培养液中不同浓度肝素对蓝狐精子体外获能的影响

采用上游法分离优化精子,以mTyrod's液作为基础培养液检测培养液中不同质量浓度肝素对蓝狐精子体外获能的影响,试验设4个肝素质量浓度:0,10,20,50 μg/mL,38.5℃、5%C02培养箱进行孵育,获能培养时间为6h.利用考马斯亮蓝染色法检测精子顶体反应率,伊红-苯胺黑染色法检测活精子比率,观测法检测精子活力...     

不同浓度Ca2+对塔里木马鹿冻融精子体外获能及蛋白酪氨酸磷酸化的影响

为探讨不同浓度Ca²⁺对马鹿精子体外获能的影响,本研究以塔里木马鹿冻融精子为试验材料,将精子分别悬浮于含不同浓度Ca²⁺（0、1.1、2.2、3.5、5.0 mmol/L）的台氏液（sp-TALP液）中,在培养0、2、4 h时,采用金霉素（CTC）染色法评价精子获能状态,采用SDS-PAGE分离精子膜蛋白,进行免疫印迹分析,检测酪氨酸磷酸化蛋白的表达水平。结果表明,Ca²⁺浓度为1.1、2.2 mmol/L有利于精子活力的维持（P<0.05）,精子获能率极显著高于对照组和高浓度组（3.5、5.0 mmol/L;P<0.01）,精子存活时间最长（P<0.01）,但高浓度Ca²⁺（5.0 mmol/L）对精子活力具有显著抑制作用（P<0.05）,精子获能率极显著低于低浓度组（P<0.01）,精子存活时间最短（P<0.01）;另外,随着培养时间的推移精子发生酪氨酸磷酸化蛋白的表达水平有所不同,培养2、4 h时,1.1 mmol/L组精子蛋白磷酸化水平极显著高于其他各组（P<0.01）,高浓度Ca²⁺（3.5、5.0 mmol/L）组酪氨酸磷酸化蛋白的表达水平极显著下降（P<0.01）。结果表明,塔里木马鹿精子体外获能所需的适宜Ca²⁺浓度为1.1 mmol/L,且获能过程中Ca²⁺的存在是必要的。     

肝素浓度对辽宁绒山羊精子体外获能的影响

在TALP液中添加不同浓度(25、50、100μg/mL)的肝素对辽宁绒山羊精子进行获能处理,在显微镜下检测处理1、2、3、4、5h后的精子活力,用考马斯亮蓝染色法检测获能处理0.5、1、2、4h后的精子获能状况,探讨肝素浓度对绒山羊精子活力、存活时间、获能率的影响。结果发现,在38.5℃、5%CO2、饱和湿度条件下,精子活力随肝素浓度升高而下降,3 h以后25μg/mL肝素组精子活力显著高于其它肝素组(P<0.05)。添加肝素组获能率显著高于对照组(P<0.05),各肝素组精子获能率差异不显著(P>0.05)。对照组精子存活时间最长,25μg/mL肝素组精子存活时间为10.12 h,显著高于其它两组(P<0.05)。表明25μg/mL肝素处理辽宁绒山羊精子体外获能较为适宜。     

不同浓度Ca~(2+)对塔里木马鹿冻融精子体外获能及蛋白酪氨酸磷酸化的影响

为探讨不同浓度Ca~(2+)对马鹿精子体外获能的影响,本研究以塔里木马鹿冻融精子为试验材料,将精子分别悬浮于含不同浓度Ca~(2+)(0、1.1、2.2、3.5、5.0mmol/L)的台氏液(sp-TALP液)中,在培养0、2、4h时,采用金霉素(CTC)染色法评价精子获能状态,采用SDS-PAGE分离精子膜蛋白,进行免疫印迹分析,检测酪氨酸磷酸化蛋白的表达水平。结果表明,Ca~(2+)浓度为1.1、2.2mmol/L有利于精子活力的维持(P0.05),精子获能率极显著高于对照组和高浓度组(3.5、5.0mmol/L;P0.01),精子存活时间最长(P0.01),但高浓度Ca~(2+)(5.0mmol/L)对精子活力具有显著抑制作用(P0.05),精子获能率极显著低于低浓度组(P0.01),精子存活时间最短(P0.01);另外,随着培养时间的推移精子发生酪氨酸磷酸化蛋白的表达水平有所不同,培养2、4h时,1.1mmol/L组精子蛋白磷酸化水平极显著高于其他各组(P0.01),高浓度Ca~(2+)(3.5、5.0mmol/L)组酪氨酸磷酸化蛋白的表达水平极显著下降(P0.01)。结果表明,塔里木马鹿精子体外获能所需的适宜Ca~(2+)浓度为1.1mmol/L,且获能过程中Ca~(2+)的存在是必要的。     

