牛胚胎玻璃化超快速冷冻一步法移植试验

应用 30 %乙二醇 0 .3mol/ L 蔗糖 - m- PBS液 (VS1)、30 %乙二醇 0 .3m ol/ L 蔗糖 5 %葡聚糖 (T- 5 0 0 ) - m-PBS液 (VS2 )、30 %乙二醇 0 .3mol/ L蔗糖 10 %葡聚糖 (T- 5 0 0 ) - m- PBS液 (VS3)玻璃化超快速冷冻奶牛胚胎 ,一步法移植。结果显示 ,VS1、VS2、VS3组玻璃化超快速冷冻奶牛胚胎解冻后的形态正常率分别为 10 0 % (2 0 / 2 0 )、95 %(19/ 2 0 )和 5 5 .6 % (5 / 9) ;培养存活率分别为 70 % (14 / 2 0 )、75 % (15 / 2 0 )和 2 2 .2 % (2 / 9) ;囊胚孵化率分别为 0、2 0 % (4/2 0 )和 0。VS1、VS2组玻璃化冷冻奶牛胚胎解冻后的形态正常率极显著地高于 VS3组 (P<0 .0 1) ;VS1、VS2组玻璃化冷冻奶牛胚胎解冻后的培养存活率分别显著 (P<0 .0 5 )和极显著 (P<0 .0 1)地高于 VS3组。 VS1组冷冻的胚胎经一步法移植了 5头 (1枚 /头 ) ,未获得妊娠 (0 / 5 ) ;VS2组冷冻的胚胎用一步法移植了 10头 (1枚 /头 ) ,结果获得 2头妊娠(2 / 10 ) ,并产下 2头正常犊牛。     

应用1.8mol/L乙二醇+蔗糖冷冻保存奶牛胚胎

以 1 .8 mol/L乙二醇 0 .1 mol/L蔗糖 2 0 ?S-m PBS和 1 .8mol/L乙二醇 0 .0 5mol/L蔗糖 2 0 ?S-m PBS对奶牛胚胎进行了冷冻保存试验 ,并与以 1 .4 mol/L丙三醇 2 0 ?S-m PBS常规冷冻保存奶牛胚胎效果进行了比较。冷冻程序为 -7℃平衡 5min后植冰 ,平衡 1 0 min,然后以 0 .3℃ /min的速率降至 -3 3℃ ,直接浸入液氮中保存。胚胎解冻后的培养结果 ,3组之间的胚胎存活率 ,分别为 80 .0 %( 1 6/2 0 )、90 .5%( 1 9/2 1 )、90 .0 %( 1 8/2 0 ) ,差异不显著 ( P>0 .0 5) ;胚胎的囊胚孵化率 ,1 .8mol/L乙二醇 0 .0 5mol/L蔗糖组达 81 .0 %( 1 7/2 1 ) ,极显著高于 1 .8mol/L乙二醇 0 .1 mol/L蔗糖组的 3 0 .0 %( 6/2 0 )和 1 .4mol/L丙三醇组的 2 5.0 %( 5/2 0 ) ( P<0 .0 1 )。 1 .8mol/L乙二醇 0 .0 5mol/L蔗糖组冷冻的 A级胚胎和 B级胚胎之间的存活率差异不显著 ( P>0 .0 5) ,但是 A级胚胎的囊胚孵化率 ( 1 0 0 %,1 1 /1 1 )显著高于 B级胚胎( 60 %,6/1 0 ) ( P<0 .0 5)。另外 ,胚胎解冻后透明带断裂对其发育率无影响 ;冷冻前胚胎在 1 .8mol/L乙二醇 0 .0 5mol/L蔗糖液中平衡 1 0 min和平衡 2 0 min,冷冻解冻后培养发育率差异不显著 ( P>0 .0 5)。试验结果表明 ,应用 1 .8mol/L乙二醇 0 .0     

