重组猪γ干扰素对猪瘟弱毒疫苗免疫效果的影响

为研究rPoIFN-γ对HCV血清抗体产生的影响,选28日龄健康仔猪16头,随机分为4组,第1组为对照组,2~4组为试验组。各组均免疫HCV疫苗2头份,同时第1组分点肌注生理盐水4 mL/头;2~4组分别分点肌注rPoIFN-γ注射液4万单位/头(4 mL)、40万单位/头(4mL)、400万单位/头(4mL)。结果显示,免疫HCV疫苗后第28d,2组血清抗体水平显著高于第1组(P0.05);试验第21、28d和42d,第3组血清抗体水平显著高于第1组(P0.05);试验至28d和35d,第4组血清抗体水平显著高于第1组(P0.05)。试验结果表明,肌肉注射一定剂量的rPoIFN-γ促进了HCV血清抗体的产生,增强了疫苗免疫效果;适宜注射剂量为40万单位/头。     

猪繁殖与呼吸综合征植物亚单位疫苗的免疫学研究

目前,防控猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)主要采用灭活疫苗和弱毒活疫苗。然而,灭活疫苗的效率十分有限,弱毒活疫苗的安全问题又令人担忧,所以研制新型疫苗非常必要。本试验尝试使用转基因植物这种经济有效且有可扩展性的体系表达和传递病毒蛋白,并制成PRRS口服亚单位疫苗。通过转基因技术利用玉米愈伤组织表达PRRSV的病毒膜蛋白M蛋白。小鼠口服转基因植物组织可诱导体内产生血清抗体和肠系膜抗原特异性抗体,且血清抗体和黏膜抗体表现出病毒中和活性。终免后血清和粪便中的中和抗体滴度可分别达到6.7和3.7。接种动物脾细胞内也可检测到PRRSV特异性IFN-γ反应。结果表明,转基因玉米是一种有效的PRRS亚单位疫苗产品,口服后可激发机体产生抗PRRS的系统免疫应答和黏膜免疫应答。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(HuN4-F112株)诱导特异性IFN-γ~+T细胞反应的研究

为研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)活疫苗(HuN4-F112株)诱导的特异性IFN-γ+T细胞反应与其保护作用的相关性,本研究将25头45日龄PRRSV阴性健康仔猪随机均分为5组,第1～3组分别于0 d、7 d、14 d免疫HuN4-F112疫苗(1头份/头,106.0TCID50),第4组为攻毒对照组,第1～4组于21 d用PRRSV强毒株HuN4-F5攻毒(3 mL/头,104.0TCID50),第5组为空白对照组。疫苗免疫后1周～2周产生部分保护,3周产生完全保护,第1～4组保护率分别为5/5、2/5、2/5和0/5。中和抗体检测显示免疫组免疫后7 d和14 d所有猪只均未检测到中和抗体,免疫后第21 d第1组4头猪检测到低效价(≤1∶8)的中和抗体。疫苗免疫后血清中IFN-γ含量略有升高,但变化不大,整体都处于较低的水平。采用酶联免疫斑点技术(ELISpot)检测PRRSV特异性IFN-γ+T细胞反应。免疫组免疫后7 d、14 d、21 d百万外周血单个核细胞中IFN-γ+T细胞频数分别为0±0、0±2、5±8,组间和组内统计分析显示差异不显著。结果表明在HuN4-F112株疫苗早期保护中,IFN-γ参与的特异性细胞免疫反应较弱,在早期免疫阶段难以发挥主要作用。本研究为了解PRRSV疫苗免疫保护机制提供参考,同时,也提示需要采用更多的指标和方法来评价该疫苗诱导的免疫反应。     

