咖啡酸锗对小鼠U14瘤的抑制作用及细胞凋亡机制的研究

为了研究咖啡酸锗对小鼠U14瘤的抑制作用及其细胞凋亡机制,试验采用MG-P染色、透射电镜和免疫组化方法观察了U14瘤细胞的凋亡及瘤细胞中Bax和Bcl-2蛋白表达情况。结果表明:MG-P染色及透射电镜观察可见,咖啡酸锗试验组出现较多的凋亡细胞,可见典型的细胞凋亡形态特征;免疫组化试验显示,咖啡酸锗各剂量组能下调Bcl-2蛋白表达(P0.05),上调Bax蛋白表达(P0.01或P0.05)。说明咖啡酸锗能抑制小鼠U14瘤的生长,并能诱导U14瘤细胞凋亡,这可能是其发挥抗肿瘤作用的主要机制之一。     

云南松松塔提取物对H22肝癌小鼠的作用研究

观察云南松松塔乙醇提取物(PEA)、碱水提取醇沉物(PED)对H22肝癌小鼠的影响。将H22腹水瘤模型小鼠随机分组,灌胃给药,1次/d,治疗10 d。观察各小鼠一般状况及20 d内的死亡情况,计算生命延长率。建立H22实体瘤模型,分组及给药同前。给药第1天开始,隔天测量1次各小鼠肿瘤直径(mm),计算肿瘤体积;末次给药24 h后,取脾脏观察T细胞和B细胞刺激指数(SI)、NK细胞和CTL细胞杀伤活性;取瘤块,HE染色观察肿瘤细胞形态学变化。结果表明,PEA、PED各剂量组小鼠的生存质量较模型组提高,生命延长率最大分别为40.71%和51.33%;平均肿瘤体积较模型组显著减小,最大抑瘤率分别达50.06%和61.58%;T细胞和B细胞SI、NK细胞和CTL细胞杀伤活性较模型组显著升高。PEA、PED各剂量组正常肿瘤细胞减少,坏死面积增大,脂肪细胞增多。结果表明,PEA、PED可以提高H22肝癌小鼠的生存质量,延长生存期,抑制肿瘤生长,其机制与增强T细胞和B细胞转化能力,提高NK细胞和CTL细胞杀伤活性有关。     

蕨菜总黄酮对宫颈癌作用的研究

为了研究蕨菜中总黄酮含量及其对宫颈癌的抑制作用, 试验通过建立小鼠宫颈癌U14模型及腹水瘤模型,研究蕨菜总黄酮体内抗宫颈癌活性及对小鼠免疫功能的影响,并测与肿瘤发生相关联的总抗氧化能力、超氧化物歧化酶、丙二醛 、谷胱甘肽还原酶指标来确定药物是否对肿瘤具有治疗作用.结果表明蕨菜总黄酮能够显著抑制实体瘤生长,提高U14腹水瘤模型小鼠的生命延长率,同时能够增强小鼠的抗氧化能力和清除自由基的能力,这很可能是蕨菜黄酮抗肿瘤作用的机制之一.     

新城疫病毒复制对其溶瘤作用影响的初步分析

本研究旨在明确新城疫病毒(NDV)溶瘤作用是否依赖其复制水平,并改进NDV溶瘤机制研究模型。以NDV疫苗株LaSota感染人肿瘤细胞系HCT116、A549和人非肿瘤细胞系HEK293T为研究模型;RT-qPCR检测NDV在各细胞系的基因组复制水平;Western blot检测NDV在各细胞系的蛋白表达水平;利用流式细胞术检测NDV感染对各细胞系的细胞周期和细胞凋亡的影响。结果表明,NDV在三个细胞系内的基因组复制水平和蛋白表达水平没有显著差异,但对三个细胞系的溶瘤作用存在明显差异;进一步流式细胞术检测发现,NDV感染能诱发HEK293T和HCT116的细胞周期发生G1期停滞,但对A549的细胞周期没有明显影响;此外,NDV感染24 h后,A549细胞以早期凋亡为主,而HCT116细胞以坏死/晚期细胞凋亡为主。NDV的溶瘤作用并不依赖于其复制水平,而且NDV对不同类型肿瘤细胞的溶瘤作用存在不同机制。     

