应用葡萄球菌蛋白A酶联免疫吸附试验检测病毒抗体

提出了应用葡萄球菌蛋白A联接辣根过氧化物酶的改良间接酶联免疫吸附试验。应用蛋白A联接辣根过氧化物酶代换间接EliSA中的抗球旦白酶结合物,检测在马、牛、猪、猫、犬、兔类动物(兔)和人血清中的病毒抗体。比较这个EliSA的结果与病毒中和试验的结果,在实验室内应用这个试验对不同种类的动物血清进行检测作了讨论。     

SPA与鸭IgG的结合性研究

金黄色葡萄球菌细胞壁中的A蛋白(staphylo-coccal protein A,SPA)能与多种动物的γ-球蛋白发生非特异性结合反应,而且IgG的Fc片段与SPA结合后并不影响Fab片段的免疫活性,因此在酶联免疫吸附试验(ELISA)中,常用SPA与辣根过氧化酶(HRP)交联而成SPA-HRP结合物,用于抗原、抗体的定量测定及组织切片中抗原或抗体的定位、免疫复合物的检测等[1].     

猪附红细胞体PPA-ELISA检测方法的建立

用物理方法纯化猪附红细胞体抗原，用纯化抗原免疫兔制备超免疫血清，以辣根过氧化物酶标记葡萄球菌A蛋白作为二抗．建立了辣根过氧化物酶标记葡萄球菌A蛋白的酶联免疫吸附试验(PPA-ELISA)检测方法。结果显示，用PPA-ELISA方法检测猪血液中的附红细胞体，具有很高的敏感性和特异性，重复性良好．完全适用于猪附红细胞体病的实验室诊断。     

应用ELISA检测鸭瘟抗体的研究

将粗提鸭瘟病毒经超速离心后作为包被抗原，以健康鸭 IgG 提纯后免疫兔，制备兔抗鸭 IgG，并用改良过碘酸钠法进行辣根过氧化物酶标记，建立了检测鸭瘟病毒抗体的间接酶联免疫吸附试验(ELISA)，经对不同血清样品的检测，表明此方法特异性高，操作简便，适于大批鸭群抗体水平监测和流行病学调查，为合理免疫和科学预防提供了技术手段。     

用酶联免疫吸附试验间接法检测猪瘟抗体

酶联免疫吸附试验间接法检测猪瘟抗体系用纯化抗原包被聚苯乙烯微量反应板,洗涤三次;加入待检血清,孵育后洗涤三次;再加入按工作效价稀释的HRP—SPA(辣根过氧化物酶标记的葡萄球菌蛋白A),孵育后洗涤三次;用OPD(邻苯二胺)配制酶的底物溶液。如血清中有猪瘟抗体存在,     

应用SPA—ELISA法检测猪血清弓形体抗体的报告

1979年 Madore 开始把葡萄球菌 A 蛋白用于酶联免疫吸附试验(SPA—ELISA),现已广泛应用于血清学诊断,由于 SPA 具有与人及多种哺乳动物血清 IgG 的 Fc 段非特异相结合的特性,在 ELISA 中代替第二抗体,但它与多种哺乳动物各种属的亲和力不同,其中与猪的 IgG 亲和力最强,我们应用 SPA-ELISA 检测猪血清弓形体抗体,并与间接血凝法(IHA)进行比较结果满意,现报道如下。     

梅花鹿结核病间接ELISA方法的建立

为了建立鹿结核病的快速检测方法,试验采用亲和层析方法纯化梅花鹿血清IgG,并免疫兔,制备兔抗梅花鹿IgG抗体,辣根过氧化物酶(HRP)进行标记,通过ELISA和Western-blot对HRP标记的兔抗梅花鹿IgG抗体进行鉴定。同时合成结核分枝杆菌38 ku基因,并与pET-22b(+)质粒连接,转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,诱导表达和纯化38 ku蛋白,以38 ku蛋白作为包被抗原,以HRP标记的兔抗梅花鹿IgG抗体作为二抗,建立间接ELISA方法。利用建立的间接ELISA方法对结核菌素皮肤试验检出的20份阴性血清和10份阳性血清进行验证。结果表明：对梅花鹿血清IgG进行纯化,得到大小分别约为50 ku和25 ku的蛋白质;制备的HRP标记的兔抗梅花鹿IgG抗体可特异性识别梅花鹿血清IgG,在抗体浓度稀释比例为1∶20 000时仍有很好的结合效果;38 ku蛋白作为抗原的最佳包被浓度为1μg/mL,被检梅花鹿血清的最佳稀释比例为1∶100,HRP标记的兔抗梅花鹿IgG抗体的最佳稀释比例为1∶10 000;间接ELISA方法能够准确区分结核菌素皮肤试验确定的阳性和阴性梅...     

