稳定表达RKIP对新城疫病毒复制的影响

为了研究Raf激酶抑制蛋白（RKIP）对新城疫病毒（NDV）复制的影响,从鸡胚成纤维细胞中提取总RNA,采用RT-PCR方法扩增RKIP基因,将其克隆入真核表达载体pEGFP-N1中,经PCR、双酶切和测序鉴定,采用Fu-GENEHD法将阳性质粒转染Vero细胞,经G418筛选,有限稀释法获取单克隆细胞株,Western-blotting检测RKIP的表达。利用Real-time PCR测定病毒感染细胞后培养上清的病毒量。结果表明：成功构建鸡RKIP真核表达质粒;转染Vero细胞后经克隆化培养获得稳定表达鸡RKIP的细胞株Vero-RKIP;感染初期,NDV在Vero-RKIP上表现出了更强的复制能力。     

ELISA 检测新城疫病毒抗体

用鸡红细胞凝集解脱法提纯的新城疫病毒(NDV)抗原包被酶标板,最适抗原浓度为0.1μg～8μg/孔;鸡血清的最适稀释倍数为1:400.该抗原与马立克氏病等七种禽病抗血清不发生交叉反应.与血凝抑制试验(HI)比较.在检测的233份血清样本中,ELISA 阳性124份(占53%);HI 效价1:8以上者为84份(占36%);84份 HI 阳性样品,ELISA 亦为阳性;40份 HI 阴性样品,ELISA却为阳性;没有 ELISA 阴性而 HI 阳性的样本.两法可追求检测结果一致的为193/233(占83%).     

重组鸡α-干扰素对新城疫病毒复制的影响

毕赤酵母表达鸡α-干扰素经纯化后,以50000U、5000U和500U分别与200ELD50新城疫病毒疫苗株LaSota和中等毒力Q株等量混合,接种9～10日龄SPF鸡胚,记录鸡胚死亡情况并测定尿囊液HA效价,结果表明,高浓度重组干扰素可使病毒致死鸡胚时间延长,并使Q株在尿囊液中的HA效价下降2～3个滴度。     

新鱼腥草素钠对雏鸡细胞免疫的影响

将采集的健康鸡抗凝血按常规方法分离外周血淋巴细胞并于体外培养24h后，加入不同剂量的新鱼腥草素钠（SNH），然后以MTT法测定SNH对淋巴细胞增殖的影响。结果显示，SNH在体外具有刺激淋巴细胞增殖的能力，而且其刺激淋巴细胞的能力与剂量有关，其中以终浓度为250mg/L效果最明显。为进一步探讨SNH在体内对动物免疫功能的影响，将120只非免疫健康鸡随机分为5组；其中第Ⅰ～Ⅲ组为试验组，分别注射不同剂量（4mg／kg、2mg／kg、1mg／kg体重）的SNH；第Ⅳ组为白细胞介素对照；第Ⅴ组为疫苗对照；所有动物于14日龄以新城疫病毒La Sota株弱毒活疫苗进行第一次免疫，2周后加强免疫1次，并于第一次免疫后的第7d、14d、21d、28d、35d分别测定各组动物的外周血CD4^＋／CD8^＋淋巴细胞比值。结果表明，体内注射SNH具有提高外周血CD4^＋／CD8^＋淋巴细胞比值的作用，并与对照组差异显著（P〈0．05），且这种作用同样与给药剂量相关，其中以2mg／kg体重最为理想。     

新城疫病毒复制对其溶瘤作用影响的初步分析

本研究旨在明确新城疫病毒(NDV)溶瘤作用是否依赖其复制水平,并改进NDV溶瘤机制研究模型。以NDV疫苗株LaSota感染人肿瘤细胞系HCT116、A549和人非肿瘤细胞系HEK293T为研究模型;RT-qPCR检测NDV在各细胞系的基因组复制水平;Western blot检测NDV在各细胞系的蛋白表达水平;利用流式细胞术检测NDV感染对各细胞系的细胞周期和细胞凋亡的影响。结果表明,NDV在三个细胞系内的基因组复制水平和蛋白表达水平没有显著差异,但对三个细胞系的溶瘤作用存在明显差异;进一步流式细胞术检测发现,NDV感染能诱发HEK293T和HCT116的细胞周期发生G1期停滞,但对A549的细胞周期没有明显影响;此外,NDV感染24 h后,A549细胞以早期凋亡为主,而HCT116细胞以坏死/晚期细胞凋亡为主。NDV的溶瘤作用并不依赖于其复制水平,而且NDV对不同类型肿瘤细胞的溶瘤作用存在不同机制。     

