红细胞己糖激酶定量测定及正常值

已糖激酶HK活性的测定对非球形红细胞溶血的诊断有一定意义,本研究采用Bertler氏法测定了健康 新生儿脐血100例,正常成人10例,儿童10例。脐带血男性53例HK均值为     

新生儿脐血红细胞腺苷脱氨酶的测定

本文采用国产752型紫外光栅分光光度计,在恒温下(37℃)按WHO推荐的Beutler氏方法,测定105例新生儿(脐血)红细胞腺苷脱氨酶(ADA)正常值。其平均值为0.78±0.2Iu/gHb,无性别差异。红细胞ADA异常是一种常染色体显性遗传性疾病,属核苷酸代谢的酶缺陷中的一种。本文提出可通过新生儿脐血红细胞ADA活性测定作为此病的一种筛查方法。本试验重现性良好,结果较稳定。     

新生儿脐血红细胞铁蛋白含量的测定

用放射免疫测定法检测１２６名足月新生儿脐血红细胞铁蛋白含量的结果表明：１２６例新生儿脐血红细胞铁蛋白为１６１．４±６７．５ａｇ／ｃｅｌｌ，脐血红细胞铁蛋白含量与血清铁蛋白及血红蛋白含量均呈显著正相关。红细胞铁蛋白含量与体内铁储备密切相关，它不受其他因素的影响，对评价新生儿铁储备的作用优于血清铁蛋白。     

新生儿脐血红细胞6—磷酸葡萄糖脱氢酶活性测定正常值及基因频率分布

红细胞6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G-6 PD)缺乏是一种遗传性的红细胞酶病,是新生儿遗传性溶血性贫血的最常见原因。以往一般实验室常用高铁血红蛋白还原试验来间接检测 G-6PD 活性,在某些情况下,可出现假阴性及假阳性结果。为了了解新生儿红细胞 G-6PD 缺乏的真实发病率及基因频率分布,我们采用岛津 uv-730微流式紫外分光光度计定量测定 G-6PD 活性,并同时测     

红细胞、淋巴细胞腺苷脱氨酶的测定及其正常值

腺苷脱氨酶(adenosinedeaminase 简称 ADA)是一种氨基水解酶,能催化腺苷氨基使之变成肌苷(次黄嘌呤核苷)。这种酶广泛存在于血液(红细胞、淋巴细胞、血小板及血浆)、心肌、肝脏等织织中,ADA 的测定对某些疾病的诊断有重要的意义。我们采用了 Beuffer 等介绍的方法,建立了红细胞及淋巴细胞 ADA 活性的检测程,现介绍于下。     

诊断试剂用己糖激酶的制备工艺研究

为获得微生物工程菌株来源的己糖激酶(Hexokinase,HK)并提高HK的发酵水平,对已构建产HK的大肠工程菌株BW25113-pYBE/schk进行发酵工艺优化,为HK法血糖检测试剂盒的配制提供技术支撑。本研究采用正交试验对菌株发酵工艺进行优化,并对超声破壁获取粗酶及粗酶的纯化工艺进行研究。结果表明:工程菌株BW25113-pYBE/schk的最佳发酵培养条件为:装液量80mL/500mL,发酵液初始pH 6.5,发酵温度37℃,接种量2%,诱导剂添加时间为接种后1h,转速180r/min。超声破壁最佳工艺为:功率200 W,工作1.5s间歇1s,破壁5min。在最佳发酵和破壁工艺条件下,HK的发酵活力稳定在157U/mL,经过Ni-Agarose His标签蛋白试剂纯化获得60kD的HK。本研究建立了高产己糖激酶大肠杆菌工程菌株的发酵工艺,有利于降低己糖激酶法血糖试剂盒的成本,为糖尿病患者的准确诊断及普及提供便利条件。     