绵羊冷冻胚胎移植成功

以成年寒羊母羊做供、受体。使用 FSH(300单位)和 LH(150单位),进行供体超数排卵,并在发情周期的第6～8天(发情开始当天=0天)用杜氏磷酸盐缓冲液(PBS)+5%失活犊牛血清,冲洗子宫角手术采卵。只有形态正常的胚胎用于冷冻。胚胎冻前分6步(0.25M、0.5M、0.75M、1.0M、1.25M 和1.5M,每种浓度停留7～10分钟)添加抗冻剂(DMSO)。解冻后也分6步(1.5M、1.25M、1.0M、0.75M 和0.25M,每种浓度停留10分钟)除去 PBS 液中的 DMSO。胚胎在盛有0.25～0.3毫升 PBS 液(Whitting-ham,1971)的安瓿(容量1.0毫升)中冷冻,PBS 液含1.5M 的 DMSO。自1979年8月24日至12月27日,胚胎的冷冻和移植试验分三批进行。第一批胚胎是按 Willadsen(1976)冷冻羊胚胎的方法冷冻的,并降温至-120℃时将安瓿移入液氮。安瓶从-80℃--5℃,以12℃/分钟的速度解冻,从-5℃放入手中快速升温解冻。第二和第三批,胚胎是按 Willadsen(1978)所述及的牛胚胎冷冻和解冻方法进行的,并降温至-60℃将安瓿直接投入液氮。将安瓶放入-50℃的酒精浴中,以4℃/分钟的速度解冻至-10℃。从-10℃将安瓿放入手中快速解冻。第三批试验的受体根据母羊的健康和繁殖情况进行了挑选。共49个胚胎(47个形态正常的和2个形态异常的)移入23只受体,4只母羊妊娠。其中一只受体早产,羔羊死亡;一只受体母羊产了3只羊羔,共产了五只羊羔。三批试验的受体妊娠率和胚胎成活率分别如下:0%(0/8)、0%(0/18)、11.1%(1/9)、6.2%(1/16)和50%(3/6)、33.3%(5/15)。     

甘肃冷冻胚胎移植牛犊诞生

我们在牛胚胎移植试验中,开展牛胚胎冷冻保存、解冻移植试验,于1990年2月20日和5月19日产活冷冻胚移黑白花犊牛2头.这是甘肃省首次冷冻牛胚胎移植成功.供体牛为黑白花牛,经过超数排卵后非手术采胚,在体视显微镜下检出胚胎.将胚胎置于10%甘油PBS低温保护液中20分钟,装入0.25ml细管,热封机封口.再将细管放入L854自动生物冷冻仪的冷冻仓内,按以下程序降温t20℃-7℃,以1℃/分速率降温;-7℃人工植冰,保持5分钟;-7℃--3l℃,以O.3℃/分速率降     

不同冷冻方法对水牛体外生产胚胎冷冻效果的研究

本研究采用不同来源的体外生产胚胎(屠宰场卵巢IVF胚胎,OPU-IVF胚胎,SCNT胚胎),系统研究了不同冷冻方法对水牛体外生产胚胎冷冻效果的影响,以完善水牛体外生产胚胎冷冻方法,进一步提高胚胎冷冻效果。试验选用6～7日龄囊胚分别用不同的冷冻液和不同冷冻方法进行胚胎冷冻。玻璃化冷冻液分别为40%EG、25%EG+25%DMSO和20%EG+20%DMSO+0.5 mol/L蔗糖;程序化冷冻液分别为10%甘油和0.05 mol/L海藻糖+1.8 mol/L EG+0.4%BSA。结果表明:(1)在玻璃化冷冻中,无论何种胚胎不同冷冻液的冷冻效果有明显的差异,但均以20%EG+20%DMSO+0.5 mol/L蔗糖作为冷冻液的冷冻效果最好,并且高于程序化冷冻的存活率;而对于程序化冷冻,用10%甘油作为冷冻液,屠宰场卵巢IVF胚胎的冷冻后存活率略高于用0.05 mol/L海藻糖+1.8 mol/L EG+0.4%BSA的冷冻后存活率,但差异不显著(P>0.05)。(2)VF胚胎利用程序化冷冻胚胎解冻后,在0～24 h内有76.5%胚胎复活,高于玻璃化冷冻的复苏率(48.9%)(P<0.05);而与此相反,在24～48 h内,玻璃化冷冻胚胎的复苏率(42.6%)则高于程序化冷冻(23.5%)(P<0.05)。综上所述,各种来源的水牛体外生产胚胎均可进行冷冻保存,应用玻璃化冷冻的效果好于程序化冷冻,且以20%EG+20%DMSO+0.5 mol/L蔗糖作为冷冻液进行玻璃化冷冻效果最好,但程序化冷冻后的胚胎复苏速度明显快于玻璃化冷冻的速度。     