新城疫病毒复制对其溶瘤作用影响的初步分析

本研究旨在明确新城疫病毒（NDV）溶瘤作用是否依赖其复制水平,并改进NDV溶瘤机制研究模型。以NDV疫苗株LaSota感染人肿瘤细胞系HCT116、A549和人非肿瘤细胞系HEK293T为研究模型;RT-qPCR检测NDV在各细胞系的基因组复制水平;Western blot检测NDV在各细胞系的蛋白表达水平;利用流式细胞术检测NDV感染对各细胞系的细胞周期和细胞凋亡的影响。结果表明,NDV在三个细胞系内的基因组复制水平和蛋白表达水平没有显著差异,但对三个细胞系的溶瘤作用存在明显差异;进一步流式细胞术检测发现,NDV感染能诱发HEK293T和HCT116的细胞周期发生G1期停滞,但对A549的细胞周期没有明显影响;此外,NDV感染24 h后,A549细胞以早期凋亡为主,而HCT116细胞以坏死/晚期细胞凋亡为主。NDV的溶瘤作用并不依赖于其复制水平,而且NDV对不同类型肿瘤细胞的溶瘤作用存在不同机制。     

直接荧光抗体快速检测新城疫病毒

用荧光素(FITC)标记抗新城疫(ND)病毒单克隆抗体(FE8-3)检测人工感染及部分自然感染ND病鸡,检出率达100％,与病毒分离结果相吻合。该方法快速、灵敏、准确、可用于新城疫诊断。     

HeLa细胞中泛素蛋白酶体系统对新城疫病毒复制的影响

本文主要对细胞的泛素-蛋白酶体系统是否参与新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)的复制过程进行了研究。用NDV感染HeLa细胞,对细胞样品进行Western blot实验,并检测细胞26S蛋白酶体的三种蛋白水解活性变化。同时使用多种泛素-蛋白酶体系统相关的抑制剂处理细胞并做NDV感染,测定细胞上清中病毒TCID50值,比较药物处理与DMSO处理对病毒增殖的影响。结果表明,HeLa细胞在感染NDV后,细胞内泛素化蛋白水平降低,而26S蛋白酶体的三种蛋白水解活性都显著升高;使用泛素-蛋白酶体系统抑制剂后NDV的增殖受到了明显的抑制,证明NDV在HeLa细胞内的增殖与细胞自身的泛素-蛋白酶体系统关系密切。     

鸡新城疫病毒血凝抑制抗体检测的影响因素

鸡新城疫病毒血凝抑制试验（HI）的方法，目前已广泛应用于养鸡业中。HI抗体的监测，能帮助建立鸡新城疫（ND）合理的免疫程序、测定鸡群ND免疫水平、预测初生雏鸡NIJ的母源抗体，还能确诊ND。长期以来，HI抗体监测手段的应用，对控制和减少ND的发生率，起了至关重要的作用c作者多年从事NDHI抗体监测，深切地体会到此项工作必须严格执行操作规程。不断实践．掌握要领，才能得出贴近鸡群实际免疫状况的正确数据，将误差缩小到最低限度，从而使监测工作对鸡群的防疫具有更好的指导意义c目前HI抗体的监测方法一般采用微量法。作者根…     

中草药对鸡新城疫病毒鸡胚复制的抑制试验报告

多种中草药具有抗病毒和增强免疫机能的作用,为探索中草药对鸡新城疫病毒的抑制作用,笔者选用金银花、板兰根、连翘、黄芩进行了人工感染鸡胚新城疫病毒的复制抑制试验,现报告如下:……     

新城疫病毒抗体ELISA检测方法的建立与应用

为建立一种快速的新城疫病毒抗体检测方法,本研究以原核表达的重组HN蛋白作为诊断抗原,建立了检测新城疫病毒抗体的间接ELISA诊断方法.该方法检测AIV(H9亚型)、IBV、IBDV、EDSV 4种常见禽病病原的阳性血清均为阴性;检测灵敏度为1:12 800;批内重复性试验、批间重复性试验的变异系数分别小于5％和10％;与血凝抑制试验(HI)符合率为96.1％.本研究建立的NDV HN间接ELISA检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,为NDV的抗体检测及流行病学调查等快速诊断提供一种技术手段.     