龙眼己糖激酶基因的克隆及原核表达

【目的】克隆龙眼Dimocarpus longan己糖激酶(Hexokinase,HXK)基因,并对其进行生物信息学分析及原核表达分析.【方法】以龙眼总RNA为模板,采用RT-PCR结合RACE法获得基因全长c DNA序列,构建p ET-32a-Dl HXK原核表达载体,转化到大肠埃希菌Escherichia coli Rosetta(DE3)中诱导表达.【结果和结论】成功克隆龙眼己糖激酶基因的c DNA全长序列,命名为Dl HXK,登录号为KF776906.1.龙眼Dl HXK序列全长2 101 bp,包括1个1 488 bp的开放阅读框,预测编码495个氨基酸;进化树和相似性分析发现,该基因与温州蜜柑Citrus unshiu的相似性最高,达到了82%;荧光定量表达分析表明,Dl HXK基因随着果实的发育成熟表达量逐渐上升;经IPTG诱导和SDSPAGE检测,所构建的原核表达载体表达的融合蛋白与预期蛋白大小相吻合.由此可见,利用RT-PCR结合RACE方法成功克隆了龙眼的己糖激酶基因,构建原核表达载体,并在大肠埃希菌Rosetta(DE3)中获得高效表达.     

桂花己糖激酶基因家族成员的序列及表达分析

  目的  研究桂花Osmanthus fragrans己糖激酶家族成员序列特征及表达变化规律。  方法  选取3个不同花色桂花品种‘堰虹桂’O. fragrans ‘Yanhong Gui’、‘玉玲珑’O. fragrans ‘Yulinglong’、‘金球桂’O. fragrans ‘Jinqiu Gui’,从转录组数据中筛选得到HXK同源基因,进行序列分析和系统进化树分析,并利用实时荧光定量PCR检测不同品种桂花不同组织及不同发育阶段的OfHXKs基因表达情况。  结果  筛选得到OfHXK1~OfHXK4基因,分析表明不同品种桂花OfHXK1、OfHXK3和OfHXK4基因核苷酸序列相似性均高于99%。OfHXKs基因编码461~510个氨基酸残基,均包含2个保守的磷酸化作用位点和1个糖结合位点。OfHXK1和OfHXK2具有N端膜锚定结构,与拟南芥Arabidopsis thaliana AtHXK1与AtHXK2聚为一支;无跨膜区域的OfHXK3与AtHXK3亲缘关系较近,推测二者具有催化作用但无糖信号传导功能;OfHXK4蛋白腺苷结合位点处多出11个氨基酸残基,与AtHKL1和AtHKL2亲缘关系较近。4个桂花HXK基因成员在桂花1年生茎、2年生茎、嫩叶、成熟叶和花序中均有表达。随着花开放的进程,整体上OfHXK1、OfHXK3和OfHXK4基因的表达量呈现先上升后下降的趋势,而OfHXK2基因在3个品种花序发育过程中表达模式不同。  结论  根据序列分析与进化树分析,推测桂花OfHXK1~OfHXK4均具有催化己糖磷酸化的功能,OfHXK1和OfHXK2具有糖信号感知和转导的功能。OfHXK1、OfHXK3和OfHXK4基因随花序发育呈现有规律升降的表达模式,可能与其参与糖类物质代谢有关。图6表4参30     

母血脐血红细胞锌铜含量的测定

采用原子吸收分光光度法测定126对正常产妇及其新生儿红细胞锌、铜含量。结果表明:母血红细胞锌高于脐血,而红细胞铜低于脐血,差异显著;母婴间红细胞锌、铜均呈显著正相关;新生儿红细胞锌、铜含量与母亲血清锌钢浓度无直线相关。认为红细胞锌、铜在母婴间锌、铜代谢中具有重要作用,其含量稳定,更能准确反映体内的锌、铜状态。     

