不同检测材料对ELISA检测禽白血病病毒-p27抗原结果的影响

为探讨不同检测材料对ELISA检测禽白血病病毒(ALV)-p27抗原结果的影响,试验首先对180日龄地方品种母鸡的泄殖腔棉拭子ALV-p27抗原进行ELISA检测,选取部分阳性鸡和阴性鸡进行分组试验,采用ELISA对试验鸡血清、蛋清和病毒分离的细胞培养液进行ALV-p27抗原检测,采用RT-PCR方法检测血液ALV特异性基因。结果显示,阳性组中以血清、蛋清和细胞培养液作为ELISA ALV-p27抗原检测材料,其检测阳性率均低于泄殖腔棉拭子,血清检测的阳性个体包含全部蛋清和细胞培养液ELISA检测的阳性个体。ELISA检测数据的相关性分析显示,只有血清和细胞培养液检测数据间存在显著性相关,线性关系方程为Y(细胞上清)=1.8439X(血清)-0.1469,R²=0.937;阳性组中ALV-p27基因检测阳性率低于泄殖腔棉拭子,但高于血清、蛋清和细胞培养液,其包含所有血清ELISA检测的阳性样品;外源性ALV-J gp85基因阳性率仅为29.17%,且阳性样品均属于血清ELISA阳性样品。综上所述,成年鸡以泄殖腔棉拭子作为ELISA ALV-p27抗原检测材料存在假阳性结果,蛋清和细胞培养液作为检测材料存在漏检的可能,血清作为ELISA检测材能够更准确地反映成年鸡群ALV感染状态。     

不同ELISA检测方法在检测出壳雏鸡禽白血病病毒感染中的应用

通过雏鸡胎粪中群特异性衣壳蛋白27(p27)抗原检测以判定禽白血病病毒(ALV)垂直传播是实施禽白血病净化的关键步骤,为对比不同ALV-p27抗原ELISA试剂盒对我国四类广泛流行的亚群ALV垂直传播的检测效果,本试验设置ALV-A、ALV-B、ALV-J和ALV-K感染组,以无菌生理盐水作为对照组,在8胚龄时以卵黄囊接种的方式感染SPF鸡胚,建立鸡胚携带ALV-A、ALV-B、ALV-J和ALV-K的垂直感染模型。采集各组雏鸡胎粪样品和血浆样品,死亡鸡胚肝脏样品,死亡雏鸡胎粪样品、血浆样品和肝脏样品,其中血浆和肝脏样品需接种鸡胚成纤维细胞系(DF-1细胞)进行病毒分离,各样品以4家公司提供的ALV-p27抗原ELISA试剂盒进行检测,并以实时荧光定量PCR(RT-qPCR)进行平行检测,比较阳性检出率和灵敏度。结果显示,4家公司的ALV-p27抗原ELISA试剂盒对于同一样品的阴阳性判定结果基本一致,但灵敏度存在差异;胎粪样品直接ELISA检测不能将ALV阳性鸡只全部检出,相对于胎粪样品,血浆和肝脏病毒分离样品ELISA检测更具有灵敏度优势。本试验所建立的对比方法不仅有助于评估4家公...     

ELISA检测方法在禽白血病净化中的应用

禽白血病(Avian Leukosis,AL)是由反转录病毒科α肿瘤病毒属禽白血病病毒/肉瘤病毒群病毒(ALV/RSV)引起的禽类多种肿瘤性疾病的总称,感染率高,发病率低,是危害养鸡业的主要疾病之一。禽白血病对种鸡群的危害巨大,且目前尚无商品化疫苗,只能依靠对种鸡群的净化进行防控。至今人类还不能有效的预防和治疗本病,控制禽白血病的主要方法是通过病原检测,淘汰阳性鸡,净化种群。国内外相继建立了多种检测禽白血病的方法,其中ELISA法能高效的检测到蛋清中的ALV抗原,具有敏感、简便、快捷、适用于大面积检测的特点,在种群净化中得到了广泛的应用,但ELISA诊断试剂盒在我国还未实现商品化。在未来禽白血病的净化将通过ELISA检测方法来实现。     