山羊胚胎简易冷冻试验

用RPE冷冻器冷冻20枚山羊桑椹胚和囊胚。冷冻液为1M甘油杜氏磷酸盐缓冲液(PBS)。胚胎装于0.25ml塑料细管内,0℃时置入冷冻器。以1℃/分降温,-6.5～-7℃诱发结晶,再以0.5℃/分(0.3～0.8℃/分)降温至-30℃,然后投入液氮保存5～12天。35℃水浴解冻。20枚胚胎冻后形态正常率为65％(13/20)。将13枝形态基本正常的胚胎移植给5只受体羊,结果4只受体羊妊娠,产羔7只,冻胚存活率为35％(7/20)。除1只冻胚羔产下后90分钟死亡外,另6只冻胚羔生长发育正常。     

F1代和ICR小鼠体外、体内受精后8-细胞胚胎玻璃化冷冻的比较

探讨了F1代(♀ICR×♂BALB/C6J)和ICR小鼠体外受精及体内受精两种不同来源获得的8-细胞胚胎玻璃化冷冻效果。不同来源的小鼠胚胎在预热到37℃1MDMSO溶液中处理后,转移到冷冻管中5min然后加入DAP213,并在0℃平衡5min后冷冻。体外受精及体内受精两种方法获得的F1代小鼠8-细胞胚胎解冻后的存活率分别为92.5%和93.33%;ICR代小鼠8-细胞胚胎解冻后的存活率分别为65.83%和67.50%。同一品系体外受精与体内受精来源的8-细胞胚胎冷冻复苏后胚胎存活率差异不显著(P>0.05),但不同品系体外受精及体内受精来源的8-细胞胚胎复苏率差异均显著(P<0.05),表明8-细胞胚胎冷冻复苏率的高低与胚胎获得的方法无关,但与品系的不同有关。     

绵羊玻璃化冷冻胚胎直接移植试验研究

应用EFS40玻璃化液对6.5～7日龄的绵羊胚胎进行玻璃化冷冻及解冻后直接移植试验.结果:桑椹胚、囊胚冷冻解冻后移植的妊娠率分别为37.50%(3/8)和54.55%(6/11),胚胎存活率分别为33.33%(3/9)和50.00%(6/12),差异均不显著(P＞0.05);胚胎解冻后用0.5 mol/L蔗糖脱防冻剂与直接用胚胎存放液脱除防冻剂的妊娠率分别为44.44%(4/9)和50.00%(5/10),胚胎存活率分别为40.00%(4/10)、45.45%(5/11)差异不显著(P＞0.05);10枚解冻后的胚胎细管内脱防冻剂后,直接装管移植给8只受体,妊娠率为50.00%(4/8),胚胎成活率为40.00%(4/10),与同期常规冷冻解冻组相比无显著差异(P＞0.05).     

