鸡gga-miR-199a慢病毒表达系统的构建

为建立一种稳定持续表达鸡gga-miR-199a的系统,将从鸡DF-1细胞扩增到的gga-miR-199a前体序列克隆入pLL3.7慢病毒载体质粒中用以包装慢病毒。同时构建了更换pLL3.7质粒中鼠源U6启动子更换为鸡源及人源U6启动子的pLL3.7慢病毒载体质粒;将其与慢病毒包装辅助质粒共转至HEK293T细胞中,收集浓缩病毒颗粒并侵染细胞并获得过表达gga-miR-199a的单细胞克隆。提取单细胞克隆总RNA进行gga-miR-199a-5P的定量检测。结果表明,经慢病毒侵染后的细胞中鸡gga-miR-199a表达量显著提高,且人源U6启动子的转录效率最高,该研究成功建立了一种稳定持续表达鸡gga-miR-199a的慢病毒系统,说明该系统有利于在鸡活体或原代细胞中开展miRNA功能的研究。     

超强马立克氏病病毒的鉴定及病毒Meq基因序列的比较

对1例感染超强马立克氏病病毒的病例进行确诊,对感染病毒的Meq基因进行比较分析。采用病理解剖、PCR检测、病毒分离、动物试验和Meq基因序列分析,对感染病毒进行研究。病理解剖结果为病死鸡的肝脏、脾脏、腺胃、肌胃、十二指肠表现为肿瘤病变。PCR检测结果为病死鸡的组织病料感染马立克氏病病毒。病毒分离和动物试验结果证明该感染病毒是1株马立克氏病超强毒株,该病毒可以引起免疫过CVI988疫苗的鸡发病。Meq基因序列分析表明该病毒与7株马立克氏病病毒参考毒株的同源性为98.8%~99.6%,该病毒在Meq的第115、119和176位氨基酸突变同国内流行株,该检测病毒在Meq的第217位氨基酸突变同超超强马立克氏病毒株。结果表明,通过病理解剖、PCR检测、基因序列分析、病毒分离和动物试验,确诊病鸡感染超强马立克氏病病毒。     

gga-miR-140-3p抑制马立克病病毒转化细胞MSB1增殖、迁移和侵袭

以马立克病病毒(MDV)感染SPF白来航鸡,收集脾和肝来源的淋巴瘤,利用实时荧光定量PCR(qRTPCR)进行检测,结果显示gga-miR-140-3p在感染MDV的肿瘤化脾和肝淋巴瘤中低表达。为揭示该miRNA在马立克病(MD)肿瘤转化过程中的作用,以该miRNA为研究对象,MDV转化细胞系MDCC-MSB1为试验材料,分别转染miRNA激动剂或阴性对照,检测细胞增殖和迁移,并检测与细胞侵袭密切相关的基因MMP2和MMP9mRNA表达情况。结果显示,与阴性对照组相比,转染gga-miR-140-3p激动剂后,细胞增殖在24、36和48h后发生显著(P0.05)抑制,在60和72h后发生极显著(P0.01)抑制。转染激动剂后,细胞迁移数也显著(P0.05)减少。转染激动剂后,MMP2在转染后24h转录显著下调(P0.05),转染后48和72h转录极显著(P0.01)下调,MMP9基因在转染后48h转录显著(P0.05)下调。gga-miR-140-3p作为在MDV感染组织中异常表达的miRNA,能够影响MD肿瘤淋巴细胞的特征——增殖、迁移和侵袭,提示该miRNA可能参与MD肿瘤转化过程。     

鸡马立克氏病血清学诊断方法

鸡马立克氏病的诊断不能依据血清学方法,但是血清学方法可以检测鸡群中病毒的感染情况,常用的血清学方法是琼脂扩散试验。本文针对马立克氏病病毒的感染情况,详细介绍了鸡马立克氏病琼脂扩散试验的材料、操作方法及注意事项。     

