摩拉、尼里/拉菲种公牛促性腺激素释放激素受体(GnRHR)基因序列多态性与精液质量性状的相关分析

为了研究促性腺激素释放激素受体(GnRHR)基因与摩拉、尼里/拉菲种公牛精子质量性状的相关性,试验对28头摩拉、40头尼里/拉菲种公牛的GnRHR基因多态性位点与其2011—2016年精液质量性状的关系进行统计分析。结果表明:GnRHR基因分别与摩拉、尼里/拉菲种公牛精液质量性状具有相关性。摩拉种公牛A13 342G位点,AA型的射精量显著高于AG型(P0.05),AG型的精子密度显著高于AA型(P0.05);T17 221C位点,TT型的冻精活力显著高于TC型(P0.05)。尼里/拉菲种公牛T13 355G位点,TG型的冻精活力显著高于TT、GG型(P0.05);A13 406T位点,AA、AT型的鲜精活力显著高于TT型(P0.05),AA、AT型的鲜精活力无显著差异(P0.05);AT型的冻后活力显著高于AA、TT型(P0.05)。说明GnRHR基因可作为摩拉、尼里/拉菲种公牛精液质量性状的重要分子标记。     

促性腺激素释放激素受体(GnRHR)基因多态性及其与山羊产羔数的相关性分析

本研究采用候选基因法对与繁殖性能有关的遗传标记进行筛选,旨在为山羊高产仔数的标记辅助选择提供确切的遗传依据。参考牛的促性腺激素释放激素受体(Gonadotropin releasing hormone receptor,GnRHR)基因序列设计4对引物,采用聚合酶链式反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术检测GnRHR基因在波尔山羊以及我国西南地区9个地方山羊品种中的单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism,SNP),同时在川东白山羊、古蔺马羊和贵州白山羊3个群体中研究该基因多态性与山羊产仔数之间的相关性。结果显示,4对引物中只有引物P1扩增片段检测出多态性。对于P1的扩增片段,在不同的山羊品种中检测到AA、GG和AG 3种基因型,测序分析表明GG与AA型相比有一处单碱基突变(154G→A)。AA基因型个体在3个群体中产羔数最小二乘均值都显著高于GG和AG基因型个体(P<0.05),GA基因型个体在古蔺马羊中的产羔数显著高于GG型个体(P<0.05),而在其它2个品种中差异不显著(P>0.05)。本研究结果初步表明山羊GnRHR基因的突变与其繁殖性能有关,可能是影响山羊繁殖率的一个因素。     

不同因素对广西地区摩拉、尼里/拉菲种公牛精液质量的影响分析

为了研究不同品种、不同年龄结构、不同温度对广西地区河流型水牛种公牛精液质量的影响,选取摩拉种公牛33头、尼里/拉菲种公牛44头,对其2013—2019年的原精及冷冻精液质量检测纪录进行分析.结果:(1)摩拉种公牛的射精量显著高于尼里/拉菲种公牛(P<0.05),尼里/拉菲种公牛的原精活力显著高于摩拉种公牛(P<0.05...     

京海黄鸡促性腺激素释放激素受体基因密码子特性分析

为了了解鸡促性腺激素释放激素受体(gonadotropin releasing hormone receptor, GnRHR)基因的密码子特性,以便于为GnRHR基因的表达选择合适的外源表达系统,本研究使用在线工具CUSP、CHIPS及CodonW软件对鸡GnRHR基因的密码子特性进行分析,并与鸡、模式动物基因组和其他动物GnRHR基因密码子特性进行比较.结果显示,京海黄鸡GnRHR基因的ENc值较小,具有较强的密码子偏好性,且偏好以G/C结尾的密码子, GnRHR基因CDS序列中,GC含量大于AT含量;CodonW软件计算结果表明,京海黄鸡GnRHR基因密码子中,密码子GCC、ATC、CTC、CTG、CGC、CGG、AGC、TCC和GTG(RSCU>2)偏好性较强,且均以G/C结尾.对31条鸡基因分析表明鸡偏好密码子中有12种G/C结尾的密码子.与大肠杆菌、酵母菌和小鼠基因组密码子使用频率比较显示,京海黄鸡GnRHR基因密码子偏好性与3种生物相差很大,不适合进行外源表达.与其他动物GnRHR基因密码子偏好性比较显示,禽类GnRHR基因偏好含有或以G/C结尾的密码子,而其他物种的GnRHR基因无强烈的偏好性.聚类分析结果表明,亲缘关系近的物种之间倾向于拥有相同的密码子偏好性.     

