病毒电镜观察发现,其超微结构呈圆形、有囊膜、直径在80～200 nm之间;血凝试验显示,病毒在4和37℃均能凝集1%猪红细胞,与报道的CPIV血凝特性一致;病毒对热敏感,长时间高温下病毒毒价会随之下降;紫外照射可使病毒在短时间内对细胞的感染性急剧下降。病毒一步生长曲线测定结果显示,在12～48 h病毒高速增殖,细胞培养液中病毒滴度急剧上升,之后趋于稳定。CPIV N基因序列与19株有代表性的副流感病毒N基因相比,其核苷酸序列同源性为97.1%～99.8%。遗传进化分析表明,CPIV-BJ01与PIV5 1168-1(登录号:KC237064.1)和PIV5 ZJQ 221(登录号:KX100034.1)位于同一分支上,亲缘关系较近。     

犬源奇异变形杆菌的分离鉴定及生物学特性分析

为了对吉林省长春地区致犬腹泻的奇异变形杆菌进行流行病学调查及药物敏感性检测,试验采用传统细菌鉴定方法及16S rRNA系统发育学分析方法,对2015—2017年间送检的62份疑似患细菌性肠炎犬的腹泻物进行奇异变形杆菌的分离鉴定及遗传进化分析,并对分离菌进行药物敏感性试验及小鼠致病性试验。结果表明:从送检病料中共分离获得12株奇异变形杆菌(分离率为19.35%),革兰氏染色为阴性,理化特性鉴定与奇异变形杆菌的生理特性基本一致;分离菌经16S rRNA基因扩增获得大小的为1 600 bp条带,所测序列与奇异变形杆菌的核苷酸序列同源性在98%以上,12株分离株处于3个独立分株;其中分离菌对兽医临床常用药物整体耐药水平较高,仅有部分菌株对环丙沙星、恩诺沙星、头孢曲松敏感;分离菌CC15031对小鼠的半数致死量(LD_(50))为2.8×10~6 cfu/mL,具有较强的致病性。说明分离得到的奇异变形杆菌具有较强的耐药性和不同程度的致病性,应引起重视。     

乌鸡肠道中一株乳酸菌的分离鉴定及生物学特性研究

本试验采用添加碳酸钙的MRS培养基作为筛选培养基,从乌鸡肠道中筛选乳酸菌,并对分离到的菌种进行16S rDNA基因序列鉴定以及益生性能研究,测定其生长速率、产酸能力、耐酸和耐胆盐性能、抑菌能力及抗生素敏感性。试验结果表明：分离到的溶钙圈较好的菌株N为乳酸菌,分离菌株N产酸能力强,达到对数期的时间短,在低pH、高胆盐浓度时,仍具有较好生长活性。[关键词] 乳酸菌|乌鸡|益生性能     

牦牛源肠道芽孢杆菌的分离、鉴定及生物学特性研究

为分离鉴定牦牛肠道有益菌的菌种资源,采集了西藏牦牛的肠道内容物,从中分离、纯化优势菌种,经16S rDNA序列比对和生化试验鉴定种属,通过革兰染色观察其形态,并进行抗逆性能、黏附能力、溶血活性、体外抑菌能力和药敏特性等生理生化试验鉴定了其菌种特性。结果从牦牛肠道内容物中成功分离纯化获得4株菌株,分别鉴定为枯草芽孢杆菌（XZMN-1）、短小芽孢杆菌（XZMN-2）、贝莱斯芽孢杆菌（XZMN-3）和蜡样芽孢杆菌（XZMN-4）。4株分离菌株均为γ-溶血、不具有生物膜,耐胆盐性、耐酸性强,能在pH值为3.0的培养基中存活;XZMN-3和XZMN-4具有耐高温性,其菌液在80℃下孵育30 min仍能检测到活性。4株菌对大多数抗生素敏感,在不同溶剂中的疏水性相差较大（1.91%～93.15%）,自凝集性在13.29%～60.63%之间;4株菌均对沙门氏菌有抑制作用,XZMN-1和XZMN-2对金黄色葡萄球菌有抑制作用。综上说明,分离纯化的4株芽孢杆菌抗逆性高,黏附性能强,其中XZMN-1对大多数抗生素敏感,可作为开发高活性益生菌饲料添加剂的候选株。     