不同种类样品检测禽白血病P27抗原结果分析

为下一步制定烟台市白羽肉鸡场点禽白血病净化路线,2020年1月对900枚种蛋和900份咽喉/泄殖腔棉拭子利用酶联免疫吸附试验进行禽白血病p27抗原检测,结果显示:蛋清禽白血病p27抗原阳性检出率为1%;咽喉/泄殖腔棉拭子禽白血病p27抗原阳性检出率为2.1%,两者之间的检测结果无明显的相关性。     

4种ELISA试剂盒检测禽白血病病毒效率比较

对采集鸡蛋清、泄殖腔肛拭子以及蛋清或泄殖腔肛拭子检测阳性的鸡只之血清接种DF-1细胞的上清液,分别采用A、B、C、D 4种ELISA试剂盒进行ALV-P27抗原的3次试验检测。结果显示,A试剂盒的蛋清和病毒分离的敏感度最高,B试剂盒对肛拭敏感性最高。A试剂盒的3次试验检测的符合率都在87%以上,并且较稳定,结果可信度高;C试剂盒的符合率在79%以上,相对稳定;B和D试剂盒的符合率都不稳定。     

间接ELISA检测抗禽白血病病毒抗体方法的建立

禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)是禽白血病的病原,可引起鸡的免疫抑制和肿瘤。净化种鸡群是控制ALV的主要方法之一。本研究将ALV的p27基因克隆到表达载体pGEX-6P-1,在大肠杆菌中获得了高效表达,以纯化后的p27-GST融合蛋白为抗原包被,经过条件优化,建立了检测鸡血清中抗ALV抗体的间接ELISA方法。与IFA检测结果比较,该方法比IDEXX ELISA试剂盒有更高的符合率。可用于禽白血病病毒感染根除的大规模检测,并具有低成本、易操作的特点,能同时检测到针对ALV所有亚群的抗体。     

禽白血病病毒ELISA检测方法的建立与初步应用

本研究以在毕赤酵母系统中表达并纯化的p27重组蛋白为包被抗原,HRP标记的兔抗鸡IgY为酶标二抗,建立了一种快速有效的禽蛋白血病病毒ELISA检测方法,并对其反应条件进行优化。结果显示,该方法具有良好的特异性和重复性;与市售商品试剂盒相比,符合率为96.92%,且更为敏感。应用建立的ELISA方法检测来自吉林省内鸡场314份疑似样品,阳性检出率为75.15%。本研究为禽白血病病毒的检测与诊断提供了一种简便、有效的检测方法。     

J亚群禽白血病ELISA抗体检测方法的建立

本研究分离纯化了具有反应活性的J亚群禽白血病JL-2株gp85表达蛋白,并以其为抗原,开展了相关反应条件、特异性、重复性、敏感性、现地应用以及国外试剂盒符合率等方面的研究,初步建立了J亚群禽白血病ELISA诊断方法.     

影响ELISA检测结果的因素

1试剂因素1.1试剂的选择保证ELISA检测结果关键的因素。不要用无批号的试剂,要选用知名的,具有"三证"的试剂。不同批号的试剂不能混合使用,过期试剂则不能使用。1.2临床试验试剂的温度大多数的做法是在做试验时直接将试剂从冰箱里拿出即用,这样会导致对一些弱阳性样品的检测出现假阳性。因此,在ELISA检测中试剂的准备最为关键的是,将试剂盒从4℃冰箱拿来,不需要避     

不同pH值对肌肉组织中盐酸克伦特罗ELISA检测结果的影响

研究了不同pH值对ELISA法检测肌肉组织中盐酸克伦特罗结果的影响。结果表明,在一定pH值范围内瘦肉精含量与样品pH值呈极显著负相关关系;在试剂盒所对应的推荐pH值范围以内,样品pH值的变化对检测结果的影响较小,反之,样品pH值每调节1个单位所得的检测结果间差异显著。     