广西冬季不同日粮对摩拉、尼里/拉菲种公牛冻精畸形率和活力的影响

为了研究广西冬季不同日粮对摩拉、尼里/拉菲种公牛冷冻精液畸形率和活力的影响,找到冬季饲喂水牛种公牛的最佳日粮,本研究选择广西壮族自治区畜禽品种改良站饲养的(4~15)岁水牛种公牛36头(摩拉20头、尼里/拉菲16头),按照品种相同、年龄结构相仿的原则分为4组,分别饲喂4种不同的日粮。结果显示:摩拉种公牛试验期冻精畸形率分别为26.73%、32.67%、27.13%、16.53%,日粮4冻精畸形率显著低于日粮2(P0.05);4组间冻精活力无显著差异(P0.05)。尼里/拉菲种公牛试验期4组冻精畸形率分别为26.11%、40.89%、18.42%、18.46%,日粮3、日粮4冻精畸形率显著低于日粮2(P0.05);其冻精活力分别为30.90%、28.70%、29.42%、33.81%,4组间冻精活力无显著差异(P0.05)。分别对摩拉、尼里/拉菲种公牛冻精畸形率与活力进行相关性分析可知,摩拉、尼里/拉菲种公牛冻精畸形率与活力呈强负相关。综合考虑,水牛种公牛在冬季饲喂精料4kg、苜蓿干草1.5 kg、燕麦干草6.5kg、青贮玉米秸秆5kg日粮搭配方案与精料4kg、苜蓿草1.5 kg、燕麦草4.5 kg、鲜象草20 kg日粮搭配方案均能使摩拉、尼里/拉菲种公牛冻精的畸形率和活力达到较好的效果。     

广西壮族自治区水牛研究所 [摩拉、尼里-拉菲水牛(原种)]

广西壮族自治区水牛研究所种畜场,是全国唯一的饲养有两个外来奶水牛品种的原种场,是中国-欧盟水牛奶业开发项目成员之一.主要任务是保种和培育优良水牛品种,向我国南方地区水牛品改提供种牛,目标是建成全国性的水牛育种中心.引种至1998年底,共繁殖摩拉水牛1 138头,尼里-拉菲水牛571头,向全国14个省(区)提供种牛累计达856头,现存栏各品种水牛365头,年繁殖犊牛150头,提供种牛80～100头.1993年和1995年又分别从印度引进优秀摩拉种公牛细管冻精2 300支,共8个系.对摩拉牛群进行血液更新,使种牛质量更进一步提高.     

促性腺激素释放激素(GnRH)结构及调控的研究进展

促性腺激素释放激素(Gn RH)最初被认为是一种下丘脑神经肽,但是越来越多的研究发现该激素具有多重功能,如参与类固醇生成、细胞增殖、受精、粘连细胞外基质和细胞迁移等生理功能的调节,并在动物的生长发育、生殖行为、妊娠、分娩等生命活动中起着至关重要的作用。主要对Gn RH的结构特点及其调控进行了综述。     