己糖激酶2基因在鹅肥肝形成过程中的表达研究

为探讨己糖激酶2(HK2)基因与鹅脂肪肝形成的关系,选取30只朗德鹅为研究对象,将其分为填饲组(15只)和对照组(15只),填饲组分填饲7、14和19d3个阶段。采用实时荧光定量PCR技术测定朗德鹅填饲不同阶段HK2在肝脏、胸肌和腹脂中的表达水平,并用葡萄糖、脂肪酸和胰岛素分别处理鹅原代肝细胞,观察这些因子对HK2基因表达的影响。结果表明:各阶段填饲组肝脏中HK2基因的表达量显著高于对照组,胸肌和腹脂则呈下调趋势。此外,在培养的鹅原代肝细胞中,葡萄糖、不饱和脂肪酸(油酸和亚油酸)能使HK2基因表达量显著下调,而胰岛素能显著上调HK2基因表达。HK2基因表达与鹅肥肝形成密切相关,为深入研究HK2基因在鹅肥肝形成过程中的作用奠定了基础。     

新生儿脐血总蛋白测定及其临床意义

目的 :观察不同胎龄新生儿脐血总蛋白含量 ,为临床不同胎龄出生的新生儿营养状况的评定提供理论依据。方法 :新生儿出生断脐时取血 ,用双缩脲法测定血浆总蛋白含量。结果 :不同胎龄组新生儿脐血总蛋白含量差异有显著性 ( P<0 .0 0 1 ) ,以足月儿组脐血总蛋白含量较高 ;早产儿的脐血总蛋白含量随其体重的增加而增高。结论 :胎龄及体重可影响胎儿血浆总蛋白含量。     

新生儿脐血红细胞平均体积和红细胞平均血红蛋白对地中海贫血初筛的探讨

目的 :探讨新生儿脐血红细胞平均体积 (MCV)和红细胞平均血红蛋白 (MCH)与地中海贫血的关系。方法 :用血细胞计数仪测定新生儿脐血的MCV和MCH ,用醋酸纤维薄膜电泳检测脐血的HbBart’s,用跨越断裂点PCR(gap PCR)法检测东南亚缺失型α 地中海贫血 1基因。结果 :地中海贫血组的新生儿脐血MCV和MCH明显小于正常新生儿组 (P <0 .0 1) ,符合小细胞低色素性贫血。结论 :新生儿脐血的MCV和MCH可为地中海贫血的临床诊断提供依据     

家蚕己糖激酶基因进化分析及其多转录本在胚胎早期发育过程中的表达特性

【目的】明确家蚕（Bombyx mori）二化性品系胚胎早期发育过程中己糖激酶基因（BmHK）不同转录本的表达特性,为深入探究BmHK基因各转录本的生物学功能及揭示其在家蚕胚胎早期发育中的作用机制提供理论依据。【方法】从NCBI检索并下载家蚕等12种昆虫的HK氨基酸序列,采用MEGA 7.0的邻接法（NJ）构建基于HK氨基酸序列相似性的系统发育进化树。以家蚕二化性品系秋丰活化越年蚕卵（丙2胚胎）为材料,分别制备非滞育命运卵（ND）、滞育命运卵（DD）和即时浸酸卵（IA）,采用实时荧光定量PCR检测BmHK基因各转录本在家蚕二化性品系胚胎早期发育过程中的表达特性。【结果】BmHK基因属于HSP70-actin家族,存在4个不同的转录本,其长度分别为4610、4608、2818和1520 bp,依次命名为BmHK-a、BmHK-b、BmHK-c和BmHK-d。BmHK-a在3种蚕卵胚胎早期发育过程中整体上呈先升高后降低的变化趋势,且各时间点均表现为IA蚕卵>ND蚕卵>DD蚕卵,IA蚕卵中的BmHK-a相对表达量于发育2 h达峰值,在ND蚕卵和DD蚕卵中于发育48 h达峰值,此后其表达快速下调,至发育96 h均处于较低水平;BmHK-b在3种蚕卵中的表达水平整体上表现为IA蚕卵>ND蚕卵>DD蚕卵,3种蚕卵中的BmHK-b相对表达量变化趋势基本一致,均随发育时间推移呈逐渐上升趋势;BmHK-c在3种蚕卵中的表达差异明显,初产蚕卵中已有较高的表达水平,受精后迅速升高,至发育72 h后BmHK-c在3种蚕卵中的相对表达量再次升高;BmHK-d在3种蚕卵中的相对表达量整体上呈先升高后降低的变化趋势,且各时间点均表现为ND蚕卵>IA蚕卵>DD蚕卵,但IA蚕卵中BmHK-d表达峰值出现的时间早于DD蚕卵和ND蚕卵。【结论】BmHK-a和BmHK-d主要在家蚕胚胎早期发育（产卵或浸酸后3 d）过程中发挥重要作用;BmHK-b虽然也参与家蚕胚胎早期发育过程,但不是主要的糖代谢相关酶;BmHK-c与家蚕胚胎早期发育关系密切,通过糖酵解为胚胎发育提供能量。     