新城疫病毒复制对其溶瘤作用影响的初步分析

本研究旨在明确新城疫病毒（NDV）溶瘤作用是否依赖其复制水平,并改进NDV溶瘤机制研究模型。以NDV疫苗株LaSota感染人肿瘤细胞系HCT116、A549和人非肿瘤细胞系HEK293T为研究模型;RT-qPCR检测NDV在各细胞系的基因组复制水平;Western blot检测NDV在各细胞系的蛋白表达水平;利用流式细胞术检测NDV感染对各细胞系的细胞周期和细胞凋亡的影响。结果表明,NDV在三个细胞系内的基因组复制水平和蛋白表达水平没有显著差异,但对三个细胞系的溶瘤作用存在明显差异;进一步流式细胞术检测发现,NDV感染能诱发HEK293T和HCT116的细胞周期发生G1期停滞,但对A549的细胞周期没有明显影响;此外,NDV感染24 h后,A549细胞以早期凋亡为主,而HCT116细胞以坏死/晚期细胞凋亡为主。NDV的溶瘤作用并不依赖于其复制水平,而且NDV对不同类型肿瘤细胞的溶瘤作用存在不同机制。     

鄂尔多斯高原碱湖钝顶螺旋藻多糖的免疫及抗肿瘤作用的研究

为了研究鄂尔多斯高原碱湖钝顶螺旋藻多糖的抗肿瘤作用和免疫作用,试验采用S180腹水瘤模型,观察鄂尔多斯高原碱湖钝顶螺旋藻多糖不同剂量组小鼠的生存时间、生存状况、肿瘤分布及瘤体外观,测定多糖对小鼠免疫器官指数的影响。结果表明:高、中、低3个剂量的钝顶螺旋藻多糖均能改善腹水瘤小鼠的生存状况,延长小鼠的生存时间,缩小肿瘤在体内的扩散范围;不同剂量组小鼠胸腺指数和脾脏指数均高于荷瘤对照组,以中剂量组作用效果最为显著(P0.05),3个剂量组之间差异均不显著。说明鄂尔多斯高原碱湖钝顶螺旋藻多糖能够抑制肿瘤在小鼠体内的生长与扩散,改善肿瘤小鼠的生存质量,同时促进小鼠免疫器官的生长发育,从而增强免疫功能。     

受体相互作用蛋白1(RIP1)对BCG诱导小鼠巨噬细胞凋亡的调控作用

旨在通过构建受体相互作用蛋白1(RIP1)腺病毒干扰载体,研究其对BCG诱导的RAW264.7细胞凋亡相关指标的影响,以探讨其在BCG诱导RAW264.7凋亡过程中的调控作用。笔者构建RIP1腺病毒干扰载体,并转染感染BCG的小鼠RAW264.7细胞系,利用流式细胞仪检测各处理细胞凋亡率、细胞线粒体膜电位、细胞活性氧水平及细胞周期等指标,并用Western blot检测凋亡相关蛋白的表达水平。结果显示:BCG感染显著上调了RIP1的蛋白表达水平并提高了小鼠巨噬细胞RAW264.7的凋亡率,当RIP1被干扰后,BCG感染后的RAW264.7细胞凋亡率和活性氧水平显著降低,而促凋亡蛋白Bax表达量显著下调,线粒体膜电位和抑凋亡蛋白表达量上调。同时,BCG感染后细胞周期滞留于G_1期。BCG感染可有效上调RIP1表达量并诱导RAW264.7细胞凋亡。RIP1通过下调BCG感染后RAW264.7细胞的线粒体膜电位,上调活性氧含量并提高凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2比值,使细胞周期阻滞于G_1期从而参与诱导细胞凋亡。     

双峰驼自然发酵乳对小鼠腹水型肝癌细胞H22的影响

为了观察苏尼特双峰驼自然发酵乳在体内对小鼠腹水型肝癌H22细胞的细胞周期变化的影响,采取在给小鼠接种肿瘤前4天给予苏尼特双峰驼自然发酵乳,接种肿瘤后继续按预定剂量给予12d的方法进行试验,然后计算抑瘤率、脾脏指数、胸腺指数,检测增殖细胞核抗原(PCNA)表达率,用流式细胞仪检测肿瘤细胞周期变化.结果表明苏尼特双峰驼自然发酵乳高剂量组的抑瘤率为35.83%,中剂量组为31.94%,低剂量组为15.56%;脾脏指数、胸腺指数都显著提高(P<0.01或P<0.05);苏尼特双峰驼天然发酵乳对小鼠H22肝癌肿瘤组织的PCNA表达有下调作用,可阻止肿瘤细胞的增殖,抑制其生长.流式细胞仪检测发现,苏尼特双峰驼自然发酵乳可使肿瘤细胞的细胞周期阻滞在S期.因此说明,苏尼特双峰驼自然发酵乳在体内有抑瘤作用,其机制与提高机体免疫力,使细胞周期阻滞并可能继而诱发凋亡有关.     