酶联免疫吸附试验对绿脓杆菌抗体的检测和对马血清中抗体滴度的测定

用酶联免疫吸附试验(ELISA)对抗绿脓杆菌血清学的一种共同抗原(原始内毒素蛋白质)。蛋白酶和弹性蛋白酶的免疫球蛋IgM和IgG抗体的检测。对马血清中绿脓杆菌抗体滴度的测定。利用辣根过氧化物酶标记兔抗马IgM和IgG抗体作为酶标记抗体结合物。利用5氨基水杨酸(5—Aminosalicylic(?)acid)和H_2O_2作为底物。以免疫马、新生驹和72匹健康赛马的血清作为ELISA和被动血球凝集研究的抗绿脓杆菌抗体。通过ELISA,免疫马IgG抗体滴度的变化是清楚的。在新生驹中,出生后第一天,IgM和IgG抗体的数量主要是来自初乳,同时指出,新生驹的抗体水平开始低然后增加。抗绿脓杆菌原始内毒素蛋白质,蛋白酶和弹性蛋白酶的抗体,几乎存在于所有被研究的健康赛马中。     

应用酶联葡萄球菌A蛋白的酶联免疫吸附试验检测奶山羊血清中抗布氏杆菌抗体的研究

1977年,Dudois—Dalcq以辣根过氧化物酶标记葡萄球菌A蛋白(PPA),用于检测细胞中麻疹和水疱性口膜炎病毒抗原的研究,获得了满意的结果。1979年,酶联葡萄球菌A蛋白酶联免疫吸附试验(PPAELISA)用于检测人血清中狂犬病抗体(Atanasiu)。随后,又有检测豚鼠、家兔     

应用间接酶联免疫吸附试验检测鸡传染性鼻炎抗体

本文应用聚苯乙烯塑料微量滴定板作为固液载体，辣根过氧物酶标记的羊抗鸡IgG为第二抗体，邻苯二胺为底物建立检测鸡传染性鼻炎抗体的间接酶联免疫吸附试验。对大庆市A、B、C三个种禽场的鸡群抽样采血检测，结果在被检的154份血清样品中，IC抗体阳性血样为35份，阳性检出率为22．8％。该方法具有快速、简便、敏感、特异等优点，适合于临床诊断和大批量样品检验。     

用生物素-亲和素强化免疫斑点试验检测口蹄疫病毒的研究

传统酶联免疫吸附试验一般用辣根过氧化物酶(HRP)标记IgG进行检测。HRP的稳定性虽好,但敏感性稍差。为了克服这一不足,引入碱性磷酸酶(AP)检测系统,进行免疫强化斑点试验检测口蹄疫病毒的研究。用光敏生物素标记纯化的A蛋白(SPA)代替第二抗体,通过AP标记的亲和素(Avidin-AP)检测生物素化抗体,最后加入底物BCIP和NBT显色判定。该法操作简单、检测时间短,并具有良好的特异性和重复性。由于引入生物素系统和AP,检测的灵敏度比曾通ELISA高。     

筛选伊氏锥虫单克隆抗体检测方法的建立—ELISA

首先采用DEAE纤维素柱层析法从感染动物血液中分离获得纯净的伊氏锥虫,通过超声乳化结合离心得到可溶性锥虫抗原,作为免疫接种及检测用:通过免疫大白鼠获得鼠抗伊氏锥虫阳性血清,用辣根过氧化物酶标记羊抗鼠IgG血清获得酶标抗体,经测试,抗原工作浓度为1:80(原浓度为2.57mg/ml),酶标抗体工作浓度为1:400,从而建立了酶联免疫吸附试验(ELISA),作为筛选抗伊氏锥虫单克隆抗体的检测手段。实践证明该方法灵敏度高,特异性强,使用方便。     

酶联免疫吸附试验检测弓形虫抗体的有关因素及诊断价值研究

近年来,酶联免疫吸附试验(ELISA)广泛地应用于各种疾病的血清学诊断研究,并在技术上进行不断改进和完善。本文对ELISA检测弓形虫抗体的有关因素及诊断价值进行了探讨,现将结果报告如下。材料和方法1.弓形虫(CN株)速殖子可溶性抗原:系上海市农业科学院畜牧兽医研究所提供。2.羊抗兔IgG酶标记物(简称酶结合物):采用快速过碘酸钠标记法制备。     

应用阻断酶联免疫吸附试验检测牛白血病病毒抗体

多年来,都用琼脂凝胶免疫扩散(AGID)试验检测牛白血病病毒(BLV)抗体。而此疫病的普查和根除需要检测大量的样品,酶联免疫吸附试验就可满足这一要求,间接法是先将提纯的抗原包被到固相载体,再加试验血清和特异性IgG结合物,阻断法是利用试验血清中的抗体干扰或阻断标准抗原-抗体     