引入南非杜泊绵羊冷冻胚胎移植的效果

本文就引入南非杜泊绵羊冷冻胚胎移植的效果进行了报道。共引入冷冻胚胎 2 0 0枚 ,分夏、秋两次进行了移植。用孕激素处理受体羊共 172只 ,36h内有 16 4只发情 ,同期发情率 95 .35 % ;平均移植成功率 36 .84 % ,其中夏季较低 ,为 2 5 .0 % ,秋季较高 ,为 4 4 .5 7% ,差异极显著 (P <0 .0 1) ;移植冻胚数 (单双胚 )对移植效果有影响 ,双胚移植成功率为 4 9.0 2 % (2 5 / 5 1) ,单胚为 30 .6 9% (31/ 10 1) ,差异显著 (P <0 .0 5 ) ;产羔用胚率 ,单胚 30 .6 9% (31/ 10 1) ,双胚 2 9.4 1% (30 / 10 2 ) ,差异不显著 (P >0 .0 5 ) ,表明移双胚比移单胚可提高移植成功率 ,但不节省胚胎。杜泊羔羊具有典型的肉用体型 ,生长发育快 ,适应性强 ,颇有开发价值。     

引入南非杜泊绵羊冷冻胚胎移植的效果

文章就引入南非杜泊绵羊冷冻胚胎移植的效果进行了报道。共引入冷冻胚胎 2 0 0枚 ,分夏、秋两次进行了移植。用孕激素处理受体羊共 172只 ,3 6小时内有 164只发情 ,同期发情率 95 3 5 % ;平均移植成功率 3 6 84% ,其中夏季较低 ,为2 5 0 0 % ,秋季较高 ,为 44 5 7% ,差异极显著 (P <0 0 1) ;移植冻胚数 (单双胚 )对移植效果有影响 ,双胚移植成功率为49 0 2 % ( 2 5 /5 1) ,单胚为 3 0 69% ( 3 1/10 1) ,差异显著 (P <0 0 5 ) ;产羔用胚率 ,单胚 3 0 69% ( 3 1/10 1) ,双胚 2 9 41% ( 3 0 /10 2 ) ,差异不显著 (P >0 0 5 ) ,表明移双胚比移单胚可提高移植成功率 ,但不节省胚胎。杜泊羔羊 ,具有典型的肉用体型 ,生长发育快 ,适应性强。     

几种冷冻条件对牛体外受精卵发育率的影响

试验比较了乙二醇 (EG)、丙二醇 (PG)、二甲基亚砜 (DMSO)、甘油 (G)和不同的投液氮温度 (- 33℃或 - 4 0℃ )对牛体外受精卵冷冻后发育率的影响。结果 :投液氮温度无论是 - 33℃或 - 4 0℃ ,均以 1.5 mol/ L EG的冷冻效果为最好 ,与 1.5 mol/ L PG相比 ,受精卵的发育率差异显著 (39.7% vs19.2 % ;4 7.8% vs2 4 .7% ,P <0 .0 5 ) ;同 1.5mol/ L DMSO和 1.5 mol/ L G相比 ,受精卵的发育率差异极显著 (39.7% vs 16 .1% or 13.3% ;4 7.8% vs 19.2 % or17.3% ,P <0 .0 1)。 - 4 0℃投液氮 ,受精卵冷冻后的发育率略高于 - 33℃ ,但差异不显著 (P >0 .0 5 )。以 2 5 % EG 2 5 % PG作为细胞外玻璃化溶液对牛体外受精卵进行冷冻 ,冷冻后受精卵的发育率达 5 8.9% ,高于用 1.5 mol/ L EG冷冻在 - 4 0℃投液氮这一处理 (47.8% ) ,但无统计学上差异 (P >0 .0 5 )。然而 ,试验组冷冻后受精卵的发育率均极显著低于对照组 (80 .6 8% ,P <0 .0 1)。结果表明 ,投液氮温度以 - 4 0℃为较好 ,防冻剂以 EG的冷冻效果为最佳。玻璃化冷冻法完全可以应用于冷冻牛体外受精卵     

