猪源大肠杆菌flor耐药基因的检测与分析

旨在了解动物源大肠杆菌中氯霉素类药物耐药基因的分子流行病学特征。采用PCR技术检测兽医临床分离的30株猪源大肠杆菌中flor基因的携带情况,利用序列分析技术对GenBank中登录的不同来源的大肠杆菌flor基因序列和临床分离的2株大肠杆菌(HZ19株与MZ6株)的flor基因序列进行相似性分析,并构建系统进化树。结果表明,有24株猪源大肠杆菌为flor基因阳性,阳性率为80%;2株猪源大肠杆菌flor基因的相似性为99.2%,与其他序列的相似性在99.0%~100%。提示分离到的猪源大肠杆菌对氯霉素类药物的耐药情况较为严重,在兽医临床中应引起足够重视。     

猪源大肠杆菌耐药基因研究获突破

<正>抗生素的滥用造成对抗生素有耐药性和多重耐药性超级细菌的产生,这一现象已成为全球性难题。为了探究细菌耐药性的分子机制,中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物细菌病研究团队开展了猪源大肠杆菌携带多重耐药基因分子机制的研究,并取得重要进展,为解析细菌多重耐药机制提供了理论依据,也为消除细菌耐药性提供了解决方案。自2000年首次在松鼠葡萄球菌中发现cfr基因至今,该基因曾一度被认为专属于阳性菌的多重耐药基因。动物细菌病研究团队的张万江博士     

猪源大肠杆菌中氯霉素类药物耐药基因的检测与分析

氯霉素类药物包括氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考等。此类药物抗菌谱广、吸收快、体内分布广泛,在兽医临床上发挥着举足轻重的作用,其耐药性也备受重视。因此,本试验对黑龙江省受试养殖场60株临床分离的猪源大肠杆菌的floR和cmlA基因进行分子检测和分析,旨在为猪源大肠杆菌氯霉素类药物耐药基因的研究和分子流行病学调查提供试验依据,对临床合理用药以及控制细菌耐药性发展均具有重要意义。     

贵州省猪源大肠杆菌对磺胺类抗菌药物耐药性及耐药基因检测

为了解贵州省猪源大肠杆菌对磺胺类抗菌药物的耐药性及其耐药基因的流行情况,采用微量肉汤稀释法测定66株从贵州省6个地区规模化养猪场分离保种的猪源大肠杆菌对5种磺胺类抗菌药物敏感性,并用PCR方法对磺胺类耐药的sul基因进行检测。结果显示,贵州省猪源大肠杆菌对磺胺二甲嘧啶耐药率为93. 94%,其次是磺胺甲噁唑和磺胺噻唑耐药率分别为86. 36%、89. 39%,磺胺间甲氧嘧啶和磺胺嘧啶耐药率分别为84. 85%、80. 30%。66株大肠杆菌sul基因的检出率为100%,其中sul3为100%(66/66),sul1为89. 4%(59/66),sul2为77. 3%(51/66),同时携带sul1、sul2及sul3三种基因型的大肠杆菌占74. 2%(49/66)。结论:贵州省6个地区规模化养猪场大肠杆菌对磺胺类药物耐药形式严峻,磺胺类sul3耐药基因携带率较高。     

西藏林芝地区藏猪源大肠杆菌耐药表型及耐药基因检测

本文采集西藏林芝地区藏猪养殖场和散养藏猪腹泻物,采用细菌学方法分离鉴定藏猪源大肠杆菌后,检测抗菌药物的敏感性及耐药基因。结果显示:林芝地区藏猪源大肠杆菌分离菌株对各种抗生素存在不同程度的耐药性,其中对诺氟沙星、阿奇霉素、复方新诺明极敏感;对氯霉素、头孢唑林、链霉素、丁胺卡那霉素、四环素、庆大霉素、头孢西丁高度敏感;呋喃妥因中度敏感;而对万古霉素、青霉素、红霉素耐药。并检测出P基因,其检出率为100%。根据实验结果,提出了科学用药措施,为西藏林芝地区藏猪养殖业的健康发展提供理论依据。     