大蒜己糖激酶基因AsHXK2的克隆及其参与根际促生菌缓解干旱胁迫的表达分析

为明确AsHXK2基因在根际促生菌缓解干旱胁迫下的作用,采用TA克隆方法克隆得到乐都紫皮大蒜AsHXK2基因序列,并对其基本特性进行生物信息学分析。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析了AsHXK2基因在大蒜不同组织和干旱胁迫、根际促生菌等条件下的表达情况。结果表明,AsHXK2开放阅读框全长1 500 bp,可编码499个氨基酸,分子量约为57.77 ku,理论等电点为6.37;亚细胞定位预测结果显示,AsHXK2蛋白主要定位于叶绿体,含有一个特异位点,属于己糖激酶2家族。在进化关系上,大蒜AsHXK2与天门冬科的芦笋HXK2亲缘关系最为接近。qRT-PCR分析表明,AsHXK2基因表达具有明显的组织特异性,其中鳞芽中的表达量最高。此外,不同组织中AsHXK2对根际促生菌作用下的干旱胁迫表现出不同的响应模式。干旱胁迫能够显著上调大蒜根、叶和鳞芽的AsHXK2表达水平;而在干旱胁迫施加根际促生菌的处理下,仅在叶中AsHXK2表达量显著高于干旱胁迫,表明叶片中AsHXK2对根际促生菌缓解干旱胁迫的响应较为明显。本研究为进一步探究根际促生菌缓解大蒜干旱胁迫的作用机制奠定了基础。     

西农莎能奶山羊心电图正常值的测定

心电图是心肌兴奋时电学活动的客观记录,它已被广泛应用于临床医学,作为心血管疾病诊断的重要手段。心电图在兽医临床上对心律异常、心肌受损、心肌肥大、心肌炎及创伤性心包炎等均有重要的诊断价值,在其它系统或器官罹病时,必然伴随心脏机能异常,因此心电图描记在兽医临床中就成为一种必备的诊断手段,正在引起人们的重视。为了了解疾病时的心电图变化,必须以健康奶山羊的心电图作为对照,才能得出结论。     

延边半细毛羊心电图正常值的测定

本实验通过４９例健康延边半细毛羊心电图的描记，初步测定出其正常值。测定的结果表明；心电图为窦性心律，平均心率为１０２次／分；Ｐ波振幅平均为０．０５８ｍＶ，眼限平均为０．０３７秒；Ｐ—Ｒ间期平均为０．１１６秒；ＱＲＳ波群里多种波型，其中以ｑＲ、Ｑｒ、ｑＲｓ和ｒＳ型为最多，时限平均为０．０３９秒；Ｓ—Ｔ段平稳，时限平均为０．１９６秒；Ｔ波振幅平均为０．０８２ｍＶ，时限平均为０．０６５秒；Ｑ—Ｔ间期平均为０．２９５秒。此测定，为心电图应用于诊断延边半细毛羊心脏疾病提供了一定的科学依据。     

健康水牛心电图正常值测定的初报

作者通过50头健康水牛心电图的测定,对水牛心电图测定方法和健康水牛心电图正常值作了初步探索。测定结果表明,健康水牛心电图为窦生心律,P-R间期平均为0.243秒;心率平均为48.34次/分,Q-T间期平均为0.44秒,S-T段基线平稳,时限平均为0.2574秒,P波时限平均为0.085秒,振幅多在1毫米左右;T波时限平均为0.0667秒,振幅平均在0.098毫米,通过此测定,为心电图应用于水牛临床诊断提供了一定参考。