小鼠2-细胞胚胎细管法和OPS法玻璃化冷冻保存技术的研究

本试验在室温 (2 0℃和 2 5℃ )条件下 ,利用不同浓度的玻璃化溶液 (EFS和EDFS) ,对小鼠 2 细胞胚胎进行细管法和OPS法玻璃化冷冻保存。在 2 0℃室温条件下 ,用EFS4 0平衡 1min细管一步法冷冻 ,解冻后囊胚发育率仅为35 .0 % ,和新鲜 2 细胞体外培养的对照组 (6 5 .0 % )的差异极显著 (P <0 .0 1)。当 2 细胞胚胎在 10 %EG +10 %D溶液中预处理 5min ,再移入EDFS中平衡 30s二步法冷冻保存 ,解冻后囊胚发育率达 4 7.8%～ 4 8.8% ;当室温升至2 5℃时 ,二步法冷冻保存后 2 细胞的囊胚发育率达到 5 2 .2 % ,与对照组无显著差异 (P >0 .0 5 )。改用OPS二步法EFS30冷冻组保存后的 2 细胞胚胎的囊胚发育率高达 6 2 .2 % ,为试验中的最佳组。用最佳细管法和OPS法冷冻组解冻后培养至囊胚移植给受体母鼠均获得产仔     

食蟹猴-猪异种体细胞核移植的初步研究

采用食蟹猴耳部成纤维细胞作为核供体利用电融合法构建猴-猪异种核移植胚胎,研究其核重编机制并寻找适宜的培养基,初步建立食蟹猴-猪异种核移植体系。结果显示:(1)重构胚胎激活后3 h,供体核的大小基本不发生变化,但在激活后6 h大部分形成膨大的类原核。(2)食蟹猴-猪异种核移植胚胎融合率为74.2%,有70.5%的重构胚胎发生卵裂,29%的卵裂胚胎发育到桑椹胚阶段。(3)在NCSU-23+10%FCS和TCM199+10%FCS培养基中,重构胚突破4-细胞阻滞发育到8-细胞以上的比例分别为23.5%和17.0%,在NCSU-23培养基中的为19.9%,但是只有在NCSU23+10%FCS和TCM199+10%FCS培养基中重构胚胎发育到囊胚阶段(1.4%vs1.1%),尽管差异不显著。本研究首次建立了食蟹猴-猪异种体细胞克隆体系。     

猪精液冷冻技术的研究

以解冻后的精子活率、活力、质膜完整率、顶体完整率和人工授精结果为判定指标 ,比较了几种冷冻稀释液、解冻液及冷冻 -解冻程序对猪精液冷冻的效果 ,并对所筛选出的最佳稀释液和冷冻程序做了改进。结果如下 :(1) 号稀释液冷冻解冻后的精子活力 (32 .4± 7.3) %、活率 (4 2 .2± 3.2 ) %、顶体完整率 (6 2 .3± 0 .8) %和弯尾率 (4 2 .6± 7.5 ) %均显著高于 、 、 号稀释液 (P<0 .0 5 )。 (2 )在 号稀释液中添加 0 .5 %、1%和 2 %的 O.E.P(氨基 -钠 -十二烷硫酸酯 )使精子活率提高 5 %、弯尾率提高 6 %、顶体完整率提高近 10 % ,与对照组相比差异显著 (P<0 .0 5 )。 (3)应用改进的稀释液 ( 液加 1% O.E.P) ,细管法比颗粒法冷冻精子活率提高近 7个百分点 ,活力提高 6个百分点 (P<0 .0 5 )。(4 )室温预平衡 4h的精子活力和活率都比对照组 (0 h)有显著提高 (P<0 .0 5 ) ,而预平衡 2、6 h的精子活力和活率与对照组差异不显著 (P>0 .0 5 )。 (5 ) 号解冻液解冻后精子活力 (4 2 .9± 2 .6 ) %显著高于 、 、 号解冻液 (P<0 .0 5 )。 (6 )用 5 0℃水浴解冻精子的活力 (4 6 .3± 2 .6 ) %显著高于 39℃ (4 2 .9± 2 .6 ) %和 70℃水浴 (4 1.1± 5 .7) %解冻的精子活力 (P<0 .0 5 )。 (7)精清和 号解冻液     