贵州省猪源大肠杆菌对四环素类药物的耐药性及耐药基因检测

为考察贵州省猪源大肠杆菌对四环素类抗菌药的耐药情况和耐药基因的流行情况,本试验采用微量肉汤稀释法测定783株分离于贵州省8个地区规模化养殖场的猪源大肠杆菌对6种四环素类药物的敏感性,并通过PCR方法检测其携带四环素耐药基因情况。结果显示,猪源大肠杆菌对土霉素、四环素、金霉素、多西环素、米诺环素和替加环素的耐药率分别为97.3%、97.6%、96.6%、89.3%、48.0%和34.2%;土霉素和四环素的耐药水平最高,其MIC₅₀分别为256 和128 μg/mL,而MIC₉₀均为512 μg/mL,四环素的耐药倍数高于土霉素;米诺环素和替加环素的耐药水平最低,其MIC₉₀分别为32和4 μg/mL,耐药倍数相同;耐药基因tetA、tetB、tetC、tetD和tetM的检出率分别为92.60%、41.50%、58.75%、58.62%和70.10%;耐药菌株中主要以tetA基因为主,且大多数以携带复合基因的形式存在;大肠杆菌对土霉素、四环素、金霉素、多西环素和米诺环素的耐药性分别与耐药基因tetB和tetM呈极显著相关（P<0.01）,tetD基因分别与对米诺环素和替加环素的耐药性呈极显著相关（P<0.01）。贵州省猪源大肠杆菌对四环素类药物的耐药情况十分普遍,尤其是四环素和土霉素,金霉素和强力霉素有高度耐药的趋势;外排泵是四环素类药物主要的耐药机制;在兽医临床上越来越严重的耐药情况与耐药基因的广泛存在有很大关系。     

贵州省猪源大肠杆菌对四环素类药物的耐药性及耐药基因检测

为考察贵州省猪源大肠杆菌对四环素类抗菌药的耐药情况和耐药基因的流行情况,本试验采用微量肉汤稀释法测定783株分离于贵州省8个地区规模化养殖场的猪源大肠杆菌对6种四环素类药物的敏感性,并通过PCR方法检测其携带四环素耐药基因情况。结果显示,猪源大肠杆菌对土霉素、四环素、金霉素、多西环素、米诺环素和替加环素的耐药率分别为97.3%、97.6%、96.6%、89.3%、48.0%和34.2%;土霉素和四环素的耐药水平最高,其MIC50分别为256和128μg/mL,而MIC90均为512μg/mL,四环素的耐药倍数高于土霉素;米诺环素和替加环素的耐药水平最低,其MIC90分别为32和4μg/mL,耐药倍数相同;耐药基因tetA、tetB、tetC、tetD和tetM的检出率分别为92.60%、41.50%、58.75%、58.62%和70.10%;耐药菌株中主要以tetA基因为主,且大多数以携带复合基因的形式存在;大肠杆菌对土霉素、四环素、金霉素、多西环素和米诺环素的耐药性分别与耐药基因tetB和tetM呈极显著相关(P0.01),tetD基因分别与对米诺环素和替加环素的耐药性呈极显著相关(P0.01)。贵州省猪源大肠杆菌对四环素类药物的耐药情况十分普遍,尤其是四环素和土霉素,金霉素和强力霉素有高度耐药的趋势;外排泵是四环素类药物主要的耐药机制;在兽医临床上越来越严重的耐药情况与耐药基因的广泛存在有很大关系。     