牛瘤胃乳酸片球菌的分离鉴定与生物学特性研究

为了获得生物学特性良好的乳酸菌,试验利用厌养菌分离技术从成年牛瘤胃中分离出一株牛瘤胃乳酸菌,命名为Y-A-2,并对该菌进行了形态分析、生化试验、16S rRNA序列同源性分析和生物学特性研究。结果表明:Y-A-2菌株为乳酸片球菌,可发酵纤维二糖、水杨苷、菊糖;最适生长温度为26℃,最适生长温度下pH值随着时间的延长逐渐降低,具有一定的耐盐能力,不耐强酸强碱。说明该菌具有良好的生物学活性,有助于牛瘤胃微生态制剂的研制和控制牛瘤胃的微生物发酵进程。     

犬细小病毒的分离鉴定与生物学特性分析

本研究旨在获得华中地区的犬细小病毒分离株并对其基因型分型、生物学特性及致病力进行探讨.从武汉部分宠物医院采集胶体金初检阳性的14份可疑病料,用猫肾细胞(F81)进行病毒分离.根据犬细小病毒2型(CPV-2)保守的VP2,先后设计2对引物,进行PCR扩增.在细胞上对其进行空斑纯化,进行一步法生长曲线测定,并进行电镜观察.最后对这5株病毒都进行动物回归试验.细胞传代结果表明得到5株细小病毒.PCR扩增结果表明获得390和583 bp 2个片段.将2个片段测序的结果与GenBank发布的CPV-2比对,表明所获得的5株病毒中,有4株属于2a型,1株属于2b型.空斑纯化及生长曲线绘制结果表明分离毒株增殖滴度可达105.5PFU·mL-1.电镜观察结果表明,感染细胞的线粒体肿胀.动物试验结果表明犬都能表现不同程度的发病状况,大体解剖发现肠管有坏死、心肌变薄.将病变的心脏制作切片观察,结果表明心肌细胞变性、坏死.本研究结果为进一步研究CPV-2的分子生物学和分子致病机理奠定了基础.     

奶制品中有益菌的分离鉴定

乳酸菌是一类能利用可发酵的糖产生大量乳酸的细菌。这类细菌广泛分布于土壤、植物根茎、湖泊及动物体内。从形态上可以分为球菌和杆菌,为兼性厌氧性细菌,革兰染色均为阳性。目前,对乳酸菌的应用研究,着重于发酵乳制品、食品和医药工业等领域。酸奶是以新鲜牛乳经杀菌,用不同乳酸菌发酵剂制成的乳制品。由于酸奶营养价值较高,并能     

白僵菌菌株的分离鉴定及生物学特性研究

以9株白僵菌菌株为材料,对其进行鉴定并探讨了菌株的生物学特性。结果表明,有2株为卵孢白僵菌,7株为球孢白僵菌;以营养生长量、产孢量、抗紫外线能力和致病力等生物学指标进行综合比较筛选,球孢白僵菌B1为生产白僵蚕的最佳接种菌株。     

丁酸梭菌的分离鉴定及生物学特性研究

试验旨在筛选畜禽可利用的优良菌株。从窖泥筛选出2株丁酸梭菌,经过形态学观察、生理生化试验、分子生物学鉴定及同源性比对确定丁酸梭菌,并比较2株丁酸梭菌进行生物学性能。结果显示,菌株J-1产酸种类及产酸量比菌株J-2多,菌株J-1的丁酸产量是菌株J-2的100倍,为411.7 mg/L;菌株J-1和菌株J-2在活菌率方面无明显差异;菌株J-1芽孢率比菌株J-2高17.16%,为77.64%;菌株J-1淀粉酶活性为19.35 mm,比菌株J-2高1.7倍。研究表明,菌株J-1在产酸种类和含量、活菌率、芽孢率、淀粉酶活性方面表现较好,可作为后续试验菌株。     