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)疫苗不同免疫程序对细胞因子分泌的影响

为分析仔猪首次免疫猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)弱毒疫苗对血清细胞因子分泌水平的影响,本试验筛选PRRSV抗原与抗体均为阴性的7日龄仔猪40头,平均分为4组,其中试验A、B、C组均为14日龄首次免疫经典弱毒疫苗,试验A组35日龄二免用高致病性灭活疫苗,试验B组35日龄二免用经典弱毒疫苗,试验C组35日龄注射生理盐水,对照组均注射生理盐水。分别于首免后1,2,3周和二免后1,2,3,4,5,6周前腔静脉采血分离血清,采用细胞因子ELISA方法检测IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-10和IL-12细胞免疫水平。结果显示,仔猪14日龄首次免疫弱毒疫苗后能迅速分泌细胞因子,首免3周以内,试验组IFN-γ分泌量均高于对照组,差异极显著(P0.01);试验组TNF-α分泌量高于对照组,差异极显著(P0.01),且试验A组试验B组试验C组,其差异不显著(P0.05);试验组IL-2分泌量高于对照组,试验A组最高,其差异显著(P0.05);试验组IL-10分泌量高于对照组,试验C组最高,其差异显著(P0.05);试验组IL-12分泌量高于对照组,试验A组最高,其差异显著(P0.05)。35日龄二免弱毒疫苗或灭活疫苗3周后,除IFN-γ外,试验A组的TNF-α、IL-2、IL-10和IL-12分泌水平均高于试验B组和试验C组。结果表明,14日龄首免PRRSV弱毒疫苗和35日龄二免PRRSV灭活疫苗的免疫效果优于仅单独2次免疫PRRSV弱毒疫苗或1次免疫PRRSV弱毒疫苗。     

IFN-γ-ELISpot方法用于评价猪伪狂犬病疫苗免疫效果

鉴于常用的抗体检测方法不能完整反映免疫猪获得针对猪伪狂犬病毒的保护力,有必要建立猪伪狂犬病病毒(PRV)特异性IFN-γ的酶联免疫斑点检测(ELISpot)方法,并评估伪狂犬病疫苗细胞免疫的免疫效果。依照ELISpot基本操作流程,摸索PRV作为刺激原的最适浓度、外周血单个核细胞(PBMC)密度和作用时间以建立并优化该方法。将20头gB抗体检测阴性猪,随机分为单独弱毒疫苗免疫组、单独灭活疫苗免疫组、弱毒疫苗-灭活疫苗联合组及对照组,免疫后攻毒。利用所建方法,结合gB-ELISA、中和试验及攻毒保护试验,评价上述三种免疫程序的效果。试验结果表明:IFN-γ-ELISpot最佳条件为刺激原浓度2μg·孔~(-1)、外周血单核细胞(PBMC)浓度106·孔~(-1),培养时间36h。一免弱毒疫苗二免灭活疫苗组二免后2周,试验猪中和抗体效价可达1∶14.48,ELISpot斑点数可达(151.8±26.61)个·孔~(-1),且该免疫程序下,试验猪攻毒后体温、鼻拭子排毒及临床症状均低于其余试验组,攻毒8d后仅表现呼吸道症状;单独灭活疫苗免疫组二免后2周,试验猪的中和抗体效价可达1∶32.36,而ELISpot斑点数仅为(40.4±9.07)个·孔~(-1);单独弱毒疫苗免疫组二免后2周,试验猪的中和抗体效价仅为1∶1.36,但ELISpot斑点数可达(189.6±27.36)个·孔~(-1)。综合分析攻毒试验结果和ELISpot斑点数之间的相关性,本试验所建立的IFN-γ-ELISpot可用于猪伪狂犬病疫苗的细胞免疫评估,为免疫程序的评价和选择提供有效手段。     

鸡IFN-γ重组鸡痘病毒对鸡传染性腔上囊炎MB43弱毒疫苗免疫鸡免疫应答的影响

将重组鸡痘病毒（rFPV—IFN-γ）与IBDMB43弱毒疫苗联合接种SPF鸡，研究重组鸡IFN-γ对IBD疫苗免疫效果的影响。结果显示，rFPV—IFN-γ和MB43弱毒疫苗联合免疫组（MB43＋rFPV-IFN-）＂）及rlFN-γ和MB43弱毒疫苗联合免疫组（MB43＋rIFN-γ）在免疫后第2周即可检出ELISA抗体，比MB43疫苗单独免疫组早1周。用IBDVGx株攻击后，MB43＋rFPV-IFN-γ组和MB43＋rIFN-γ组免疫鸡的脾只有个别淋巴细胞核浓缩、核崩解，少数滤泡萎缩变性坏死；胸腺损伤程度轻于MB43疫苗单独免疫组和非免疫对照组。免疫后1周，3个免疫组外周血CD8^＋T淋巴细胞含量均显著高于非免疫对照组，CD4^＋T淋巴细胞含量变化不明显；攻毒后第2周，3个疫苗免疫组CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞含量均显著升高，各组之间CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞含量无明显差异。证实，rFPV—IFN-γ和rIFN-γ可加强疫苗的细胞免疫和体液免疫应答。     