广西规模化猪场猪源大肠杆菌耐药表型和耐药基因检测及相关性分析

对广西规模化猪场分离的120株猪源大肠杆菌进行了头孢菌素类、氟喹诺酮类、氨基糖苷类、四环素类、大环内酯类和酰胺醇类药物耐药表型检测,并通过PCR检测菌株的β-内酰胺酶基因(bla_(TEM)、bla_(CTX-M))、氟喹诺酮类耐药基因(qnrA、oqxA、oqxB)、氨基糖苷类耐药基因(aac(6′)-Ib-cr)、大环内酯类耐药基因(ermB)和酰胺醇类耐药基因(floR)携带情况。耐药性检测结果显示,猪源大肠杆菌对头孢西丁、头孢他啶和阿米卡星具有高敏感率(74.0%),而耐药率最高为四环素类84.2%,酰胺醇类为70.8%,氟喹诺酮类为68.9%,氨基糖苷类为49.4%,大环内酯类为43.3%,最低为头孢菌素类31.4%。猪源大肠杆菌最低对1种药物耐药,最高对18种药物耐药,111株为多重耐药菌,以11耐(15株)、8耐(13株)和7耐(12株)为主,共有82种耐药谱型。耐药基因检测结果显示,8个耐药基因的阳性率均≥50.0%,其中阳性率最高为bla_(TEM)基因(91.7%),最低为aac(6′)-Ib-cr基因(50.0%),共存在53种基因组合类型,主要为bla_(TEM)+bla_(CTX-M)+qnrA+oqxA+oqxB+aac(6′)-Ib-cr+ermB+floR(14株,11.7%)和bla_(TEM)+bla_(CTX-M)+qnrA+oqxA+oqxB+ermB+floR(13株,10.8%)。耐药基因和耐药表型相关性分析结果显示,bla_(TEM)和bla_(CTX-M)与大肠杆菌对头孢氨苄耐药情况极显著相关(P0.01),bla_(CTX-M)与大肠杆菌对头孢拉啶和头孢曲松耐药情况极显著相关(P0.01),qnrA、oqxA、oqxB和aac(6′)-Ib-cr基因与大肠杆菌对诺氟沙星、氧氟沙星、恩诺沙星和环丙沙星耐药极显著相关(P0.01),aac(6′)-Ib-cr基因与大肠杆菌对庆大霉素和卡那霉素耐药极显著相关(P0.01),floR基因与大肠杆菌对氟苯尼考耐药情况极显著相关(P0.01)。本研究结果表明广西规模化猪场猪源大肠杆菌仅对极少数抗菌药物具有较高敏感率,多重耐药情况严重,具有丰富的耐药谱型,携带多种耐药基因且具有复杂的基因组合类型,所携带的耐药基因与其耐药表型具有一定的相关性。     

鸡源致病性大肠杆菌的耐药基因PCR检测

鸡大肠杆菌病是由大肠埃希氏杆菌(Escherichiacoli,E.coli)某些血清型菌株所引起的一类疾病的总称,是危害养鸡业主要细菌性疾病。大肠杆菌血清型众多,且易产生耐药性。鸡致病性大肠杆菌的耐药性与本身携带的耐药基因具有一定的相关性。本实验临床分离5株鸡致病性大肠杆菌,用PCR方法对其四环素类药物的耐药基因tetA和tetB分布进行了检测,结果显示,临床分离5株鸡致病性大肠杆菌均携带检四环素类药物的耐药基因tetA和tetB检出率均为100%,因此,证实了说明临床分离5株鸡致病性大肠杆菌对四环素类药物存在很强的耐药性。     