2-氨基乙基联苯基硼酸酯对玻璃化冷冻牛成熟卵母细胞发育能力的影响

【目的】研究内质网IP3受体(IP3R)抑制剂2-氨基乙基联苯基硼酸酯(2-APB)对玻璃化冷冻-解冻牛MⅡ期卵母细胞发育能力的影响。【方法】将体外成熟24 h的卵丘-卵母细胞复合体(COCs)用0.1%透明质酸酶消化去除卵丘颗粒细胞,获得的卵母细胞分为对照组和2-APB组,采用OPS法进行玻璃化冷冻,对照组直接进行玻璃化冷冻,2-APB组在玻璃化冷冻前先用10μmol/L 2-APB预处理10 min。2 d后解冻卵母细胞,统计解冻后(0 h)及恢复培养2 h时卵母细胞的存活率,用FITC-PNA荧光探针检测恢复培养2 h时卵母细胞皮质颗粒(CG)的分布,用2′,7′-DCHFDA和Cell Tracker Blue CMF2HC分别检测胞内活性氧(ROS)和谷胱甘肽(GSH)含量。将成熟培养24 h未冷冻卵母细胞(Fresh组),与解冻后恢复2 h的对照组和2-APB组卵母细胞同时进行孤雌激活,于培养的第2、7天分别统计孤雌胚胎的卵裂率和囊胚率。【结果】与对照组相比,2-APB组冷冻-解冻卵母细胞0和2 h的存活率均显著增加(P<0.05);2-APB组皮质颗粒皮质区分布比例...     

猪冷冻（—20℃）胚胎在我国移植成功

实验Ⅰ将129枚猪胚胎,用于冷冻-解冻-体外培养研究。以含有1.5M甘油的PBS液为冷冻液,以1℃/分的速率从35℃降至-7℃,在-7℃自动诱发给冰,然后以0.3℃/分的速率降至-35℃,再以0.1℃/分的速率降至-36℃,立即投入液氮(-196℃);胚胎解冻在37℃水浴中进行、分步脱出甘油后以改进的mBMOC-Ⅱ为培养液进行体外培养。结果,囊胚、扩张囊胚、刚孵出囊胚和孵化出后期囊胚、解冻后体外培养存活率分别为0％(0 /2)、64％(16/25)、0％(0/9)。在液氮中(-196℃)保存80～103天,扩张囊胚、刚孵出囊胚和孵出后期囊胚解冻后,体外培养存活率分别为41.6％(5/12)、63.7％(7/11)和0％(0/70)。结果表明,在液氮温度(-196℃)保存下,刚孵出囊胚有较高的耐冻性和存活能力。实验Ⅱ进行猪冷冻胚胎解冻后体内发育能力研究。96枚扩张囊胚和刚孵出囊胚,分批冷冻和保存在-20℃、-35℃和-196℃。解冻后移植3头受体,其中2头返情,1头妊娠并于1990年7月31日产仔2头,公母各1头,初生重均为1.35kg,妊娠期为116夭。该结果为我国首例猪冷冻(-20℃)胚胎移植成功,并为今后开展猪胚胎超低温(-196℃)冷冻保存技术研究奠定了基础。     