规模猪场母猪繁殖与呼吸综合征的临床免疫试验

应用猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)弱毒疫苗、灭活疫苗、自家组织灭活疫苗对PRRS阳性场母猪,PRRS抗体阴性母猪进行临床免疫试验,比较不同PRRS弱毒疫苗、灭活疫苗与自家组织苗的临床免疫效果及安全性,应用ELISA监测PRRS抗体,结果表明PRRS弱毒疫苗免疫母猪,经临床观察全部得到保护,安全有效,未发现流产、早产等不良临床反应.     

仔猪病毒性腹泻疫苗免疫效果比较

为探讨商品化猪病毒性腹泻三联弱毒疫苗和二联灭活疫苗对仔猪免疫效果的影响,通过前期妊娠母猪跟胎免疫,随机选择胎次相近、无病史新生仔猪80头,随机分成3个试验组和1个对照组。对照组不免疫;试验组仔猪于28日龄首免和65日龄二免三联弱毒疫苗或二联灭活疫苗,应用ELISA试剂盒进行血清抗体检测。结果表明:试验组抗体阳性率均高于对照组(P0.01),试验组间抗体阳性率第3组高于第1组和第2组(P0.05),腹泻疫苗在母猪妊娠期接种对仔猪表现出一定的保护力,交替免疫三联弱毒疫苗或二联灭活疫苗效果最佳。本研究为猪病毒性腹泻疫苗免疫提供可行依据。     

不同猪繁殖与呼吸综合征减毒活疫苗在猪体内的动态学及临床免疫效果比较

为了比较国内不同猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)弱毒疫苗的安全性和有效性,本研究将17头PRRSV抗原和抗体双阴性的28日龄仔猪随机分为4组,TJM-F92株弱毒疫苗组,JXA1-R株弱毒疫苗组,经典株弱毒疫苗(VR2332来源)组和注射生理盐水对照组。免疫后7,14,21,28d分别采血,ELISA抗体检测试剂盒检测PRRSV抗体,结果从免疫后14d起PRRSV抗体开始转阳,但各试验组的抗体水平无明显差异。对免疫后14d所采血样进行病毒分离,TJM-F92株免疫组未分离到PRRSV疫苗毒,JXA1-R株免疫组2头猪分离到PRRSV疫苗毒,经典株免疫组只1头猪分离到PRRSV疫苗毒。免疫后28d,所有猪接种PRRSV强毒株TJ株进行攻毒试验,观察各组猪的体温、临床症状;攻毒后21d,所有猪安乐死,剖检观察肺部病理变化。结果显示,TJM-F92株和JXA1-R株免疫组均未出现临床发病猪,经典株免疫组2头猪出现临床发病,对照组全部临床发病,死亡1头。经典株免疫组临床发病猪出现典型PRRSV感染肺部病理变化,而TJM-F92株和JXA1-R株免疫组均未发现典型PRRSV感染肺部病理变化。本研究证实TJM-F92株和JXA1-R株对高致病性PRRSV的免疫效果优于经典株弱毒疫苗,TJM-F92疫苗株与JXA1-R疫苗株相比,疫苗毒在体内带毒时间更短,安全性更高。     