广西不同养殖模式猪源大肠杆菌耐药性和耐药基因检测分析

本研究目的是了解广西不同养殖模式猪源大肠杆菌的耐药情况和耐药基因流行情况,为临床合理用药治疗猪大肠杆菌病以及减缓细菌耐药性产生提供参考。采用K-B纸片法测定了180株分离自广西3种养殖模式猪源大肠杆菌的耐药情况,并通过PCR检测其携带EABLs(bla_(TEM)、bla_(CTX))、PMQR因子(qnrA、oqxA、oqxB、aac(6′)-Ib-cr)、大环内酯类耐药基因(ermB)、磺胺类耐药基因(suL)和氟苯尼考耐药基因(floR)的情况。结果显示,大规模、中小规模和散养户养猪场的大肠杆菌对头孢西丁、头孢他啶和阿米卡星的敏感率高于70%,而对青霉素G、氨苄西林、阿莫西林、利福平、林可霉素和复方新诺明的耐药率均高于90%。大规模养猪场大肠杆菌对恩诺沙星的耐药率极显著低于散养户(P<0.01),对氧氟沙星、庆大霉素和氟苯尼考的耐药率显著低于散养户(P<0.05);中小规模养猪场大肠杆菌对恩诺沙星、强力霉素和氟苯尼考的耐药性显著低于散养户(P<0.05);散养户大肠杆菌对环丙沙星、卡那霉素和壮观霉素的耐药率极显著高于大规模养猪场和中小规模养猪场(P<0.01),而对头孢噻肟的耐药率极显著低于大规模养猪场和中小规模养猪场(P<0.01)。大规模养殖场、中小规模养殖场和散养户大肠杆菌的多重耐药指数(MARI)分别为0.62、0.63和0.68,分离自散养猪场的83.3%菌株(50株)表现为对13-23种药物的多药耐药,极显著高于大规模养猪场(50%,30株,P<0.01),显著高于中小规模养猪场(61.7%,37株,P<0.05)。在3种模式养猪场的大肠杆菌中均检测到bla_(TEM)、bla_(CTX、)qnrA、oqxA、oqxB、aac(6′)-Ib-cr、ermB、suL和floR 9种耐药基因,其中bla_(TEM)和suL的阳性率高达100%,bla_(CTX)的阳性率最低,各模式猪场均低于57%。3种养殖模式之间的耐药基因阳性率相比差异显著,但与耐药表型不具有显著相关性。结果表明,3种养殖模式的猪场分离的大肠杆菌均具有严重的耐药问题,且菌株可携带多种耐药基因,表现为多重耐药,而不同养殖模式猪场分离的菌株耐药性存在显著性差异。     

猪源大肠杆菌对氨基糖苷类药物的耐药性以及耐药基因的检测

为指导临床合理用药,根据耐药表型和基因型研究耐氨基糖苷类药物猪源大肠杆菌的流行情况,采用K—B法检测大肠杆菌对氨基糖苷类药物的耐药性,同时用PCR技术扩增氨基糖苷类药物的耐药基因以明确其基因型。结果显示,60株临床分离菌中,耐氨基糖苷类抗生素菌株54株,耐药率为90％;aac（3）-Ⅰ基因PCR扩增均为阴性;aac（3）-Ⅱ基因检出阳性28例,阳性率为46．7％;aac（6’）-Ⅰ基因检出阳性54例,阳性率为90％。结果表明,耐氨基糖苷类药物的大肠杆菌比较普遍,氨基糖苷类耐药基因以aac（3）-Ⅱ和aac（6’）-Ⅰ为主。     

猪源多重耐药大肠杆菌中整合子的检测

为了解猪源多重耐药大肠杆菌中整合子的流行状况和分子特性,分析整合子在细菌多重耐药中的作用,采用PCR方法检测75株多重耐药大肠杆菌中整合酶基因和整合子基因盒。结果显示,猪源大肠杆菌Ⅰ型整合子流行普遍,75株猪源大肠杆菌中检出Ⅰ类整合子56株,检出率为74.7%;检出Ⅱ类整合子4株,检出率5.3%;未检出Ⅲ类整合子。共检出5种Ⅰ型整合子,各种Ⅰ型整合子整合不同种类、不同数目的耐药基因盒。这表明Ⅰ型整合子对细菌多重抗药性的产生和传播起着重要作用,整合子是介导细菌多重耐药性的重要分子机制。     

