小麦不同外植体离体培养及转化效率的比较研究

小麦基因枪法遗传转化中幼胚组织培养有很强的基因型依赖性．这在很大程度上限制了转基因小麦的广泛应用。为了建立克服基因型障碍的小麦高效再生系统．促进转基因小麦的规模化应用,对15个小麦基因型的幼穗、幼胚两种外植体的愈伤组织诱导率、绿苗分化率进行了比较研究。结果表明,各基因型愈伤组织诱导率在两种外植体之间无差异,但幼穗外植体产生的愈伤组织质量好于幼胚。15个基因型幼穗外植体的绿苗分化率均高于其相应的幼胚外植体绿苗分化率,表明幼穗是很好的外植体材料。对其中H6756和H311两个基因型不同外植体所形成的愈伤组织进行了基因枪转化,姑果表明,幼穗受体的基因转化效率明显高于其相应幼胚受体的基因转化效率。     

基因型和2,4 D浓度对小麦不同外植体离体培养特性的影响

为了探讨不同基因型、不同外植体和不同培养条件对小麦愈伤组织诱导、分化及再生的影响,以小偃22、西农1376、西农1012和西农1013为材料,对各小麦品种(系)的幼穗、花药、幼胚和成熟胚组织的培养特性及影响因素进行了研究.结果表明,愈伤组织的诱导和再生与外植体类型、基因型和培养条件密切相关.以幼穗和花药为材料,西农1376平均出愈率均最高,达98.97％和3.85％,成苗率和花培效率均值亦最高,达12.83％和2.39％;以幼胚为材料,西农1376平均出愈率也最高,达99.27％,西农1012平均成苗率最高,达51.03％;以成熟胚为材料,小偃22平均出愈率最高,达93.22％,西农1376平均成苗率达19.78％.离体培养条件下,不同小麦品种(系)的4种外植体愈伤诱导和分化率与2,4-D浓度密切相关,1.0～3.0 mg·L-1 2,4D浓度能较好地诱导4种离体组织愈伤的产生及分化.不同基因型和同一基因型的不同外植体在2,4-D最佳诱导浓度上也有差异.供试小麦4种离体组织培养再生特性比较表明,离体幼胚培养再生效率最高,成熟胚次之,幼穗最差.     

小麦不同外植体的组织培养效果研究

良好的组织培养效果是提高植物基因转化效率的基础。以山东省近年来育成并大面积推广的10个优良品种（系）为材料,对这些品种的花药、幼穗、幼胚和成熟胚的组织培养效果进行研究,旨在筛选每一基因型最适合于组织培养的外植体类型,为应用基因工程技术进行小麦遗传改良提供基础材料。结果表明,禽伤诱导率和再生成苗率与基因型和外植体类型（花药、幼穗、幼胚和成熟胚）密切相关。8802在花药和成熟胚培养中表现突出,花药出愈率达119．5％,愈伤分化成苗率19．9％;烟农19的幼穗愈伤直接分化成苗率最高,这43．5％;8802、烟农19和潍麦8号三个基因型的幼胚培养效果差异不显著,其愈伤分化成苗率分别为26．3％、24．5％和24．8％。蔗糖浓度在3％～9％之间,对成熟胚的愈伤组织诱导率影响很小。高浓度蔗糖降低愈伤生长速度。在一定蔗糖浓度下,愈伤诱导率与2,4-D浓度密切相关,高浓度的2,4-D对愈伤组织再生不利。MS＋4mg／L2,4-D对于成熟胚的脱分化相对较好,MS和MS＋0．4mg／L NAA＋0．6mg／L KT作为成熟胚的愈伤组织再生培养基,对不同基因型具有一定的适用性。     

小麦幼穗离体培养初步研究

小麦幼穗离体培养初步研究刘思衡，康水英，连秀叶，巫升鑫，郭玉春（福建农业大学农学系福州３５０００２）八十年代以来，我国小麦以幼胚、幼穗和成熟胚离体培养筛选拉赤霉病细胞突变体的研究日益增多，并逐渐形成生物技术育种的新体系（欧阳闻俊１９９０，吴志风等１９...     