鱼腥草提取液在鸡胚内抗新城疫病毒试验

为证明鱼腥草抗新城疫病毒的作用效果,通过接种鸡胚方法,对病毒接种前、接种同时、接种后加药三种方式处理的鸡胚尿囊液血凝效价进行测定。结果显示,在三种不同的加药方式中,不同浓度的鱼腥草提取液都能够降低新城疫病毒感染鸡胚尿囊液的血凝效价;鱼腥草提取液和新城疫病毒同时注入鸡胚时,鱼腥草原液抗病毒效果最好;鱼腥草提取液于新城疫病毒接种后注入鸡胚时,2倍稀释液抗病毒效果最好;鱼腥草提取液先于新城疫病毒注入鸡胚时,4倍和8倍稀释液抗病毒效果最好。结果表明,鱼腥草提取液能够抑制新城疫病毒在鸡胚尿囊液中的增殖;鱼腥草提取液在鸡胚内抗新城疫病毒活性与其加药方式及浓度有关。     

新鱼腥草素钠的急性毒性研究

评价新鱼腥草素钠对小鼠、肉鸡的急性毒性。采用常规方法染毒,改良寇氏法计算LD50。结果小鼠腹腔注射新鱼腥草素钠的LD50为119.14mg/kg;小鼠经口染毒,无法测定LD50,内服1日的最大耐受量为12g/kg;肉鸡按1g/kg、2g/kg、4g/kg经口染毒,无任何异常反应。说明新鱼腥草素钠口服无毒安全、腹腔注射有一定毒性。     

鸡胚母源抗体对鸡新城疫病毒增殖影响的研究

试验用SPF鸡胚和普通鸡胚分别测定鸡新城疫LaSota两种不同毒株的EID50:LaSota株Ⅰ在SPF鸡胚的EID50为10-7.75,普通鸡胚的EID50为10-7.25;LaSota株Ⅱ在SPF鸡胚的EID50为10-4.75,普通鸡胚的EID50为10-4.25。两种不同LaSota毒株在SPF鸡胚中的毒力普遍比在普通鸡胚中的毒力强,说明鸡胚母源抗体能影响鸡新城疫病毒的增殖,进而指导疫苗的生产。试验用SPF鸡胚和普通鸡胚分别测定鸡新城疫LaSota两种不同毒株的EID50:LaSota株Ⅰ在SPF鸡胚的EID50为10-7.75,普通鸡胚的EID50为10-7.25;LaSota株Ⅱ在SPF鸡胚的EID50为10-4.75,普通鸡胚的EID50为10-4.25。两种不同LaSota毒株在SPF鸡胚中的毒力普遍比在普通鸡胚中的毒力强,说明鸡胚母源抗体能影响鸡新城疫病毒的增殖,进而指导疫苗的生产。     

中药金丝桃素注射液对鸡新城疫病毒抑制作用研究

用鸡胚培养法和红血球凝集(HA)试验,测定中药金丝桃素注射液对鸡新城疫病毒的抑制作用。试验共分4组,第Ⅰ组接种病毒尿囊液与中药金丝桃素混合液,HA滴度0。第Ⅱ组接种病毒尿囊液与西药金刚烷胺混合液,HA滴度5log2。第Ⅲ组接种病毒尿囊液与生理盐水混合液,HA滴度9log2。第Ⅳ组不接种病毒尿囊液,不给药,HA滴度0。结果表明,中药金丝桃素注射液对鸡胚无毒性作用。中药金丝桃素与病毒同时接种鸡胚,能完全抑制鸡新城病毒在鸡胚中增殖。     

雏鸡抗新城疫病毒母源抗体半衰期的测定

某鸡场海兰褐蛋用雄性雏鸡，在出壳后不进行任何疫苗免疫，在不同日龄分别采集血清，测定其对新城疫病毒（NDV）HI抗体水平，以此来确定对NDV的母源抗体的衰减规律及半衰期。结果表明，雏鸡在1-4日龄期间，其母源抗体HI滴度维持在2^6以上，但在7、12、20日龄时，分别降至2^4.54,2^2.83,2^017,28日龄则完全消失。根据这些数据推算，蛋用雏鸡血清中对NDV的母源抗体的HI滴度的半衰期为2.19d左右。     

HI和ELISA检测新城疫病毒抗体的相关性

由于新城疫(ND)继续威胁着家禽业而要求应用常规的检测方法以确定家禽的免疫状态。鉴于血凝抑制试验(HI)作为一种标准方法已有几十年,因此正逐渐地被酶联免疫吸附试验(ELISA)所代替。虽然ELISA检测ND既敏感又特异,但还需要与我们所熟悉的HI试验的结果作比较。尤其是我们必须了解至少在进行中的ELISA与HI有好的相关性。送到萨格勒布大学的家禽中心的血清样品用HI和