西藏牦牛源大肠杆菌主要耐药表型及耐药基因检测

对西藏6个不同地、市200株牦牛源大肠杆菌进行了氨基糖苷类、氟苯尼考和磺胺类药物耐药表型和耐药基因的PCR检测。结果显示:牦牛源大肠杆菌对氨基糖苷类药物耐药率分别为阿米卡星96%、链霉素94.59%、新霉素19%、庆大霉素23%、卡那霉素19%,耐药基因只检出rmtB基因,检出率为100%;氟苯尼考类药物耐药率为25%,耐药基因flor基因检出率25%;磺胺类药物耐药率为32%,耐药基因sul1基因检出率7%、sul2基因检出率7%、sul3基因检出率17%;且耐药表型与耐药基因检测结果基本一致,同时显示,西藏不同地区间牦牛大肠杆菌的耐药性存在差异,人口密集和流动较大的拉萨、林芝、日喀则市耐药现象较为严重,而阿里、山南和那曲地区相对较轻。以上耐药表型和耐药基因在西藏不同市、地区均有检出,同时存在多重耐药现象。结果表明,西藏牦牛源大肠杆菌存在耐药性,应引起重视,提示西藏地区要合理用药,减轻耐药性的产生。     

乌鲁木齐市宠物猫源大肠杆菌耐药性及耐药基因检测

为了解宠物猫源大肠杆菌对临床常用抗菌药物的耐药性及其耐药基因携带情况,在乌鲁木齐市多家宠物医院采集宠物猫肛拭子样品59份进行大肠杆菌的分离鉴定,通过琼脂稀释法测定10种抗菌药物的最小抑菌浓度,利用PCR方法检测13种耐药基因。结果:分离鉴定出大肠杆菌47株,分离率79.7%(47/59)。分离菌对四环素(TET)(83.0%)、阿莫西林-克拉维酸(A/C)(66.0%)和磺胺异噁唑(FIS)(66.0%)耐药情况严重;对头孢他啶(TAZ)、头孢曲松(CRO)、恩诺沙星(EN)、庆大霉素(GEN)耐药率在38.3%～48.9%;对环丙沙星(CIP)、阿米卡星(AMK)敏感性较好,未检出亚胺培南耐药菌株。菌株多药耐药分布在5～8耐,占比59.6%,耐药表型以1耐TET和6耐A/C+GEN+CRO+TAZ+TET+FIS为主。共检出ant(3″)-Ia、aac(6′)-Ib、bla_TEM、bla_CTX-M、qnrS、tetA、tetB、tetM、sulⅠ、sulⅡ10种耐药基因,检出率分布在8.5%～57.4%,未检出耐药基因oqxB、bla     

徐州地区猪源大肠杆菌血清型调查和耐药检测

旨在研究徐州地区猪源大肠杆菌血清型分布及其耐药性。采集徐州周边猪场病料和样本117份,经分离纯化、PCR鉴定得到102株大肠杆菌。经血清型鉴定,致病性试验和耐药检测,O抗原血清型检出79株,分属18个血清型,其中O15、 O45、O78、O138 4种血清型分别占已定型血清菌株的17.7%、11.4%、13.9%和12.6%,合计占55.6%,为徐州周边地区优势血清型;强毒株25株,占O抗原菌株的31.6%,主要分布在O45、O15、O138 3种血清型;耐药率50%以上的药物多达17种,占到了临床常用药物85%,其中阿莫西林、氨苄西林钠、强力霉素、氟苯尼考、恩诺沙星、乳酸环丙沙星临床耐药尤其严重,高达80%以上。多重耐药菌株至少耐药12种以上,耐药谱型多达8种。研究表明,徐州地区猪源大肠杆菌检出率高,血清型复杂且致病性强,多重耐药现象严重,应结合本地菌株流行特点进行大肠杆菌病的防治。     

哈尔滨地区猪源大肠杆菌PMQR基因流行性检测

为了解哈尔滨地区猪源大肠杆菌中质粒介导的氟喹诺酮耐药(Plasmid mediated fluoroquinolone resistant,PMQR)基因的流行情况,本文通过对哈尔滨地区规模化养猪场进行采样处理,最终分离得到67株猪源大肠杆菌菌株,采用微量肉汤稀释法测定其对8种药物的最小抑菌浓度,针对PMQR基因设计特异性引物进行PCR扩增,结果显示,对8种兽医临床常用抗菌药物耐药率较高,多表现为多重耐药。oqx AB,qnr S,aac(6′)-Ib-cr,qnr B,qep A的检出率分别为70.15%,64.18%,22.39%,13.43%,11.94%,并没有检测到qnr A、qnr C、qnr D基因,这表明,PMQR基因在哈尔滨地区猪群中存在很高的检出率,这势必会加剧临床用药的难度,并且还为基因的水平传播提供可能。     