蛋清样品的反应时间和加入量对禽白血病抗原检测结果的影响

目前,控制禽白血病的主要方法是通过病原的检测,淘汰阳性鸡,净化种群。虽然已建立了检测ALV的多种方法,如琼脂扩散试验(AGP)、补体结合试验(COFAL)、间接免疫荧光试验(IFA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和聚合酶链式反应(PCR)等,其中最为理想的检测方法是ELISA法,它具有敏感性高、简便快捷、适用于大规模检测的特点。IDEXX FlockChek禽白血病抗原检测试剂盒能高效的检测到蛋清中的ALV抗原,在种群净化中得到了广泛应用。与其他常规血清学检测方法所用的样品不同,IDEXX禽白血病抗原检测试剂盒使用的样品是蛋清和泄殖腔拭子,而且…     

检测禽白血病/肉瘤病毒ELISA双抗体法的研究

用差速离心和非线性蔗糖密度梯度离心法提纯了感染雏鸡血浆中禽成髓细胞性白血病病毒(AMV),并用SDS-PAGE法提取了AMV的结构蛋白P_(27)~(838)。以纯化的P_(27)~(838)高免家兔,制备了兔抗P_(27)~(838)的禽白血病/肉瘤病毒群特异性抗体。选用兔抗P_(27)~(838)IgG作为包被抗体,该抗体与辣根过氧化物酶的结合物作为酶标抗体,以聚苯乙烯微量板为固相载体,建立了监测禽白血病的ELISA双抗体法,经试验证明该方法具有特异性强、敏感性高、重复性好的特点。     

检测禽白血病／肉瘤病毒ELISA双抗体法的研究

用差速离心和非线性蔗糖密度梯度离心法提纯了感染雏鸡血浆中禽成髓细胞性白血病病毒（ＡＭＶ），并用ＳＤＳＰＡＧＥ法提取了ＡＭＶ的结构蛋白Ｐ２７％ｇａｇ，以纯化的Ｐ２７＾ｇａｇ高免家兔，制备了兔抗Ｐ２７＾ｇａｇ的禽白血病／肉瘤病毒群特异性抗体。选用兔抗Ｐ２７＾ｇａｇＩｇＧ作为包被抗体。该抗体和辣根过氧化物酶的结合物作为酶标抗体，以聚苯乙烯微量板为固相载体，建立了监测禽白血病的ＥＬＩＳＡ双抗体法，经试验柱     

基因芯片和ELISA检测临床样品中禽白血病的比较研究

为了鉴定实验室建立的禽白血病基因芯片检测方法与商品化ELISA方法的符合情况,试验从北京市某种鸡场挑选疑似禽白血病的蛋鸡13只,分别采集蛋清、血清、全血及泄殖腔棉拭子样品,利用基因芯片方法和商品化ELISA试剂盒进行检测比较。结果表明:基因芯片方法检测全血和泄殖腔棉拭子的阳性率均为69.23%;ELISA试剂盒检测蛋清和泄殖腔棉拭子样品中p27抗原的阳性率为23.08%。说明利用基因芯片方法检测全血和泄殖腔棉拭子样品的阳性检出率较高。     

不同处理的血清对ELISA检测结果的相关性研究

采用三种不同方法把被检血清处理后,用于间接ELISA检测乙型五号病病毒抗体的相关性研究。A是未处理的血清直接进行ELISA测定,B是将血清在56℃下灭活30min后进行ELISA测定,C是将血清用25%的高岭土处理后进行ELISA测定。结果表明,三种不同处理方法的血清ELISA所测得的结果相关系数分别为г_(A-B)=0.724、г_(A-C)=0.774,г_(B-C)=0.686,同时,对这三种方法检测结果进行了t检验。发现A、B之间无显著性差异(P>0.05)而A与C、B与C之间存在显著性差异(P<0.05)。     