肝素对山羊精子体外获能的影响

哺乳动物的精子在刚射入雌性生殖道时,或从附睾取时,并不具备受精能力,必需在雌 性生殖道内经过一段时间,发生生理及形态学的变化才能获得受精能力,这一现象是被美籍 华人科学家张明觉和澳大利亚科学家Austin发现的,后来被Austin称为精子获能(Sperm Cap acitation) .获能是哺乳动物精子的成熟过程和受精的必要前提,影响获能的因素有很多 ,如肝素、钙离子载体、温度、pH等.而肝素在多种动物身上被证实对精子的体外获能有很 好的诱导作用.肝素中高度硫酸化的氨基多糖GAG可促使精子对钙离子的吸收,从而诱发顶体反应.     

咖啡因对马鹿精子体外获能作用的研究

为研究不同浓度咖啡因对马鹿精子体外获能的作用,取健康马鹿冻精,分别以0、1.0、2.5、5.0、10.0 mmol/L咖啡因处理液作用精子,在孵育0、15、30、60、120、240 min的各个时间点取样,观察精子活力,并用考马斯亮蓝染色法检测各组精子的顶体反应(AR)。结果表明:咖啡因浓度为5.0 mmol/L时精子活力最高(80.19±0.52%),马鹿精子顶体反应率最高(61.94±1.50%),与对照组相比差异极显著(P<0.01),咖啡因作用30 min时各组的顶体反应率达到最高值。     

不同抗氧化剂对牛精子体外获能效果的影响

为探讨褪黑素、亚牛磺酸、左旋肉毒碱三种抗氧化剂对牛精子体外获能效果的影响,将荷斯坦牛细管冻精解冻后,各取200μL精液分别添加在含10~(-4) M褪黑素(MLT)、20μM亚牛磺酸(HT)、10 mM左旋肉毒碱(LC)的获能液中,经上游处理45 min,采用目测法、金霉素(CTC)染色法评估三种抗氧化剂对牛精子活力、精子获能状态的影响。结果表明:添加10~(-4) M MLT、20μM HT、10 mM LC经上游法获能处理后的牛精子活力(83.67%、80.65%、75.00%vs 66.67%)均显著高于对照组(P0.05),而顶体反应率(9.87%、10.09%、14.30%vs 18.73%)均显著低于对照组(P0.05)。另外,添加10 mM LC、10~(-4) M MLT组获能处理后B型精子所占比率(37.26%、29.84%vs 16.26%)均显著高于对照组(P0.05),且10 mM LC组精子获能率最高;而20μM HT组与对照组无明显差异(22.80%vs 16.26%,P0.05)。因此,添加10 mM LC、10~(-4) M MLT可改善精子体外获能效果,有助于提高体外受精的受精率及早期胚胎的质量。     

不同获能条件对猪精子体外获能和体外受精的影响

探讨猪精子在mTBM和TALP中分别获能2、3、4、5h和6h对体外获能的影响,并研究最适获能时间的精子体外受精的效果。结果表明:随着获能时间的延长,猪精子顶体反应率逐渐升高、质膜完整性逐渐下降,获能6h时的顶体反应率显著高于其他时间组,分别为52.5%和50.8%(P<0.05);质膜完整性显著低于其他时间组,分别为30.5%和31.4%(P<0.05);可获能4h的超激活运动率显著高于其他时间组,分别为56.6%和54.5%。将鲜精与冻融的精子获能4h后与成熟的猪卵母细胞进行体外受精,mTBM处理组的卵裂率显著高于TALP,分别为42.7%与40.2%和35.9%与33.4%,但鲜精与冷冻精液组间差异不显著。     