C_(17)-吡唑琳基甾体衍生物诱导Hela细胞凋亡研究

通过电镜、AO/EB染色检测细胞形态学变化,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率,通过检测Caspase活性及相关凋亡蛋白的变化确定C17-吡唑琳基甾体衍生物1诱导细胞凋亡的机制。经化合物1处理后的Hela细胞出现典型的凋亡特征,细胞凋亡率与处理时间呈正相关,同时Caspase-3与Caspase-9活性也逐渐增加,而促凋亡蛋白Bax表达量上升,抑凋亡蛋白分子Bcl-2表达量显著下降。说明C17-吡唑琳基甾体衍生物1通过线粒体通路诱导Hela细胞凋亡。     

咖啡酸对玉米赤霉烯酮诱导小鼠卵巢颗粒细胞凋亡的保护作用

卵巢颗粒细胞通过与卵母细胞相互作用及其自身分泌作用为卵泡的形成和发育成熟提供特殊的微环境。多种有害刺激可引起颗粒细胞凋亡和代谢失调从而降低卵母细胞质量,对胚胎的形成产生负面影响。玉米赤霉烯酮（zearalenone,ZEA）是畜禽养殖业中常见的造成卵巢颗粒细胞损伤的霉菌毒素,且缺少有效治疗药物。因此,本试验用ZEA造成小鼠卵巢颗粒细胞损伤,探究咖啡酸对ZEA诱导的小鼠卵巢颗粒细胞凋亡的保护作用。通过机械法分离小鼠卵巢颗粒细胞;运用间接免疫荧光法对分离出的细胞进行鉴定;使用MTT法测定咖啡酸对正常小鼠卵巢颗粒细胞活性的影响;选取200、100和50 μg·mL^-1咖啡酸分别与ZEA共处理颗粒细胞,同时设置细胞对照组和ZEA模型组,24 h后显微镜观察细胞形态及贴壁情况,MTT法检测细胞活力;qRT-PCR技术检测caspase-3 mRNA的表达;Western blot检测cleaved-caspase-3和cleaved-PARP蛋白水平。结果发现,FSHR阳性染色大量出现在试验组细胞胞浆中,提示分离到的细胞是小鼠卵巢颗粒细胞;咖啡酸对卵巢颗粒细胞没有毒性作用且细胞活力均在90%以上;与空白对照组细胞相比,ZEA组细胞体积较小,贴壁较差,细胞间隙增大,细胞活力显著降低（P<0.001）,caspase-3 mRNA相对表达量以及cleaved-caspase-3和cleaved-PARP蛋白表达水平显著升高（P<0.001）,而给予咖啡酸处理后细胞间隙减小,贴壁紧密,细胞活力显著升高（P<0.001）,显著降低ZEA诱导的caspase-3 mRNA含量增加（P<0.001）,显著降低凋亡相关蛋白cleaved-caspase-3和cleaved-PARP的表达（P<0.001）。本研究发现,咖啡酸可通过抑制ZEA诱导的细胞凋亡,恢复颗粒细胞活性。     

MDCC-MSB-1细胞增殖抑制机制研究进展

MDCC-MSB-1细胞是鸡马立克氏病毒(MDV)诱导产生的T淋巴细胞增生性肿瘤细胞系之一,已被作为模型广泛应用于抗肿瘤药物的研究中。本文旨在探讨与MDCC-MSB-1细胞周期被阻滞在G1期的调控因子作用机制,以及诱导MDCC-MSB-1细胞凋亡的信号传导通路。MDV所致瘤细胞增殖抑制机制的深入研究,为人类肿瘤病的治疗研究提供良好的动物模型展望,也为新型药物的开发开辟出新的思路。     

