肥胖基因研究进展

与肥胖有关的基因已发现很多，但ob基因是研究的重点，其表达产物Leptin的作用机制已有较深入的了解。本文主要介绍了ob基因及其产物Leptin的作用机制、生物学效应、Leptin抵抗现象，以及其它与肥胖有关的基因和蛋白。     

肥胖基因及其产物的研究进展

Ob基因编码的Leptin具有降低脂肪，维持能量平衡，调节代谢、生殖、激素分泌，提高免疫机能等多方面的功能。本文在介绍Leptin、Leptin受体的基础上进一步对Leptin的生物学功能及其作用机制、Leptin的抗性做一简要论述，并提出了Leptin今后的研究方向及其在畜牧业上的应用前景。     

表达序列标签(ESTs)及其应用

表达序列标签(ESTs)是指从(ESTcDNA文库中随机挑取克隆并对其3'或5'端进行单轮自动测序所获得的短cDNA库列,一般长度为300～500bp.要有效获取ESTs,必须对cDNA文库进行预处理,处理方法有衰减杂交法、均一化法和差异显示法.在dbEST中收录了大量各种生物的ESTs.ESTs广泛应用于鉴定基因、发现新基因、电子克隆、构建遗传学图谱、制备DNA芯片、分子标记、研究基因的差异表达及检验病原微生物等方面.     

动物肥胖基因(ob)的研究进展

肥胖基因（ob）是近年来克隆的新基因,该基因产物－Leptin(瘦蛋白）是反映体内脂肪含量和调节体重的信号因子,具有调节摄食行为,减少能量消耗和降低动物采食量的作用。本文对肥胖基因的研究现状、结构、克隆、表达及影响表达的因素进行了综述。     

表达序列标签(ESTs)及其数据库

表达序列标签(EST)是在生物体中表达基因的一段cDNA序列，它已成为基因定位、基因克隆、基因表达序列分析的有力工具。本文主要介绍了EST的制备方法，EST数据库，同时分析了EST在应用中应解决的问题，并展望了其应用前景。     

猪肥胖（OB）基因的研究进展

OB基因是近年刚被克隆的新基因，其产物Leptin是反映体内脂肪含量和调节体重的重要信号因子。克隆和分析研究OB基因，对猪的育种和提高瘦肉率有重要意义。本文综述了最近国内外猪OB基因的研究进展，主要包括OB基因cDNA的克隆和分析、OB基因产物Leptin的测序、表达及生物学功能、OB-R基因的研究现状等，对OB基因的研究前景进行了展望。     

猪囊尾蚴抗原基因TS11的真核表达研究

将猪囊尾蚴抗原基因TS11亚克隆至VRl020真核表达载体中，用菌落原位杂交法筛选重组质粒，将其转染COS7细胞，以Northern Blotting检测插入片段的转录；用ELISA检查其翻译表达产物。结果表明：VTS11在真核细胞中能够转录TS11基因的mRNA；其蛋白表达产物能为兔抗猪囊虫高免血清所识别，在转染真核细胞24h后，即可检测到正确表达的猪囊尾勘抗原蛋白。这些为深入研制猪囊虫的DNA疫苗奠定了可靠的基础。     

猪数量性状基因及其标记研究进展

对猪中有关生长,胴体,肉质和繁殖性状的数量性状位点及其标记的研究现状与前景作了综述。     

猪产仔数性状主效基因及其候选基因的研究进展

产仔数性状属于低遗传力数量性状，通过常规选育所获得的进展甚微，许多学者在寻找控制该性状的基因和遗传标记方面做了大量研究，并取得了显著成效。本文综述了猪产仔性状主效基因和候选基因的研究情况及其展望。     

含第一内含子猪生长激素cDNA基因在COS7细胞中的表达

以CMV真核生物启动子构建了含第一内含子猪生长激素（pGH）cDNA基因（pGHcDNA-in）的表达载体，经DEAE-葡聚糖介导在COS7细胞进行了瞬时表达，通过PP95生物学测定法测定，证明含第一内含子pGHcDNA基因能够在真核细胞中进行分泌性表达，表达出的pGH具有生物学活性。这说明通过该基因转录出的前体mRNA能够在COS7细胞中进行正确剪接，从而翻译出具有生物活性的pGH。加入第一内含子在一定程度上可提高pGHcDNA基因的表达效率。     

动物肥胖基因（ob）的研究进展

肥胖基因（ob）调节动物生长和维持能量平衡的生物学功能都是通过其产物——瘦素蛋白（Leptin）来实现的.因此,控制Leptin在动物体内的表达水平可有效降低脂肪含量,提高瘦肉率,从而为畜牧产业带来可观的经济效益.就ob基因的研究进展进行了系统性的综述.     

肥胖基因及其产物的研究进展

Ob基因编码的Leptin具有降低脂肪,维持能量平衡,调节代谢、生殖、激素分泌,提高免疫机能等多方面的功能.本文在介绍Leptin、Leptin受体的基础上进一步对Leptin的生物学功能及其作用机制、Leptin的抗性做一简要论述,并提出了Leptin今后的研究方向及其在畜牧业上的应用前景.     