斑点酶联A蛋白免疫吸附试验(Dot-PPA-ELISA)检测猪衣原体抗体方法的建立

本研究建立了斑点酶联A蛋白免疫吸附试验（Dot-PPA-ELISA）,对猪衣原体IgG的最小检测量为1.21 ng。以间接血凝试验方法为对照,两种方法同时检测120头份猪血清样品,Dot-PPA-ELISA检出43头份（35.83%）,效价≥256;间接血凝试验检出26头份（21.67%）,效价≥64。诊断膜片与猪瘟、猪布氏杆菌病、猪口蹄疫和猪弓形体病标准阳性血清均不出现有意义的交叉反应。诊断膜片置室温、4℃和-20℃下至少保存3个月其抗原效价不变。试验表明本方法重复符合率为94.44%,且反应效果不受反应板质量和新旧的影响;试剂用量节省,各步骤均可做到严格定量,操作简便,3 h内可出结果,肉眼即可判断,不需要特殊检测仪器。由于辣根过氧化物酶标记的葡萄球菌A蛋白（PPA）是一种广谱诊断试剂,因此Dot-PPA-ELISA还可以用于其它哺乳动物衣原体抗体的检测。     

用3AB-ELISA鉴别猪口蹄疫病毒感染与疫苗免疫猪的研究

采用大肠埃希氏菌表达的口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白3AB(FMDV-3AB)多肽为抗原，A／G蛋白-辣根过氧化物酶为酶结合物，过氧化氢-四甲基联苯胺为底物溶液，建立了一种可鉴别FMD感染与灭活疫苗免疫猪血清抗体的间接酶联免疫吸附试验(I-ELISA)，即3AB-ELISA。通过对1779份健康猪、免疫猪及人工感染猪血清的检测，确定了该I-ELISA的阳性/阴性判定临界值。该检测方法比VIAA-AGID法检出率高，尤其是采用A／G蛋白酶结合物后操作更简便。     

鹅副黏病毒NP蛋白间接ELISA检测方法的建立及免疫鹅抗体水平的检测

以纯化的鹅副黏病毒NP蛋白为包被抗原,建立了检测鹅副黏病毒NP蛋白抗体的间接ELISA方法,并确定了间接ELISA的最适反应条件：抗原包被浓度为1.0μg/mL,血清稀释度为1∶200,兔抗鹅IgG辣根过氧化物酶标记抗体稀释度为1∶2 000,抗原和血清、血清和二抗均于37℃反应1 h,底物于37℃显色15 min。此间接ELISA方法的特异性强、重复性好。应用该方法对试验鹅血清进行检测,以HI试验为参照。经统计学处理后,比较了两方法测得的抗体效价,分别建立了各组鹅群的回归方程。显著性检验证明,这两种方法检测的抗体效价呈显著相关关系。     

三种检测禽副粘病毒2型(PMV-2)抗体方法的建立及其与HI方法的比较

建立了检测血清中禽副粘病毒2型（PMV-2）抗体的间接免疫荧光试验（IFA）、间接法酶联免疫吸附试验（ELISA）以及斑点酶联免疫吸附试验（Dot—ELISA）方法，并将三种方法同血凝抑制试验（HI）进行了比较。结果表明，建立的IFA、间接ELISA和Dot—ELISA等三种抗体检测方法其敏感性、特异性均很好，与HI方法相比，敏感性也大大增强。     

鹿副结核病抗体间接ELISA检测方法的建立

本研究以副结核杆菌亲和层析抗原为检测抗原,检测以草分枝杆菌抗原吸收的待检鹿血清,建立检测鹿副结核病血清抗体的间接酶联免疫吸附试验,确定其抗原最佳包被浓度为40μg/mL,血清样品稀释度为1:80,兔抗鹿IgG辣根过氧化物酶标记抗体稀释度为1:8000。经特异性试验和重复性试验证明该方法特异性高、重复性好。对不同地区4个鹿场的760头份鹿血清进行副结核病抗体检测,其中阳性61头份,阳性率为8%,获得副结核病在我国鹿群中的血清流行病学资料,从而为防制鹿副结核病提供一定的依据。     

蛋白A/G在PPR H蛋白ELISA中的应用研究

分别以山羊、绵羊和牛的阳性血清和阴性血清作为待检血清,分别以酶标蛋白A/G、酶标兔抗山羊抗体、酶标兔抗绵羊抗体和酶标兔抗牛抗体作为酶标二抗,进行以小反刍兽疫(PPR)裂解蛋白为抗原和基于抗血凝素(H)蛋白的单克隆抗体的PPRH蛋白酶联免疫吸附(ELISA)试验。结果四种酶标抗体均分别能使山羊、绵羊和牛阳性血清的百分抑制率达到100。在阳性血清百分抑制率为100时,检测山羊时酶标蛋白A/G、酶标兔抗山羊抗体的百分抑制率分别为17、12,检测绵羊时酶标蛋白A/G、酶标兔抗绵羊山羊抗体的百分抑制率分别为20、16,检测牛时酶标蛋白A/G、酶标兔抗牛抗体的百分抑制率分别为14、13。结果认为,酶标蛋白A/G而且与酶标抗抗体相比,具有本底低的优点,在PPRH蛋白ELISA试验中可以同时应用于检测山羊、绵羊和牛血清并具有较好效果。