猪圆环病毒2型感染对猪瘟弱毒疫苗接种猪免疫应答的影响

为探索猪圆环病毒2型(PCV2)感染对猪瘟(CSF)弱毒疫苗接种猪免疫应答的影响,将20头28 d断奶仔猪随机分为V-I、I-V、V和C4组,5头·组-1.V-I组在接种CSF弱毒疫苗后2d感染PCV2;I-V组在感染PCV2 后2d接种CSF弱毒疫苗;V组只接种CSF弱毒疫苗;C组为空白对照组.共免疫2次,间隔21 d.免疫后定期检测血清CSFV特异性抗体水平、外周血淋巴细胞(PBLC)增殖活性和PBLC中IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10 mRNA的表达水平.结果显示:在CSF弱毒疫苗免疫前或免疫后感染PCV2,均会导致CSFV抗体水平低下,血清抗体阳转率下降,PBLC增殖活性降低.初次免疫后,V-I与I-V组的PBLC内IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10 mRNA的表达量严重不足,其中V-I组的表达量最低.加强免疫后V-I与I-V组的PBLC内IFN-γ与IL-10的表达失衡,IL-2和IL-4的表达缺乏,其中I-V组的细胞因子表达失衡和缺乏更严重.上述研究表明,CSF弱毒疫苗免疫前或免疫后感染PCV2均会影响机体的体液和细胞免疫应答水平,导致PBLC内细胞因子的表达严重抑制和紊乱.     

藏猪伪狂犬病弱毒疫苗和灭活疫苗的免疫效果比较研究

为研究猪伪狂犬病弱毒疫苗和灭活疫苗对藏猪免疫效果的差异,笔者于2016年5月份在西藏林芝某养猪散养户进行两种疫苗免疫效果比较试验,随机抽取29日龄100头体重相近的健康藏猪仔猪(不存在母源抗体),分成对照组(灭活疫苗组,n=50)和试验组(弱毒疫苗组,n=50),试验组肌肉注射猪伪狂犬病弱毒疫苗,对照组肌肉注射猪伪狂犬病灭活疫苗;分别于免疫前1天,免疫后第20,40,60天检测两组仔猪的抗体水平,记录生长和发病情况。结果表明:免疫后第20,40,60天,试验组藏猪仔猪的伪狂犬病毒抗体阳性率由90%降到82%,对照组的抗体阳性率则由74%降至52%;两组仔猪在90日龄时的体重差距较小。可见藏猪仔猪使用伪狂犬病弱毒疫苗的效果显著优于灭活疫苗。     

PRRS疫苗免疫策略研究进展:疫苗程序改变为弱毒苗和灭活苗组合使用能增加免疫效果

<正>1实验室研究本研究对猪I型PRRS活疫苗(MLV)免疫接种和MLV与灭活疫苗(KV)的组合免疫接种的免疫应答进行了比较。实验设计如下(如表1),将32头小猪随机分成4组,每组8头。A组、B组、C组各组猪于1.5月龄时注射I型PRRS弱毒疫苗,D组为不注射疫苗的对照组。在猪4.5月龄时,A组注射第2次I型PRRS弱毒疫苗,B组和C组注射I型PRRS灭活疫苗(PROGRESSIS,法国Marial公司生产,2 mL,肌肉注射)。在猪5.5月龄时,C组再注     

PRRS不同疫苗组合对仔猪血清抗体水平和CD3、CD4、CD8分子表达量的影响

为了探究猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)不同疫苗组合对仔猪血清抗体水平和CD3、CD4、CD8分子表达量的影响,试验于规模化猪场筛选健康未免疫的仔猪30头,随机分为3个组。其中试验Ⅰ组、试验Ⅱ组和对照组均在仔猪14日龄首次免疫经典猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)弱毒疫苗,试验Ⅰ组仔猪在35日龄加强免疫高致病性PRRSV灭活疫苗,试验Ⅱ组仔猪在35日龄加强免疫经典PRRSV弱毒疫苗,对照组在14,35日龄均注射0.9%Na Cl溶液,然后对各组仔猪在不同时间点通过前腔静脉采血,应用ELISA法检测血清中PRRSV抗体和CD3、CD4、CD8分子表达量。结果表明:除了CD8分子外,试验Ⅰ组和试验Ⅱ组抗体水平和CD3、CD4分子表达量在部分时间点显著或极显著(P0.05或P0.01)高于对照组,但两个试验组之间无统计学差异。说明在生产实践中PRRSV弱毒疫苗和灭活疫苗联合使用能产生一定的效果,从安全角度考虑,建议采用经典弱毒疫苗结合高致病性灭活疫苗进行免疫。     