猪带绦虫六钩抗原基因的克隆与表达

以λｇｔ１１为载体构建了猪带绦虫钩蚴ｃＤＮＡ文库，从中筛选出５株表达六钩蚴抗原成分的重组噬菌体。将其中的六钩蚴ｃＤＮＡ与表达质粒ＰＧＥＸ－４Ｔ２连接，在ＴＧ１大肠杆菌中高效表达，获得了２株表达ＧＳＴ－六钩蚴抗原融合蛋白（Ｍｒ分别为５×１０＾４和６×１０＾４）的工程菌。在ＬＢ营养液中添加１％乳糖和０．２％葡萄糖，工程菌的表达效果优于用ＩＰＴＧ诱导的效果。融合约占工程菌总蛋白２３％。     

猪A-FABP基因真核表达载体的构建及其组织表达

本实验以长白猪背最长肌为实验材料,进行组织RNA的提取及A-FABP基因的克隆,构建p EGFPN1-A-FABP真核表达载体,并通过脂质体转染成纤维细胞,48 h观察荧光表达。同时应用荧光定量PCR法检测猪7种不同组织(心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌、腿肌)中A-FABP基因的差异表达。结果表明:成功构建p EGFP-N1-A-FABP融合表达载体,并在细胞中表达绿色荧光蛋白;A-FABP基因在7种组织中均有表达,其中背最长肌和腿肌中A-FABP基因的表达量最高,与其他组织相比差异极显著(P0.01),而脾脏和肾脏中的表达量相对于心脏、肝脏和肺脏差异显著(P0.05),而A-FABP基因表达量在心脏、肝脏和肺脏中差异不显著(P0.05)。表明该基因能够在真核载体和细胞中表达,并且在猪不同组织的表达具有差异性。     

猪胸膜肺炎放线杆菌荚膜多糖基因的原核表达及其产物的细胞毒性

参考GenBank中猪胸膜肺炎放线杆菌（App）血清2型荚膜多糖基因的序列分别设计了3对特异性引物，通过PCR分别扩增了CpsA、CpsB、CpsC3个基因，获得长约1137、429、1146bp的片段，将其分别克隆到pMD18-T中，经酶切鉴定和序列分析获得了阳性克隆子；再将CpsA、CpsB、CpsC分别插入原核表达载体pGEX-KG后，转化BL21，在IPTG诱导下获得高效表达，经Western-blotting检测证实，表达产物CpsC有生物学活性，CpsA、CpsB无活性；将3种表达产物等量混合，做10倍递进稀释后，与分离出的猪嗜中性粒细胞作用，37℃、50mL／L CO2培养箱中温育4h后加入底物液，测定D492nm值。结果表明，App荚膜多糖对猪嗜中性粒细胞无毒性作用。     

猪数量性状基因及其标记研究进展

对猪中有关生长、胴体、肉质和繁殖性状的数量性状位点及其标记的研究现状与前景作了综述。     

猪生殖与呼吸综合征病毒N基因的表达及其产物的纯化

对重组原核表达载体pETN的表达条件进行了优化，在最佳诱导条件下获得了猪生殖与呼吸综合征病毒重组核衣壳蛋白(N蛋白)。利用His Bind蛋白质纯化试剂盒对表达产物进行了纯化，再分别用SDS—PAGE电泳及Western—blotting试验对纯化产物的纯化效果及特异性进行了检测。结果表明，纯化产物的纯度可达95％以上，并具有良好的免疫学反应活性。     

猪乳铁蛋白基因的分离与表达

本文旨在阐明猪乳铁蛋白基因的空间和时序表达。选用长白猪,公母各４只,用猪ＬＴＦ ｃＤＮＡ探针经行ＲＮＡ斑点杂交,从猪的各个器官中检测ＬＴＦ的表达。兔抗锤是ＬＴＦ抗体用于免疫组化染色来确定ＬＴＦ蛋白。猪乳房和附睾可以检测到大量的ＬＴＦ ｍＲＮＡ,这种分布结果与免疫组化分析的结果一致。哺乳前期的乳腺导管细胞中的ＬＴＦ ｃＤＮＡ的浓度显著升高而在分娩２１ｄ后明显下降。经过特殊染色,公猪的胃肠道上皮细胞中     

猪细小病毒VP2基因的克隆、测序与原核表达

利用PCR技术从猪细小病毒的RF DNA模板中扩增了含有VP2全基因的2.0kb的基因片段，将PCR产物克隆至pMD18-T载体，利用双脱氧末端终止法测定了VP2全基因的核苷酸序列。将所得的核心苷酸序列和推导的氨基酸序列分别与GenBank中的相应序列进行同源性比较，同源性均在99%以上，从而说明该蛋白的碱基序列和氨基酸序列均具有高度的保守性。将VP2全基因分别克隆入原核表达载体pET15(b)、pET17(b)和pET28(b)构建成表达质粒pET15bVP2、pET17bVP2和pET28bVP2；将含有VP2基因起始位点至EcoRⅠ切点间的0.8kb片段克隆入pET17(b)中构建成表达质粒pET17bVP2f。利用上述四种质粒转化大肠杆菌BL21，IPTG诱导后SDS-PAGE检测表达情况，结果发现pET17bVP2f质粒在45kD处有一特异性表达带，而其它几种质粒均未看到特异性表达带，推测VP2基因3‘端的某些结构可能对VP2全基因的表达有一定影响。这一结果对研究VP2基因的结构与功能具有重要意义。