树突状细胞和抗原负载树突状细胞诱导特异性CTL抗肿瘤效应的形态学观察

为了给肿瘤的生物学治疗提供形态学基础,试验分离和培养树突状细胞(DC),制备B16黑色素瘤细胞抗原并进行共培养,即为抗原负载树突状细胞(ADC);建立B16黑色素瘤小鼠模型,于瘤周围皮下注射DC和ADC,测量注射前后各组小鼠的瘤体积,比较其抑瘤作用;应用光镜和透射电镜观察DC和ADC诱导特异性CTL抗肿瘤效应的形态学表现。结果表明:试验组DC和ADC诱导机体抗肿瘤效应显著,与对照组相比差异显著(P0.05);光镜下DC和ADC主要分布在皮下组织、癌组织周围,特别是癌巢周边;透射电镜下与ADC接触的淋巴细胞形态不规则,淋巴细胞与肿瘤细胞密切接触,大量肿瘤细胞凋亡、坏死。     

三氧化二砷诱导鸡MD肿瘤细胞凋亡及对细胞内钙离子浓度的影响

为探讨As2O3诱导MD肿瘤细胞株凋亡的机制,采用MTT法检测As2O3对MDCC-MSB1的抑制作用.采用荧光显微镜观察细胞形态学变化,DNA Ladder法检测细胞凋亡,Fura-2/AM负载双波长荧光分光光度计检测细胞内游离钙离子浓度([Ca2 ]i)变化,观察A2O3对鸡MD肿瘤细胞株MDCC-MSB1的影响.结果显示:As2O3能抑制鸡MD肿瘤细胞株MDCC-MSB1的生长,呈剂量依赖关系(P<0.05或P<0.01);在荧光显微镜下可见As2O3作用后MDCC-MSB1细胞呈现典型的凋亡特征,并出现典型的DNA Ladder,双波长荧光分光光度计检测结果显示:As2O3作用后的MDCC-MSB1细胞内[Ca2 ]i升高(P<0.05或P<0.01),呈剂量依赖关系.As2O3能明显抑制鸡MD肿瘤细胞株MDCC-MSB1细胞的生长,并诱导其发生凋亡,细胞内[Ca2 ]i高可能是其诱导细胞凋亡的机制之一.     

不同毒力马耳他种布鲁氏菌体内外诱导细胞凋亡的研究

为探究不同毒力马耳他种布鲁氏菌能否在体内外诱导凋亡以及诱导凋亡程度的差异,本研究将M28(强毒株)和M5-90(疫苗株)以MOI=100感染小鼠巨噬细胞系RAW264.7,利用激光共聚焦显微镜观察和流式细胞术检测凋亡产物caspase3/7。结果显示:M5-90和M28在体外细胞水平均能够诱导RAW264.7细胞凋亡,且M5-90促进细胞凋亡能力高于M28。然后将M28和M5-90以1×10~6 cfu的剂量接种BALB/c小鼠,分别在接种后3 d、7 d和42 d迫杀小鼠,取小鼠脾脏组织制备切片,经HE染色后进行形态学观察,利用透射电镜观察并通过Tunel法检测细胞凋亡。结果显示M5-90和M28感染后均可诱导小鼠脾脏细胞凋亡,凋亡细胞主要为T淋巴细胞。本研究为布鲁氏菌诱导宿主细胞凋亡和布鲁氏菌致病机理研究奠定了基础。     

高温应激诱导奶牛乳腺细胞生长周期阻滞

实验通过台盼蓝染色、MTT、细胞流式等方法研究高温(40℃/41℃)对乳腺细胞活性、细胞周期及凋亡的影响。结果表明,高温可以抑制乳腺细胞的增殖,使细胞产生S、G2期阻滞,诱导乳腺细胞凋亡,并随高温强度的增加而作用增强。试验提示高温可诱导乳腺细胞周期阻滞,抑制细胞增殖。     