猪源多重耐药大肠杆菌Ⅰ型整合子的检测

为分析猪源多重耐药大肠杆菌中Ⅰ型整合子的流行情况,应用PCR方法检测其Ⅰ型整合酶基因(intⅠ)。结果表明:58.6%(34/58)猪源多重耐药大肠杆菌菌株为Ⅰ型整合酶阳性,表明猪源大肠杆菌的多重耐药性与整合子携带高度一致。     

猪和野生动物源大肠杆菌及沙门菌中磺胺类药物耐药基因的检测

对从四川省10个规模化猪场和16种野生动物的粪样中分离鉴定出的67株大肠杆菌、57株沙门菌进行了药敏试验。结果，猪源和野生动物源分离菌对磺胺类药物的耐药率分别为72．0％（72／100）和29．2％（7／24）。根据GenBank中登录的序列，设计了3对特异性引物，对磺胺类药物的耐药基因Sul1、Sul2、Sul3进行了三重PCR检测。在这124株细菌中，Sul1基因的检出率最高，为47．6％（59／124），Sul2基因的检出率为17．7％（22／124），Sul3基因的检出率为18．5％（23／124）。药敏试验结果与基因检测结果的符合率为89．9％。     

广东地区水禽源大肠杆菌耐药性和磺胺类耐药基因检测

为调查广东地区水禽源大肠杆菌磺胺类药物耐药性和磺胺类耐药基因的流行情况,采用琼脂二倍稀释法测定大肠杆菌分离株对磺胺类药物的敏感性,通过PCR方法调查磺胺耐药株携带耐药基因sul1、sul2、sul3的情况。药敏试验结果表明,256株水禽源大肠杆菌分离株对复方磺胺甲恶唑和磺胺二甲嘧啶耐药率分别为91.0%和86.7%;在248株磺胺耐药株中,sul1、sul2和sul3检出率分别为73.8%、74.6%和44.7%。表明sul1和sul2为广东地区主要携带的磺胺类耐药基因,对水禽磺胺类耐药菌株的产生起重要的作用。     

仔猪腹泻源大肠杆菌耐药性调查及耐药基因检测

对泰州地区分离的仔猪腹泻源大肠杆菌的耐药性及其携带的相关耐药基因情况进行检测,为养殖场今后合理用药提供科学依据。采用微量肉汤稀释法对分离的49株大肠杆菌进行8种抗菌药物的药敏试验;采用PCR方法对多黏菌素耐药基因mcr-1及超广谱β-内酰胺酶(ESBL)耐药基因blaCTX-M、blaSHV和blaTEM进行检测。药敏试验结果显示:大肠杆菌对氯霉素、氟苯尼考、氨苄西林、四环素、庆大霉素和恩诺沙星等的耐药率分别达到100%、97.96%、95.92%、89.80%、59.18%和51.02%;而对多黏菌素E和头孢噻呋的耐药率也达到44.90%和32.65%。进一步耐药基因检测结果显示:ESBL耐药基因中blaCTX-M的检出率最高,达到12.24%(6/49);其次为blaSHV,8.16%(4/49);有一株大肠杆菌携带blaTEM基因。其中一株同时携带blaCTX-M和blaSHV。多黏菌素耐药基因mcr-1的检出率达到30.61%(15/49),其中4株同时携带blaCTX-M基因。泰州地区分离大肠杆菌耐药情况和多重耐药现象较为严重,多黏菌素耐药基因mcr-1及ESBL耐药基因blaCTX-M、blaSHV和blaTEM的广泛分布表明这些耐药基因存在快速传播的风险。因此,有必要加强猪场细菌耐药性监测。