腹泻犬肠道分离菌的鉴定及耐药性分析

本试验从9例有腹泻症状的病犬分离菌株并进行16S rDNA鉴定、药敏试验及耐药基因检测,分离得到12株菌株,经鉴定有8株大肠杆菌、3株绿脓杆菌和1株粪肠球菌。药敏试验显示,12株分离菌对临床常用的3大类抗菌药物均产生了耐药性,对氨苄西林、庆大霉素和恩诺沙星耐药率较高。β-内酰胺酶耐药基因bla_(TEM)和bla_(SHV)检出率均为100%;ESBL-抗生素耐药基因bla_(CTX-M-8)的检出率为83.3%。氨基糖苷类耐药基因aac(3)-Ⅱ、aac(6’)-Ib、aacC2检出率分别为100%、66.7%、41.7%。氟喹诺酮类耐药基因qnrS和qepA的检出率分别为83.3%、58.3%。因此,药敏试验与耐药基因检测结果均表明犬腹泻分离菌株对临床常用3大类药物均已产生耐药性,且存在多重耐药现象。     

NDV地方分离株的分离鉴定及生物学特性研究

从发病率为 100％、病死率为 97％的鸡群中分离到一株病毒。该病毒可凝集鸡的红细胞，血凝价为 28～ 10，且此凝集作用可被新城疫标准阳性血清所抑制，证明所分离的病毒为新城疫病毒。经回归试验、 MDT、 EID50、 ICPI等生物学特性研究表明，该病毒为 NDV强毒株，命名为 NL株。     

1株猪源肠道益生菌的分离鉴定及其生物学特性研究

从健康猪肠道中分离出1株对仔猪大肠杆菌病和副伤寒病病原有较强拮抗作用的菌株,命名为W-02,对其进行菌落形态、生理生化特性和16S rDNA系统发育分析,确定该菌株为凝结芽孢杆菌。对该菌株胃肠道耐受特性和安全性进行了研究,结果表明,W-02菌株在人工胃液、人工肠液、猪胆盐和80℃高温表现出很强的耐受能力,急性毒性试验结果表明该菌株为无毒菌株。     

广西猪丹毒杆菌分离鉴定及生物学特性研究

试验收集2013年6月至2014年2月广西南宁、桂林、柳州、玉林、贵港、钦州等6个市送检的疑似猪丹毒发病的材料,用鲜血琼脂平板对病料进行细菌分离,37℃恒温箱培养24~48 h,观察分离细菌的菌落形态,并进行革兰氏染色观察,初步确定其为革兰氏阳性的细小杆菌。为进一步确定分离出的是否为猪丹毒杆菌,试验进一步纯化细菌,提取细菌DNA用16S rRNA随机引物进行扩增,将扩增出来的目的片段连接到p MD18-T载体上,进行克隆、酶切鉴定及序列测定;最终将测序获得16S rRNA序列在NCBI上进行BLAST,结果表明试验最终分离出5株猪丹毒杆菌,为进一步确定分离出来猪丹毒杆菌的生物学特性,试验做了进一步深入研究：药物敏感性试验、小白鼠攻毒试验、耐药基因的检测、免疫攻毒保护性试验。     

鹿源大肠杆菌的分离鉴定及生物学特性

为查明吉林省长春市张二路鹿场致鹿死亡病原菌,对分离出的1株病原菌进行形态学观察、生化鉴定和16SrRNA基因扩增,并用NCBI blast及MEGA5.05进行序列分析。结果显示,从剖检死亡鹿肺脏中分离出的病原菌为大肠杆菌。采用玻片凝集法鉴定其血清型为O102型大肠杆菌,命名为Ed-102。在此基础上,为确定分离株的生物学特性,对分离株完成运动性分析、生物被膜检测、人工感染小鼠试验及药敏试验,结果显示分离株Ed-102可以在LB半固体培养基上形成运动圈,生物被膜形成能力较弱。人工感染小鼠试验显示小鼠感染12 h后开始死亡,剖检小鼠肝脏、肺脏及脾脏有不同程度出血,其对小鼠的LD_(50)为1.20×10~7 CFU/只。药敏试验结果显示分离株Ed-102对氨苄西林、哌拉西林、氨苄西林/舒巴坦、头孢唑林、头孢吡肟、头孢哌酮、头孢噻肟、头孢曲松、头孢他啶、氨曲南、卡那霉素、链霉素、四环素、西诺沙星、萘啶酸及氯霉素高度耐药,仅对于阿米卡星及亚胺培南较为敏感。     