凋亡素诱导的肿瘤细胞凋亡

细胞凋亡是机体维持自身稳定的一种基本生理机制 ,并贯穿于整个生命活动。细胞凋亡异常可导致一些疾病的发生 ,如肿瘤的发生。同时 ,细胞凋亡的可诱导性也为肿瘤治疗提供了新的思路。凋亡素是来源于鸡贫血病毒的一个小分子蛋白。它能够选择性地诱导肿瘤细胞的凋亡 ,而对正常二倍体的细胞无任何毒副作用 ,并且正常细胞对凋亡素具有耐受性。凋亡素诱导肿瘤细胞凋亡既不需要依赖 p53 ,也不会被bcl-2的过表达所抑制。凋亡素还能诱导人成骨肉瘤细胞多药耐药株 R-OS-73 2的细胞凋亡。这些特点使凋亡素成为一种新型的候选抗肿瘤制剂。     

伏马毒素B_1对人脐静脉血管内皮细胞的毒性作用研究

为探究伏马毒素B_1(FB_1)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)的毒性及作用机制,采用不同质量浓度的FB_1处理HUVEC,通过CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期,荧光显微镜观察细胞氧化应激,流式细胞术检测线粒体膜电位变化,Hoechst33342染色检测细胞凋亡,荧光定量PCR检测细胞凋亡相关基因的转录情况。结果显示:FB_1处理组在低质量浓度(2.5、5μg·mL~(-1))短时间(6、12h)处理后细胞活力变化不显著,超过此剂量和时间细胞活力显著降低(P0.05或P0.01),且质量浓度为10、20μg·mL~(-1) FB_1处理组活性氧(ROS)的荧光信号增强;FB_1处理组细胞周期由G_0/G_1期向S期转换时阻滞,细胞线粒体膜电位降低,细胞凋亡相关基因Caspase-3转录升高,Bcl-2转录显著降低(P0.05),Caspase-9和Bax转录极显著升高(P0.01)。结果表明,FB_1对人脐静脉血管内皮细胞有毒性作用,能抑制细胞增殖,使细胞周期阻滞在G0/G1期;能通过线粒体途径诱导HUVEC凋亡。研究结果为深入研究FB_1对人类细胞的毒性作用机制及相关疾病治疗奠定基础。     

酸枣仁皂苷A对U251细胞凋亡的影响

为了探究不同浓度的酸枣仁皂苷A(JuA)对胶质瘤U251细胞凋亡的影响，本试验采用体外常规方法培养U251细胞，设空白对照组及不同浓度的JuA干预组；用Muse^TM细胞分析仪检测各组细胞凋亡率变化；用Hoechst 33258染色后激光共聚焦显微镜下观察细胞形态学改变；用AO/EB染色进一步分析不同浓度JuA干预后U251细胞的凋亡情况。Muse^TM细胞分析结果显示，与空白对照组相比，随着JuA浓度增大，U251活细胞数目明显减少(P<0.01);Hoechst 33258染色阳性细胞数与JuA浓度呈正相关；通过AO/EB染色发现，JuA可明显促进细胞凋亡(P<0.01)。结果表明，50μmol/L JuA对胶质瘤U251细胞具有明显的毒性作用，可促使U251细胞凋亡。     

线粒体在细胞凋亡中的作用

细胞凋亡属机体的生理机制 ,是多细胞生物更新正常细胞和清除异常细胞的重要手段 ,线粒体为细胞各种生命活动提供能量 ,二者紧密相关 ;线粒体参与细胞凋亡 ,并且是细胞凋亡的调控中心。淋巴细胞 ,巨噬细胞 ,神经细胞 ,肿瘤细胞等的凋亡都证实了这一点 ;NO和 Ca2 诱导的细胞凋亡也通过线粒体来完成 ;在线粒体调控细胞凋亡机理的研究上也有大量研究成果 ,如 :半胱天冬酶的诱导机制 ,细胞色素 c引起细胞凋亡的机制 ,胞内氧化还原电势改变引起细胞凋亡 ,Bcl-2家族蛋白调控细胞凋亡等。但线粒体参与调控的凋亡机制并不是唯一的细胞凋亡通路。本文综述了近年来有关线粒体与细胞凋亡关系的研究进展     

肿瘤坏死因子诱导凋亡配体TRAIL的研究进展

肿瘤坏死因子诱导凋亡配体TRAIL作为肿瘤坏死因子超家族成员之一,其能和死亡受体相结合从而选择性诱导肿瘤细胞凋亡,却不会影响正常细胞,其正逐渐成为临床上新型抗肿瘤制剂。本文从肿瘤坏死因子诱导凋亡配体TRAIL何受体诱导凋亡机制入手,探讨其在临床方面的应用。