摩拉水牛和尼里-拉菲水牛PRKAA2基因SNPs检测及遗传多样性分析

为研究水牛蛋白激酶AMP活化的催化亚基α2(protein kinase AMP-activated catalytic subunit alpha 2,PRKAA2)基因多态性,本试验以摩拉水牛和尼里-拉菲水牛基因组DNA为模板,扩增PRKAA2基因外显子4及内含子3部分序列,通过常规测序法检测其SNP并进行遗传多样性分析。结果发现,PRKAA2基因外显子4内存在1个SNP位点(c.462GA),PRKAA2基因内含子3部分序列存在3个SNPs位点(IVS3.557TC、IVS3.560CT和IVS3.565GA)。经遗传多样性分析表明,在c.462GA位点的野生纯合型和杂合型比突变纯合型更有优势,IVS3.557TC和IVS3.560CT位点的突变纯合型为非优势基因型,IVS3.565GA位点杂合型为优势基因型。IVS3.565GA位点在摩拉水牛群体中处于Hardy-Weinberg非平衡状态;c.462GA位点在尼里-拉菲水牛群体中处于Hardy-Weinberg非平衡状态。4个SNPs位点在摩拉水牛群体中均为中度多态;c.462GA、IVS3.557TC位点在尼里-拉菲水牛群体中为低度多态,IVS3.560CT、IVS3.565GA位点为中度多态。IVS3.557TC位点在两个水牛群体中杂合度较低。说明摩拉水牛IVS3.565GA位点和尼里-拉菲水牛c.462GA位点的基因型频率和基因频率遗传状态不平衡,尼里-拉菲水牛群体中IVS3.557TC位点遗传变异小,选择潜力不高。4个多态位点可以构建5种单倍型,其中T-C-G-G是摩拉水牛群体和尼里-拉菲水牛群体的优势单倍型。综上,本研究检测的摩拉水牛和尼里-拉菲水牛PRKAA2基因上4个SNPs位点可为水牛标记辅助选择育种提供参考。     

摩拉水牛和尼里-拉菲水牛PRKAA2基因SNPs检测及遗传多样性分析

为研究水牛蛋白激酶AMP活化的催化亚基α2（protein kinase AMP-activated catalytic subunit alpha 2,PRKAA2）基因多态性,本试验以摩拉水牛和尼里-拉菲水牛基因组DNA为模板,扩增PRKAA2基因外显子4及内含子3部分序列,通过常规测序法检测其SNP并进行遗传多样性分析。结果发现,PRKAA2基因外显子4内存在1个SNP位点（c.462 G>A）,PRKAA2基因内含子3部分序列存在3个SNPs位点（IVS3.557 T>C、IVS3.560 C>T和IVS3.565 G>A）。经遗传多样性分析表明,在c.462 G>A位点的野生纯合型和杂合型比突变纯合型更有优势,IVS3.557 T>C和IVS3.560 C>T位点的突变纯合型为非优势基因型,IVS3.565 G>A位点杂合型为优势基因型。IVS3.565 G>A位点在摩拉水牛群体中处于Hardy-Weinberg非平衡状态;c.462 G>A位点在尼里-拉菲水牛群体中处于Hardy-Weinberg非平衡状态。4个SNPs位点在摩拉水牛群体中均为中度多态;c.462 G>A、IVS3.557 T>C位点在尼里-拉菲水牛群体中为低度多态,IVS3.560 C>T、IVS3.565 G>A位点为中度多态。IVS3.557 T>C位点在两个水牛群体中杂合度较低。说明摩拉水牛IVS3.565 G>A位点和尼里-拉菲水牛c.462 G>A位点的基因型频率和基因频率遗传状态不平衡,尼里-拉菲水牛群体中IVS3.557 T>C位点遗传变异小,选择潜力不高。4个多态位点可以构建5种单倍型,其中T-C-G-G是摩拉水牛群体和尼里-拉菲水牛群体的优势单倍型。综上,本研究检测的摩拉水牛和尼里-拉菲水牛PRKAA2基因上4个SNPs位点可为水牛标记辅助选择育种提供参考。     

促性腺激素释放激素(GnRH)治疗乳牛卵巢囊肿的效果

用100微克的GnRH治疗了225头患卵巢囊肿的乳牛,没有痊愈的母牛用GnRH再做第二或第三次治疗。经第一次、二次、三次治疗后临床上痊愈的母牛分别为76%(170/225),78%(43/55)和66%(8/12)。痊愈的221头母牛中有184头怀孕,一次输精的受胎率为49%。其余的41头母牛因作为种畜有问题而被淘汰。     

拉萨白鸡群体催乳素和促性腺激素释放激素-1基因多态性分析

催乳素(PRL)和促性腺激素释放激素-1(GnRH-1)基因是影响鸡繁殖性状的重要候选基因。研究采用PCR-RFLP方法测定PRL基因I59724210D和GnRH-1基因G840327C突变位点在拉萨白鸡群体中等位基因及基因型频率分布。结果显示:拉萨白鸡群体中PRL基因有II、ID和DD三种基因型,基因型频率分别为35.82%、44.78%、19.40%,处于Hardy-Weinberg平衡状态(P0.05)。GnRH-1基因无多态性,均为与开产日龄相关的有利基因型(GG)。结果表明:可在拉萨白鸡群体中早期选择II和ID高产蛋基因型,提高有利基因频率,加快拉萨白鸡品种的产蛋性能选育进展。     