小麦幼胚离体培养研究概况

小麦幼胚离体培养研究概况何花榕，杨惠杰（福建省农科院稻麦研究所）近年来，随着生物技术的发展，利用体细胞组织进行离体培养的研究和应用发展迅速。在几种主要禾本科农作物中，小麦体细胞组织培养的成功虽然比玉米和水稻略晚，但据近几年的报道，用小麦未成熟胚、幼穗...     

小麦幼胚离体培养育种技术研究

利用小麦幼胚离体培养技术进行了育种试验,结果表明,烟台地区适宜外植体（幼胚）的有效胚龄期１４～２０ｄ最适胚龄期１６ｄ,培养历期为１２０～１５０ｄ;幼胚盾片应向上放置２,４－Ｄ浓度大小随基因型不同而有差异,一般在１～４ｍｇ／Ｌ时分化率最高,选择分化率高的优良基因型是创造变异,选择变异的关键,采用本技术能够创造较多的再生群体,并能较常见育种提高３～５年选育出优良小麦品系。     

普通小麦闭颖特性遗传分析及离体培养特性研究

为了给闭颖小麦的分子育种提供理论依据,进行了闭颖小麦闭颖授粉特性的遗传分析,同时对6个闭颖小麦系的花药、幼胚及成熟胚进行了离体培养特性的比较研究。结果表明,5组开、闭颖小麦杂交F1代个体全表现为开颖授粉,F2代个体开、闭颖分离,经卡平方适合性测验,开、闭颖株数均符合3∶1分离比例,表明小麦闭颖变异材料的闭颖授粉特性受一对隐性基因控制;不同闭颖小麦系离体愈伤组织诱导与再生特性有一定差异,供试的6个闭颖系中,133-1和133-8的离体培养特性优良,其中,133-1的成熟胚愈伤组织分化率最高,达到27.93%,133-8的幼胚分化率最高,达到40.70%,两材料的花药分化率也最好,都为4.48%,与对照材料小偃22处于同一水平;133-A的离体组织培养特性最差;3种外植体离体培养中,幼胚的培养再生效率最高,成熟胚次之,花药最差,供试材料的出愈率与分化率之间不具备明显的相关关系。     

不同遗传背景小麦成熟胚再生体系的初步研究

为了进一步探索小麦成熟胚再生体系的各种影响因素,选取5个不同遗传背景的小麦品种（绵阳19、西农928、洛阳8716、陕354、紫麦）,以成熟胚为外植体,对其再生条件进行了研究。结果表明,不同基因型的小麦成熟胚愈伤诱导率差异不大,均在87%以上。同一品种在不同的2,4D浓度下愈伤诱导率稍有差异,其最适2,4D浓度为4 mg·L-1。不同的激素配比对小麦成熟胚愈伤组织再生成苗有一定的影响。分化培养基中2,4D/KT(mg·L-1) 为0.5/1.5时,各基因型小麦再生率为绵阳19：16.67%;西农928: 27.69%;洛阳8716: 11.25%;陕354: 6.3%;紫麦:41.67%。2,4D/KT(mg·L-1) 为0.5/1.0时,西农928的再生率最高,为31.25%。2,4D/KT(mg·L-1)为0.2/1.0时,紫麦的再生率最高,为45.45%。     

小麦幼穗离体培养一步再生全苗影响因素的初步研究

以京花１号、晋２１４８、西安８号、豫麦３５号、豫麦１８号、豫麦２５号和Ａｌｏｎｄｖａｓ７个不同麦品种的幼穗进行离体培养,培养基与培养环境共分４种组合：①ＭＳ＋ＫＴ１ｍｇ／Ｌ＋２,４－Ｄ０．５ｍｇ／Ｌ,照光１１ｈ／ｄ;②Ｎ６＋ＫＴ１ｍｇ／ＬＫ＋２,４－Ｄ０．５ｍｇ／Ｌ,照光１１ｈ／ｄ;③ＭＳ＋ＫＴ０．２ｍｇ／Ｌ＋２,４－Ｄ２ｍｇ／Ｌ,照光１１ｈ／ｄ;④ＭＳ＋ＫＴ１ｍｇ／Ｌ＋２,４－Ｄ０．５ｍｇ／Ｌ,     