牛体外受精低品质胚胎冷冻保存效果

体外受精胚的品质和耐冻性较体内受精胚差、妊娠率低 ,特别是低品质冻胚的妊娠率更低。为了改善低品质冻胚的妊娠率 ,我们设 10 %乙二醇 (EG)、 8%EG和 5%EG +5 % 1,2 丙二醇 (PD) 3种不同处理的防冻剂就牛体外受精低品质胚胎的冷冻效果进行了初步的探讨。结果用这 3种防冻剂冷冻保存的胚胎 ,解冻后用TCM - 199+10 %犊牛血清 (FCS) +10 0 μmol/Lβ 巯基乙醇 (β ME)培养 72h的孵化率分别为 11 1%、 2 1 4 %和 2 0 6 % ,后两者明显地高于前者     

哺乳动物繁殖研究进展

1　直接移植冷冻的绵羊胚胎获得成功应用简单的胚胎冷冻方法 ,并将解冻的胚胎直接移植有助于降低绵羊胚胎移植的成本 ,加速绵羊品种改良。本实验是要研究胚胎冷冻方法在现场应用的可行性。所用的胚胎都从经ＦＳＨ -处理的情期第 7ｄ供体母羊收集 ,并对胚胎进行形态鉴定 ,用改良的ＰＢＳ清洗 ,于 10 %的甘油 ,10 %甘油和 2 0 %乙二醇中分别培养 5ｍｉｎ ,然后移入冷冻液 (2 5 %的甘油和 2 5 %的乙二醇 )中 ,装管 ,并将其移入液氮中冷冻保存。解冻的胚胎或直接移植或按常规方法处理后移植。结果表明 ,冷冻胚胎和新鲜胚胎的妊娠率和存活率没有…     

奶牛胚胎超低温长期保存成功

用6～7日龄奶牛胚胎进行超低温冷冻保存试验。有10个胚胎在1.5MDMSO中以1℃/分从室温降到-7℃,诱发结晶后,以0.3℃/分降温到-60℃,然后放入液氮内保存373～375天。解冻时从液氮取出,以4℃/分的速率(-50℃到-10℃)升温到-10℃,直接放入20℃水中。除去DMSO后,有5个形态正常。把8个(其中3个异常)移给4头受体后,有2头妊娠,1头生下1对双胎(1母1公),另1头产1母犊。试验比较了不同冷冻保护剂和不同方法冷冻保存奶牛胚胎后的结果。40个胚胎在1.5M DMSO中用缓慢冷冻—解冻方法冷冻保存2-375天后,有17个形态正常(42.50％)。把20个胚胎移给13头受体,有2头妊娠(15.38％),63个胚胎在1.0M甘油中用快速冷冻—解冻方法冷冻保存1-297天后,找回的57个中有30个形态正常(52.63％)。把29个胚胎移给22头受体没有1头受孕。试验表明,奶牛胚胎在1.5M DMSO中用缓慢冷冻—解冻方法冷冻保存1年后仍然存活。解冻后正常胚胎的百分率和在1.0M甘油中用快速冷冻—解冻方法冷冻保存的胚胎解冻后的正常胚胎百分率没有显著差异。但后一种冷冻方法冷冻的胚胎移植后没有成功。应再进一步试验研究。     

牛胚胎两步冷冻

8枚61/2～71/2日龄黑白花奶牛胚胎,采用两步冷冻和细管包装法进行了冷冻。同时配合使用甘油抗冻剂,即以1℃/分钟的速度由室温降至-5℃;在-5℃下诱发结晶并在投入液氮前以0.3℃/分钟的速度降温至-36℃。胚胎在液氮中贮存4天～7个月后,直接在17℃温水中解冻。除去甘油后,用评定胚胎形态的方法进行胚胎存活的鉴定,6枚形态评为优和良的胚胎,用凯苏式输卵器非手术分别移入6头同期受体母牛。其中2头妊娠,1头妊娠母牛在孕后第四个月流产,另1头于1983年元月26日产1公犊,犊牛初生重为45公斤。试验结果证明,采用两步冷冻法冷冻的牛胚胎移植后可以成活。