山羊促性腺激素释放激素1基因外显子克隆及序列分析

促性腺激素释放激素1(gonadotropin-releasing hormone 1,GnRH1)是GnRH存在于脑下垂体的主要形式,它在调节生殖内分泌系统产生促性腺激素方面起着主要作用。根据牛GnRH1基因全序列设计3对引物,采用PCR-SSCP技术检测GnRH1基因外显子2、3和4在高繁殖力山羊品种（济宁青山羊）、中等繁殖力山羊品种（波尔山羊）和低繁殖力山羊品种（内蒙古绒山羊和安哥拉山羊）中的单核苷酸多态性,分析该基因对山羊高繁殖力的影响;并对山羊GnRH1基因3个外显子进行克隆测序,推导出编码的氨基酸序列,然后将山羊核苷酸和氨基酸序列与牛、人、狗、黑猩猩、猴、大鼠和小鼠7个物种的序列进行同源性比较。结果表明,在4个山羊品种中均未检测到GnRH1基因3个外显子的多态性;8个物种的核苷酸和氨基酸序列的同源性分别为73.6%～99.3%和62.0%～97.8%。可见,哺乳动物GnRH1基因外显子2、3和4序列保守性较强,该区域可能不是影响山羊高繁殖力的功能结构域。     

IPTG诱导浓度、时间及温度对重组促性腺激素释放激素基因表达的影响

以人工合成的促性腺激素释放激素(gonadotropinreleasinghormone,GnRH)/转运肽(TRS)基因与表达载体pGEX-6p-1相连的重组子(pGE-G)作为研究对象,转化大肠杆菌BL21(ED3)plyS。利用IPTG作为诱导剂,分析比较不同IPTG诱导条件对于表达产物的影响,以确定最佳IPTG诱导条件。结果表明:融合蛋白大部分以包涵体的形式存在,诱导温度为30℃;IPTG浓度为0.2mmol/L时,可溶性融合蛋白GST-GnRH/TRS表达量最大。光密度扫描对表达产物进行初步定量,表明表达产物约占菌体总蛋白的33.3%。     

绵羊受精卵(胚胎)移植研究报告——垂体促性腺激素(FSH、LH)促黄体释放激素(LRH)类似物对绵羊超数排卵和受精卵移植试验的研究

应用FSH400单位/LH200单位和FSH400单位/LRH类似物50微克,诱发老龄新疆细毛母羊超数排卵,在发情开始后65～80小时采卵,前者41只(包括茨盖羊3只)平均取得受精卵9.8±7.6个,卵子受精率70.09％,后者28只(包括茨盖羊4只)平均取得受精卵8.2±4.6个,卵子受精率68.15％。二者所得受精卵的移植产羔率无明显差异(X~2=1.16 P>0.05)。 32只试验供体于75～80小时采卵,平均取得受精卵10.31±6.7,卵子受精率77.66％,8～16细胞卵占受精卵总数的81.52％。 LRH类似物,应用于绵羊的超数排卵,具有效果稳定,使用方便,价格低廉的特点,更宜在生产上应用。据对移植受体产羔的分析,注意到: 1、当超排卵达到25个左右时(20例),对卵子受精率及其移植产羔率仍无明显影响。 2、16细胞卵单卵移植的产羔率69.44％(25/36),2细胞卵单卵移植的产羔率35.0％(14/40)。分裂阶段较高的受精卵,产羔率相应较高。 3、双卵移植的产羔率48.15％(26/54),单卵移植的产羔率46.34％(209/451)但双卵移植的受精卵存活率低达27.77％(30/108)。 4、双卵移植时的双羔率,似与受体品种本身的双羔率有关。     

雷州黄牛促卵泡素受体基因(FSHR)的多态性分析

利用PCR-RFLP技术分析了雷州黄牛FSHR基因的多态性,检测到2种基因型和2个等位基因,基因A的频率为0.99,基因B的频率为0.01。比较分析发现,不同牛种基因频率的差异可能与牛种的血统起源相关。     