小麦幼胚离体培养育种技术研究

利用小麦幼胚离体培养技术进行育种试验。结果表明,烟台地区适宜外植体（幼胚）的有效胚龄期为 １４～２０ ｄ,最适胚龄期 １６ ｄ,培养历期为 １２０～１５０ ｄ ;幼胚盾片应向上放置;２,４－ Ｄ 浓度大小随基因型不同而有差异,一般在 １～４ ｍ ｇ ／ Ｌ 时分化率最高;选择分化率高的优良基因型是创造变异、选择变异的关键。采用本技术能够创造较多的再生群体,并能较常规育种提前 ３～５ 年选育出优良小麦品系。     

小麦不同转基因受体材料的植株再生培养研究

为了确定适宜的小麦转基因受体材料,通过不同取材和预处理,发现小麦幼胚作为基因枪转化的受体材料,其愈伤组织形成与芽分化能力优于幼穗。幼胚在枪击前的预培养时间对愈伤组织抗轰击损伤和恢复生长能力都有明显影响,预培养2周的幼胚愈伤组织作为受体的再生率较高。在轰击前6h到轰击后18h用0.4mol·L-1甘露醇处理,能增加分化率。小麦基因型不同,基因转化与植株再生的效果也有明显差别,本研究中豫麦18-64是较理想的受体基因型。     

不同基因型甜菜叶柄的组织培养及植株的再生

本文报导了６种不同基因型甜菜叶柄的离体培养结果。实验通过预培养、诱导分化培养,获得了再生植株,建立了甜菜快速繁殖程序。结果表明：甜菜幼苗先经ＭＳＢ附加一定量的６－苄氨基嘌呤（６－ＢＡ）和萘乙酸（ＮＡＡ）组合的培养基中预培养,再取叶柄（带叶片）转入ＭＳ附加６－ＢＡ和ＮＡＡ的培养基中诱导分化,不定芽发生频率为１８．３％～４７．５％,不同基因型材料,诱导率不同。采用ＭＳＢ或ＭＳ大量元素减半,附加一定量的萘乙酸生根培养基,诱导生根率在８０％以上,移栽成活率高达１０％。     

珠芽魔芋组培快繁技术

为探索出一套适于珠芽魔芋的组培快繁技术体系,本研究以珠芽黄魔芋不同发育时期的叶片为外植体,开展组培快繁技术研究。结果表明：以开始伸出鳞片叶片作为外植体材料,75%酒精消毒30 s后,0.1% HgCl₂溶液中浸泡15 min为宜,其成活率达到96.7%;最优愈伤组织诱导培养基配方为MS+TDZ 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L+蔗糖30.0 g/L+琼脂6.0 g/L,其诱导率达到95.6%;最优不定芽诱导培养基配方为MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+蔗糖30.0 g/L+琼脂6.0 g/L,不定芽诱导率达到71.1%,单位接种质量愈伤组织分化芽数达到2.88;全展叶片苗在MS+NAA 0.25 mg/L+蔗糖15.0 g/L+琼脂 6.0 g/L培养基的生根率达到100.0%,平均根数达到1.36。以开始伸出鳞片叶片为外植体建立的珠芽黄魔芋组培快繁技术体系,达到了魔芋种苗的规模化生产技术水平,对解决珠芽魔芋产业发展中种芋供不应求的问题具有积极意义。     

老虎须的组织培养与植株再生

以老虎须茎段为试验材料,采用不同激素组合对其进行愈伤组织诱导和分化、芽增殖与生根研究。结果表明：老虎须茎段愈伤组织诱导和分化的最适培养基分别为MS＋6-BA 1.0 mg/L＋KT 3.0 mg/L＋NAA 0.5 mg/L和MS＋6-BA 1.0 mg/L＋KT 1.0 mg/L＋NAA 0.5 mg/L;芽增殖的最适培养基为MS＋6-BA 2.0 mg/L＋IAA 0.2 mg/L;生根的最适培养基为1/2 MS＋IBA 0.5 mg/L。     