三种猪繁殖与呼吸综合征疫苗免疫效果评价

为研究不同猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)疫苗的的免疫特性,分别采用PRRSV变异株(JXA1-R)弱毒疫苗、经典PRRSV(VR 2332)弱毒疫苗、变异株(JXA1)灭活疫苗,免疫接种PRRSV抗原和抗体阴性的健康断奶仔猪,免疫接种后70d用PRRSV变异株强毒攻毒,ELISA检测血清中PRRSV特异的抗体水平及IFN-γ、IL 2、IL 4、IL 8、IL 10的水平,并进行临床症状和肺部病理组织学观察和评分。结果表明,VR 2332、JXA1-R弱毒疫苗对免疫猪攻毒保护效果差异不显著,均为63.6%(7/11),JXA1灭活疫苗免疫攻毒保护效果较差,为36.4%(4/11)。试验还发现病毒感染猪血清中细胞因子IFN-γ和IL-10的比值可以作为评价疫苗免疫效果的一个指标。     

生物矿化的口蹄疫病毒样颗粒疫苗的免疫原性评价

生物矿化技术可以增强口蹄疫(foot-and-mouth, FMD)病毒样颗粒(virus-like particles, VLPs)的耐热性，但并无试验数据支撑矿化FMD VLPs用于临床的可行性。本研究旨在评价矿化FMD VLPs疫苗在牛和猪上的免疫原性。用VLPs和矿化VLPs免疫猪，采用液相阻断ELISA(LPBE)检测猪血清中的特异性抗体滴度，并经酶联免疫斑点试验(ELISpot)检测免疫猪外周血淋巴细胞(PBLs)经体外刺激后分泌的特异性IFN-γ。用矿化A型VLPs、矿化O型VLPs、矿化的A型和O型二价VLPs分别免疫牛，采用LPBE、中和试验、夹心ELISA检测血清中的特异性抗体、中和抗体以及IL-4和IFN-γ的含量。结果显示，VLPs与矿化VLPs免疫猪的血清抗体水平无显著差异，相对于VLPs,矿化VLPs免疫猪的PBLs分泌的IFN-γ水平高于VLPs免疫猪(P<0.05);3种疫苗免疫牛血清中IL-4和IFN-γ水平均高于PBS组，矿化二价疫苗与相应的矿化单价疫苗免疫牛的血清特异性抗体和中和抗体效价均无显著差异。综上所述，矿化VLPs对牛和猪均具有良好的...     

不同免疫程序对猪蓝耳病疫苗免疫效果的影响

为研究不同免疫程序对猪蓝耳病疫苗免疫效果的影响,本试验选取42头未免健康断奶仔猪,随机分为4组。A组对照组,B组免疫弱毒苗组,C组免疫灭活苗组,D组同时免疫弱毒苗和灭活苗组。分别在免疫前和免疫后第14,28,42,56,70天前腔静脉采血,采用ELISA方法检测特异性抗体,同时检测淋巴细胞转化率以及IFN-α、IFN-γ、TNF-α等细胞因子水平。结果显示:免疫后,B组抗体水平显著高于D组(P<0.05)、A组(P<0.01);在免疫后第42天,D组淋巴细胞转化率显著高于B组、C组(P<0.01),显著高于A组(P<0.01),免疫后第56天,B组淋巴细胞转化率高于C、D组(P<0.05);B组细胞因子水平在免疫后第14天高于其他3组,加强免疫后细胞因子水平均有所下降,在免疫后第70天时升高。结果表明,免疫蓝耳病弱毒苗组免疫效果优于免疫灭活苗组和两种疫苗同时免疫组。     

猪蓝耳病弱毒苗对猪的免疫效果分析

目的观察高致病性猪蓝耳病弱毒疫苗对猪的免疫效果。方法从某猪场选取90头仔猪,随机分为A组、B组、对照组,各30头。A组接种高致病性猪蓝耳病弱毒疫苗,B组接种高致病性猪蓝耳病灭活疫苗,C组给予生理盐水作为对照组。在免疫后28d、60d、90d时对比三组的S/P值与PRRS抗体阳性率。结果免疫28d时,A组仔猪S/P值超过2.0,增速很快,其PRRS抗体检测阳性率高达93.3%,B组为33.3%,差异显著(P0.05),有统计学意义。结论与灭活苗相比,高致病性猪蓝耳病弱毒苗抗体水平与抗体增速均更明显,免疫效果更好,因此,可优先考虑弱毒疫苗。     