不同培养液对蓝狐精子体外获能效果的比较试验

采用上游法分离优化精子,用mTyrod’s液(T)、BO液(B)以及高渗液(HIS)3种不同培养液,在5%CO2的培养箱中进行获能培养,获能培养时间为6h。利用考马斯亮蓝染色法检测精子顶体反应率,伊红-苯胺黑染色法检测活精子比率以及观测法检测精子活力。在培养的0、1、2、4、6h时分别检测上述指标并统计分析,从而筛选出适合蓝狐精子体外获能的培养液。结果显示:B培养液优于T、HIS培养液,最佳获能培养时间t≥6h;HIS可以提高精子顶体反应率,但较高的渗透压不利于精子保存,不建议使用。     

钙离子浓度对绵羊精子获能的影响

为探讨钙离子浓度对绵羊精子获能的影响,将绵羊精子在不同钙离子浓度的绵羊输卵管合成液（SOF液）中培养,并用钙离子载体A23187进行诱导。结果发现,不同钙离子浓度对绵羊精子的影响差别不明显,经A23187诱导后,1.7 mmol/L组和2 mmol/L组的顶体反应率（AR）与其他组有显著差异（P<0.05）,1.7 mmol/L浓度中,绵羊精子存活时间为16 h,2 mmol/L浓度中的存活时间为10 h,因此认为绵羊精子获能的适宜钙离子浓度为1.7 mmol/L,且获能过程中钙离子的存在是必要的。     

影响哺乳动物精子体外获能的因素

精子的体外获能是哺乳动物体外受精技术中的关键环节之一。笔者阐述了温度、培养液的pH值、渗透压、动物的种类及培养液的组成对精子体外获能的影响。     

影响牛精子体外获能的因素

本文针对牛胚胎体外生产的关键技术环节体外受精，从温度、卵母细胞、公牛个体、培养液组成、渗透压及pH值等方面阐述了影响牛精子体外获能的因素。     

牛羊精子体外获能技术

精子体外获能是模仿体内获能的环境条件,经过一系列的生理、生化过程使成熟卵母细胞受精。精子获能过程中发生了一系列的过氧化过程,产生了过量的氧自由基是导致体外受精率低下的原因之一。本文主要介绍了体外受精用精子的筛选及抗氧化方法、影响体外获能的因素等。     

葡萄糖对牛精子体外获能及体外受精的影响

哺乳动物精子在离开生殖道时,还不具备受精能力,必须在雌性生殖道中经过一段时间的成熟,才获得受精能力,即精子获能,该过程也可在体外适宜的环境中完成,称之为体外获能。在这个过程中,葡萄糖是重要的能源物质,并且获能过程中的葡萄糖对随后的胚胎发育也有很大影响。Francoise U     

孕酮和雌二醇对绵羊精子体外获能的影响

试验探讨孕酮和雌二醇对绵羊精子体外获能和顶体反应的影响。将绵羊精子分别加到含不同浓度孕酮(1、10和100μmol/L)和雌二醇(1、10、和100μmol/L)的输卵管合成液(SOF)中,作用不同时间后分别取出部分精子样本进行金霉素荧光染色(chlortetracycline,CTC),通过精子与CTC结合染色的不同类型来评定孕酮和雌二醇对绵羊精子的作用。结果表明:雌二醇对绵羊精子体外获能和顶体反应都没有显著的促进作用(P>0.05);一定浓度的孕酮和雌激素组合抑制绵羊精子体外获能和顶体反应的发生(P<0.05)。     

添加物对精子体外获能的影响及其分子机制

获能是哺乳动物精子的成熟过程和受精的必要前提,获能液中添加物从不同方面影响精子获能;本文阐述了肝素、Ca2 载体A23187、葡萄糖、孕酮、咖啡因等添加物对精子体外获能的影响及其作用机制。