禽白血病的PCR检测

试验根据禽白血病病毒群特异性抗原P27基因合成引物,经PCR反应条件的优化,针对来源于不同养殖场病料样本的P27基因进行PCR扩增,结果ALV–J抗体阳性鸡血液样本、ALV–J抗体阴性鸡血液样本、疑似病例肝脏和正常鸡肝脏中的病原核酸检出率分别为50.0%、0、90.0%和61.5%.同时将扩增的目的基因进行克隆测序,并与GenBank中的参考毒株进行比较,结果表明目的基因片段序列长793 bp,与参考毒株核苷酸序列同源性分别为99.2%、97.6%.     

IFA和ELISA检测J亚群禽白血病病毒的比较研究

为比较3种禽白血病病毒(ALV)抗原检测ELISA试剂盒的特异性和灵敏度,将J亚群禽白血病病毒(ALV-J)传染性克隆rNX0101株以病毒原液(9×103TCID50)、10倍病毒稀释液(9×102TCID50)、100倍病毒稀释液(90 TCID50)接种培养于6孔板的DF1细胞,每孔均提前放入灭菌的细胞爬片,于接种后第1~6天每天取上清用3种ELISA试剂盒(A、B、C)检测ALV p27抗原,同时在接种后的第3天和第6天取出细胞爬片进行间接免疫荧光法(IFA)检测。结果表明,IFA方法对高、中、低剂量接种3 d后均可检出ALV-J的感染,而ELISA试剂盒中只有A试剂盒在高剂量接种时才能检出,试剂盒B和试剂盒C最早要在第4天才可检出;中、低剂量接种,3种试剂盒在第4~5天才能检出;第6天时,由于病毒的明显复制,无论IFA方法还是3种ELISA试剂盒都可检出ALV-J的感染。本研究结果为正确选择商品化禽白血病抗原检测试剂盒提供了借鉴。     

禽白血病病毒p27抗原ELISA检测试剂盒的比较与评估

为了更好地进行禽白血病监测与净化,研究使用由蛋清、细胞培养物、胎粪等多种样品组成的样品盘对7种禽白血病病毒（Avian leukosis virus,ALV）p27抗原ELISA检测试剂盒（国产试剂盒DA、DB、DC,进口试剂盒IA、IB、IC、IDEXX）进行比较。结果显示：从分析特性上看,试剂盒分析特异性均较好,未观察到与其他常见禽源病毒的交叉反应;与IDEXX相比,DA、IA的分析敏感性较高,DB、IC其次,DC、IB较低,对于ALV不同亚群,各种试剂盒分析敏感性差异可达2～3个稀释度;从诊断特性上看,与IDEXX相比,DB、DC和IC的诊断敏感性和诊断特异性均高于90%;DA、IA和IB与IDEXX的诊断敏感性和诊断特异性均高于80%;各试剂盒对于不同类型样品（DF-1细胞培养物、蛋清、胎粪）的诊断敏感性和诊断特异性存在差异;从重复性上看,DA和IA的批内变异系数均在15%以内。综上所述,与IDEXX相比,当前国产p27抗原ELISA检测试剂盒DA和DB、进口p27抗原ELISA检测试剂盒IA和IC的各项性能可满足禽白血病净化各阶段对不同类型样品的检测需求。     

禽白血病病毒抗体间接ELISA 检测方法的建立及初步应用

以大肠杆菌表达、纯化的禽白血病病毒（ALV）重组P27蛋白为包被抗原,建立了检测ALV-P27抗体的间接ELISA方法,为禽白血病流行病学调查提供了一种简便的血清学检测方法.该方法与9种禽常见传染病病毒阳性血清及大肠杆菌阳性血清无交叉反应,具有较好的特异性;批内、批间重复试验变异系数均小于10％,具有良好的重复性;新建立的ELISA方法比IDEXX公司生产的ALVA、B亚群抗体检测试剂盒和J亚群抗体检测试剂盒相对于免疫荧光试验（IFA）有更高的符合率.