禽多杀性巴氏杆菌外膜蛋白H基因重组质粒在鸡体内免疫效果的研究

为检测禽多杀性巴氏杆菌(P.multocida)外膜蛋白H基因的免疫效果,本研究利用PCR技术扩增禽P.multocida的omph基因片段,并克隆于pcDNA3.1(+)中构建重组质粒pOMPH,经体外表达检测后进行动物免疫,实验动物共分4组:pOMPH组、弱毒疫苗组、pcDNA3.1(+)空载体组和PBS对照组。免疫后对各组鸡进行免疫指标检测,并于三免后两周进行攻毒。结果显示,pOMPH免疫组和弱毒疫苗免疫组血清抗体水平持续上升,与两对照组相比差异极显著(p<0.01),并且pOMPH免疫组血清抗体水平明显高于弱毒疫苗组(p<0.05)。淋巴细胞增殖试验结果也表明,pOMPH和弱毒疫苗组的刺激值(SI值)极显著高于两对照组(p<0.01),并且重组质粒组高于弱毒疫苗组。免疫鸡外周血淋巴细胞产生的IFN-γ极显著高于两对照组(p<0.01),并且pOMPH组高于弱毒疫苗组(p<0.05)。攻毒后pOMPH组和弱毒疫苗组的保护率分别为66.7%和73.3%,表明pOMPH虽然可以为免疫鸡提供一定的保护,但效果不如商品化的弱毒活疫苗,还需采取措施进一步增强其免疫原性。     

猪乙型脑炎(HW1株)细胞灭活疫苗免疫抗体水平分析

为评估猪乙型脑炎(HW1株)细胞灭活疫苗的免疫原性,用商品化的乙型脑炎鼠脑疫苗、乙型脑炎弱毒疫苗(SA14-14-2株)以及自制乙型脑炎细胞灭活疫苗(HW1株)分别免疫仔猪,通过抗体水平监测试验、中和抗体试验、小鼠攻毒保护试验分别检测了其特异性抗体消长情况、中和抗体效价产生情况及疫苗对小鼠的攻毒保护率。结果显示,3种疫苗均能产生中和抗体,乙型脑炎细胞灭活疫苗免疫组中和抗体水平要高于鼠脑疫苗和弱毒疫苗免疫组,乙型脑炎细胞灭活疫苗和弱毒疫苗免疫组对小鼠的攻毒保护率高于鼠脑疫苗免疫组,但两者之间差异不显著。抗体消长情况显示,至8周观测期结束,鼠脑疫苗免疫组的抗体阳性率为80%,乙型脑炎细胞灭活疫苗和弱毒疫苗免疫组抗体阳性率为100%。结果表明猪乙型脑炎(HW1株)细胞灭活疫苗的免疫原性优于鼠脑灭活疫苗和弱毒疫苗。     

不同类型猪蓝耳病疫苗的免疫探讨

为科学评价不同猪蓝耳病疫苗免疫效果,选取19个规模猪场,分别使用蓝耳病国产弱毒疫苗、进口弱毒疫苗、普通灭活疫苗、猪高致病性蓝耳病疫苗进行免疫,免疫1月后,采集免疫猪群的血清与全血样品,进行PRRSV病原学和免疫抗体检测,结果显示:国产弱毒疫苗、进口弱毒疫苗、普通灭活疫苗、高致病性猪蓝耳病灭活疫苗、对照组抗体阳性率分别为86.40%、76.10%、36.70%、49.30%、31.17%。使用PRRS弱毒疫苗免疫组PRRSV变异株检出率较高,使用高致病性PRRS灭活疫苗免疫组PRRSV普通株检出率较高。此结果提示PRRS疫苗免疫后能产生一定的保护性抗体水平,但交叉免疫保护性较差。对于PRRS的防控,关键在于提高猪群PRRS抗体的水平与整齐度,同时加强饲养管理。