一例鸡马立克氏病与沙门氏菌病混合感染的实验室诊断

为确诊思南县某养殖专业合作社饲养的肉鸡发病死亡原因,采集病鸡羽髓、血样及病死鸡肝脏、脾脏进行细菌分离培养、相关病毒琼脂扩散试验和PCR检测。结果:肝脏组织中分离出沙门氏菌;羽髓琼脂扩散试验检测出马立克氏病抗原,血清琼脂扩散试验检测出马立克氏病抗体;肝脏、脾脏PCR检测出马立克氏病病毒核酸。结论:综合诊断为马立克氏病与沙门氏菌病混合感染。     

miRNA可作为马立克氏病病毒感染和肿瘤发生的标记

正鸡马立克氏病是家禽养殖过程中常见的传染性疾病,马立克氏病病毒(MDV)是引发该病的罪魁祸首。新的研究发现,microRNA(miRNA)对MDV肿瘤发生有调节作用。为更深入了解MDV肿瘤发生的分子机制,来自中国农业科学院哈尔滨兽医研究所的科研团队对MDV易感个体的宿主和病毒miRNA表达谱进行了研究。研究人员采用miRNA芯片技术(miRNA芯片分析项目由联川生物承担完成)分析了MDV感染     

应用荧光PCR诊断鸡腺胃型传染性支气管炎

应用荧光PCR试剂盒对临床表现为消瘦和腺胃肿大为特征的患鸡病料进行鸡传染性支气管炎病毒(IBV)、禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)和鸡马立克氏病病毒(MDV)核酸检测。结果显示:鸡传染性支气管炎病毒荧光RT-PCR检测为阳性,禽网状内皮组织增殖病病毒荧光RT-PCR检测为阴性,鸡马立克氏病病毒荧光PCR检测为阴性。结合患鸡精神沉郁,极度消瘦,腺胃肿大如球状等的临床表现,综合分析表明该患鸡发病主要病因为感染鸡腺胃型传染性支气管炎病毒。     

粤北地区鸡传染性病毒性腺胃炎流行病学调查

为了解粤北地区鸡传染性病毒性腺胃炎（Transmissible viral proventriculitis,TVP）的病原学特征，于粤北地区8个有生长停滞、羽毛生长不良和消瘦等症状，疑似传染性病毒性腺胃炎的肉鸡场共采集样品420份，根据发病鸡场每10份样品混为1个样本，利用实时荧光定量PCR方法进行检测，8种TVP相关病毒的总检出率为80.95%(34/42),除呼肠孤病毒和传染性支气管炎病毒未检测到阳性外，鸡传染性贫血病毒和马立克氏病病毒感染率分别为57.14%、4.76%，传染性法氏囊病病毒、网状内皮增生症病毒、鸡腺胃坏死病毒和圆圈病毒3型均为2.38%，其中鸡传染性贫血病毒和马立克氏病病毒、马立克氏病病毒和传染性法氏囊病病毒等混合感染的检出率均为4.76%，马立克氏病病毒和鸡腺胃坏死病毒、马立克氏病病毒和圆圈病毒3型等混合感染的检出率为2.38%；发病鸡主要集中于25～80日龄，不同日龄的TVP相关病原学检出率无显著性差异。结果表明粤北地区肉鸡TVP发病率较高，需进一步完善相关疾病免疫策略，研究结果为进一步了解TVP发病规律和有效防控提供科学参考依据。     

有顽强存活力的马立克氏病病毒

有顽强存活力的马立克氏病病毒一个鸡场一旦有了马立克氏病，就几乎不可能摆脱它。此病的病毒会感染场内所有的鸡。马立克氏病病毒和其它疱疹病毒一样．会导致终生感染。受到感染的鸡舍终生由羽属排出马立克氏病病毒。马立克氏病病毒在正常环境条件下会存活半年以上。虽然...     

缺失部分miRNA的重组马立克氏病病毒致病性研究

马立克氏病(MD)是由马立克氏病病毒(MDV)引起的T淋巴细胞增生性疾病.为了研究MDV编码的miRNA与致瘤性的关系,通过对缺失部分miRNA的MDV-MS毒株进行动物感染试验,并将其结果与MDV-MS强毒株的致病性的试验结果进行比较.结果表明:缺失miRNA的重组MDV对无特定病原体(SPF)鸡无致病性,而接种MDV-MS毒株的SPF鸡却显示出很强的MD典型症状.此结果证实MD V编码的miRNA对MDV的致瘤性起到重要的作用.另外,通过对重组MDV感染鸡的羽髓病毒载量的动态检测,发现此处编码MDV-miRNA的基因为复制非必须区,但重组病毒rMS△miR9-12比亲本病毒MDV-MS的体内复制能力有所下降.