貂源绿脓杆菌的分离鉴定及生物学特性

为了解国内貂出血性肺炎病原绿脓杆菌的生物学特性,2012年从山东省发病的水貂肺内分离得到了22株绿脓杆菌,测定了分离株的生化特性、血清型、基因分型以及抗生素敏感性。结果显示,分离株对阿米卡星、环丙沙星、庆大霉素、头孢他啶敏感率分别为97%、87%、78%、81%,对头孢哌酮中敏率为87%,对多黏菌素B耐药率为68%。22株分离株可以分为G、B2种血清型,比例分别为82%、18%。     

乳酸菌噬菌体的分离及生物学特性鉴定

为了解乳酸菌噬菌体的生物学特性,并为制定乳酸菌发酵生产过程中噬菌体污染的防控措施提供试验数据和参考,本研究通过斑点试验和双层琼脂平板法,以干酪乳杆菌（L. casei） ATCC 393、戊糖乳杆菌（L. pentosus） KLDS 1.0413、短小乳杆菌（L. brevis） ATCC 367为指示菌从乳制品、泡菜样品中分离乳酸菌噬菌体,通过透射电镜观察噬菌体形态,噬菌体基因组限制性内切酶作用分析其包装机制,并进行宿主范围和一步生长曲线的测定,SDS-PAGE分析噬菌体结构蛋白,对获得的噬菌体进行生物学特性鉴定。结果显示,分离获得3株烈性乳酸菌噬菌体,依次命名为Lc、Lpen和Lbre。电镜结果显示,噬菌体Lc、Lpen均由多面体头部和非收缩性尾部组成,而噬菌体Lbre由多面体头部和收缩性尾部组成。根据形态学分析,Lc和Lpen属于长尾噬菌体科（Siphoviridae）,B1类,Lbre属于肌尾噬菌体科（Myoviridae）,A1类。噬菌体基因组经限制性内切酶作用后,核酸电泳结果显示,噬菌体Lc、Lpen基因组均为异质平末端,其包装机制属满头包装,即pac-型,而Lbre含有黏性末端,其包装机制属于cos-型。宿主范围测定结果显示,噬菌体Lc、Lbre对宿主专一,而Lpen宿主谱较广。一步生长曲线显示,噬菌体Lc、Lpen和Lbre潜伏期分别为60、45和150 min,裂解期分别为45、90和105 min,裂解量分别为47、24和30 PFU/cell。SDS-PAGE分析显示,噬菌体Lc结构蛋白有7个,主要结构蛋白分子质量约为50 ku;噬菌体Lpen和Lbre结构蛋白均有5个,主要结构蛋白分子质量分别约为55和50 ku。综上,本研究分离获得3株乳酸菌烈性噬菌体,并对其主要生物学特性进行鉴定,对了解乳酸菌噬菌体及后续乳酸菌噬菌体污染的防治提供了试验数据和理论依据。     

鹅源缓慢葡萄球菌的分离鉴定及生物学特性研究

2020年6月,潍坊临朐某养鹅场饲养的2月龄朗德鹅不断出现发病和死亡,剖检可见内脏器官、脂肪、肌肉出血.为确定发病原因,进行病原的分离鉴定.结果显示:从发病鹅内脏器官中分离到一株革兰氏阳性球菌,该分离菌对头孢拉定、米诺环素高敏;显微镜检、生化试验、微生物质谱仪检测、16 S rRNA基因测序和同源性分析确定该分离菌为凝...