水牛促卵泡素受体(FSHR)基因启动子克隆、生物信息学分析及转录活性检测

试验旨在对广西本地水牛FSHR基因5'侧翼序列进行克隆、生物信息学分析及其转录活性检测。根据GenBank已公布的黄牛FSHR 5'侧翼序列,本试验设计引物,以广西本地水牛血液基因组为模板扩增FSHR基因5'侧翼序列并进行生物信息学分析。结果显示本试验成功克隆了广西本地沼泽型水牛FSHR 5'侧翼序列及部分CDS区序列,共2979 bp,同源性比对分析结果表明其与河流型水牛、黄牛、绵羊、山羊、猪和人的同源性分别为100%、99%、93%、92%、91%和75%。对其5'侧翼2000 bp序列进行启动子预测及转录因子结合位点预测,结果显示在其翻译起始位点上游-147 bp附近存在TATA box,启动子区存在GATAs、FOXO1、FOXO3、Nobox、STAT1、STAT3、STAT4、STAT5A、STAT5B、STAT6和YY1等反式作用元件结合位点,其中GATAs家族基因在FSHR启动子区存在多个结合位点,且同一位点又存在多个GATAs家族基因结合的情况。水牛FSHR启动子能启动EGFP在HEK-293T细胞系中的表达,但表达非常微弱;也能启动EGFP在CHO细胞系中表达,且与CMV启动EGFP在CHO细胞系中的强度相似,结果表明水牛FSHR是个强启动子。总之,本研究成功克隆了沼泽型水牛FSHR基因启动子,分析了其启动子序列特征并成功验证其组织特异性的转录活性,为后期水牛繁殖性能分子机理阐明及基于卵巢特异性表达外源基因的转基因水牛奠定了基础。     

促性腺激素(FSH、LH)对牛腔前卵泡体外发育及E_2分泌的影响

利用McCoy's 5a基础无血清培养系统研究了促卵泡素(FSH)、促黄体素(LH)2种促性腺激素对牛腔前卵泡的体外生长、存活及雌二醇(E2)分泌的影响.结果显示,培养液中单独添加LH对牛腔前卵泡生长影响不大,而单独添加50、100μg/L以上FSH对牛腔前卵泡直径增长和培养后期体外存活有明显的促进作用;当培养液中有10 μg/L LH存在时,2种促性腺激素协同刺激卵泡生长的作用更加明显.添加10 μg/L LH 50μg/L FSH对腔前卵泡体外生长、发育、存活及E2分泌均具有显著的促进作用(P<0.05).     

美洲水貂(Neovison vison)黑素皮质激素受体-1(MC1R)基因序列鉴定及生物信息学分析

旨在探明美洲水貂黑素皮质激素受体-1(Melanocortin-1receptor,MC1R)基因序列结构特征及其对皮毛颜色的调控机制。根据欧洲水貂MC1R基因(GenBank登录号:AB189820)核苷酸序列设计1对特异性引物,利用PCR及克隆技术测定美洲短毛黑水貂MC1R基因完整编码区序列(CDS),并对该序列进行了BLAST比对及生物信息学预测和分析。结果表明,获得的美洲水貂MC1R基因与欧洲水貂相似性为95%,为单一外显子基因,核苷酸序列长度为1 324bp,包括部分5′UTR(188bp)、CDS(954bp)和3′UTR(182bp),编码区碱基G+C含量高达66.04%,由CDS推导共编码317个氨基酸,预测的MC1R蛋白理论分子质量为34.49ku,等电点(PI)为8.97,不稳定系数是36.63,属于弱碱性稳定蛋白质。进一步分析发现,美洲水貂MC1R基因编码的蛋白存在1个低复杂度结构域和7个典型的跨膜区,N-端不存在信号肽,定位于细胞质膜,具有典型的细胞膜受体结构。分子进化分析显示,美洲水貂与欧洲水貂亲缘关系较近,与二者均属鼬科、鼬属动物的传统动物分类学一致。美洲水貂MC1R基因的获取及序列结构特征分析为揭示其皮毛颜色多样性的分子遗传学机制奠定了详细的生物信息学基础。