蜻蜓凤梨叶片组织培养植株再生的研究

以蜻蜓凤梨试管苗叶片为外植体进行离体再生研究。结果表明,叶片诱导直接分化不定芽的最佳培养基是MS＋BA 5.0 mg/L＋IBA 1.5 mg/L,分化率高达80%。增殖培养基为MS＋BA 0.5 mg/L＋NAA 0.2 mg/L。壮苗培养基为MS＋NAA 2.0 mg/L。生根培养基为MS＋NAA 2.0 mg/L＋AC 0.5 g/L,生根率达100%。     

水田七的组织培养和植株再生

用水田七成熟种子为材料进行无菌播种,得到无菌苗再用幼叶、叶柄为材料进行组织培养和植株再生。经试验得出各阶段适宜的培养基分别为：(1)诱导愈伤组织：MS＋2.0 mg/L TDZ;(2)诱导芽分化：MS＋1.5 mg/L 6-BA＋0.5 mg/L NAA;(3)生根培养：1/2MS＋0.5 mg /L IBA＋0.1 mg/L NAA。     

玉米幼胚培养及植株再生的研究

以不同玉米自交系幼胚为外植体,研究不同2,4-D浓度对愈伤组织诱导、6-BA浓度对愈伤组织分化和6-BA与NAA配合使用对试管苗生根的影响。结果表明:不同2,4-D浓度对愈伤组织诱导率影响差异不明显,但对胚性率诱导有明显影响,其诱导最佳培养基为MS+2,4-D 2 mg/L+水解酪蛋白500 mg/L+脯氨酸500 mg/L;愈伤组织分化的最佳培养基是MS+6-BA0.5 mg/L+水解酪蛋白500 mg/L+谷氨酰胺200 mg/L+PP₃₃₃ 2 mg/L;试管苗生根的最佳培养基是1/2 MS+6-BA0.5 mg/L+NAA2.0 mg/L+PP₃₃₃ 2.0 mg/L+活性炭0.2%。     

贵港报春苣苔的叶片组培与植株再生

以贵港报春苣苔的叶片为外植体,研究不同培养基对其不定芽诱导和增殖、愈伤组织诱导与分化以及生根的影响。结果表明,外植体叶片以纵切为宜,不定芽诱导最适培养基为MS+6-BA 4.0 mg/L+IAA 1.5 mg/L,愈伤组织诱导最适培养基为MS+6-BA3.0～5.0 mg/L+2,4-D0.5～1.0 mg/L,不定芽诱导率以及愈伤组织诱导率均为100.00%;愈伤在MS+KT 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+potato 30 g/L+banana 30 g/L+apple 20 g/L+coconut juice 100 mL/L培养基上分化系数达12.64;不定芽在MS+ZT 1.0 mg/L+NAA 0.10 mg/L+potato 30 g/L+banana 30 g/L+apple 20 g/L+coconut juice 100 mL/L培养基的增殖系数为8.55;不定芽在3/4 MS+NAA 0.01～0.05 mg/L+活性炭1.0～3.0 g/L培养基上的生根率为100.00%。综上所述,叶片纵切后能通过不定芽途径以及愈伤组织途径建立贵港报春苣苔的组织培养技术体系,在该体系下不定芽增殖系数高、愈伤分化高,组培苗生根好。     

大苞鞘石斛组织培养快繁研究

为筛选出大苞鞘石斛组培快繁体系各阶段最适培养基配方,以大苞鞘石斛无菌苗茎段为外植体,通过正交试验研究不同因素对大苞鞘石斛植株再生的影响。结果表明:拟原球茎诱导最适培养基为1/2MS+2,4-D0.2 mg/L+蔗糖30 g/L,诱导出的拟原球茎直径1.5 mm时将其从茎段上剥离,并接入原培养基继续诱导15~20 d;拟原球茎增殖最适培养基为1/2MS+NAA 1 mg/L+蔗糖30 g/L+椰乳10%,继代周期25~30 d;拟原球茎分化最适培养基为1/2MS+NAA 0.5 mg/L+蔗糖30 g/L+椰乳10%,分化培养需40 d;将分化的无菌苗继代于花宝2号3 g/L+蛋白胨2 g/L+IBA 1 mg/L+蔗糖30 g/L+椰乳10%生根诱导效果最好,培养45 d;生根壮苗最佳培养基为花宝1号3 g/L+蛋白胨2 g/L+蔗糖30 g/L+活性炭1 g/L,培养50 d。