东方蜜蜂微孢子虫对密林熊蜂的致病机理

【研究目的】东方蜜蜂微孢子虫(Nosema ceranae)是一种细胞内专性寄生的微孢子虫,广泛寄生于东方蜜蜂(Apis cerana)和西方蜜蜂(Apis mellifera),不仅是危害蜜蜂的主要病原物之一,而且近年来国内外报道发现N.ceranae也感染重要经济昆虫-熊蜂(Bombus Latreille);【方法】采用传统生物学和电镜超微结构观察结合qPCR定量分析对N.ceranae在密林熊蜂上的致病机理进行了探讨;【结果】感染初期工蜂除取食减少和行动迟缓外无明显外观染病特征,感染后期工蜂萎靡,衰弱,飞翔无力。解剖后镜检发现中肠仅存少量孢子,但充满大量的细菌;熊蜂肠道组织切片发现N.ceranae主要经肠绒毛侵染中肠上皮细胞,核膨大并变形、线粒体体积变小甚至解体,内质网紊乱,但孢子只侵染寄主细胞质而不侵入细胞核,最终因线粒体解体,细胞破裂而导致死亡;qPCR定量分析得出在接种的3⁴ d中肠和脂肪体中N.ceranae的感染量达到最高值,其他组织则基本未检测到;【结论】根据研究并结合前人工作,认为N.ceranae侵染熊蜂的病理过程是从中肠细胞的病理变化开始的,最后导致寄主细胞的碎裂、死亡,这一过程逐渐扩大至寄主的整个组织、器官,以致其功能丧失,严重的会导致熊蜂死亡。     

蜜蜂微孢子虫对蜜蜂越冬的影响

蜜蜂微孢子虫病(microsporidian disease)病原为蜜蜂微孢子虫(Nosema p.),是一种分布广泛的成年蜂病,为重要的检疫性病害。对感染蜜蜂微孢子虫病的越冬蜂进行研究发现,蜜蜂微孢子虫感染率与蜜蜂越冬安全关系密切,各组合实验蜂群蜜蜂越冬死亡率均为差异极显著(U检验,P0.01),即感染蜜蜂微孢子虫的蜂群,蜜蜂死亡率和饲料消耗量都明显高于对照组,且不同程度发生下痢症状。为蜜蜂微孢子虫的侵染机制研究提供理论数据,为进一步筛选功能基因奠定基础,从而推动我国特色蜜蜂产业健康快速发展。     

东方蜜蜂微孢子虫的研究进展

<正>两年前,玛丽亚诺·伊赫斯博士的研究团队(西班牙养蜂分中心)因报道东方蜜蜂微孢子虫(Noce-ma ceranae)可能导致蜂群锐减而震惊蜂业界。突然     

同生境下两种蜜蜂微孢子虫对东、西方蜜蜂蜂群的感染状况调查

蜜蜂微孢子虫已被确认为是导致世界性蜜蜂损失的重要病原之一。因商业目的导致不同地区蜂种栖息地扩张与重叠,使两种原寄主分别为东、西方蜜蜂的微孢子虫(东方蜜蜂微孢子虫和西方蜜蜂微孢子虫)得以在不同蜂种间传播。新病原的入侵在对当地蜜蜂资源造成威胁的同时,外来蜂种成为地区性病害传播的媒介。而迁徙性的蜜蜂饲养模式进一步将这种不利影响放大,进而威胁整个养蜂业的持续发展。研究数据显示,东方蜜蜂微孢子虫在人工饲养蜂群中已取代西方蜜蜂微孢子虫成为优势寄种群,但在自然条件下这两种蜜蜂微孢子虫如何作用饲养蜂群的相关数据缺乏。对东、西方蜜蜂混合饲养蜂场和山区东方蜜蜂隔离蜂场的蜜蜂样本进行两种蜜蜂微孢子虫PCR特异性检测,仅检出东方蜜蜂微孢子虫,且西方蜜蜂蜂群微孢子虫感染率高于东方蜜蜂,混合饲养蜂场东方蜜蜂蜂群微孢子虫感染率高于山区东方蜜蜂隔离蜂场感染率。     

东方蜜蜂微孢子虫感染西方蜜蜂工蜂中肠的蛋白质组学分析

通过分析西方蜜蜂工蜂感染东方蜜蜂微孢子虫Vairimorpha ceranae(Nosema ceranae)后，中肠蛋白质组的差异，探讨病原与中肠细胞的互作机制。给西方蜜蜂5日龄工蜂自由取食含10⁴个·μL^-1的孢子蔗糖液48 h后，在30℃恒温饲养18 d(23日龄)。结果表明，感染组工蜂存活率仅为34.81%,显著低于对照组的71.85%(P<0.05),感染后工蜂中肠蛋白浓度显著下降(P<0.05),但两组的平均单只日均糖液消耗量没有显著差异(P>0.05)。通过串联质谱标签(TMT)定量蛋白分析系统比较了感染组与对照组工蜂的中肠蛋白质组差异，发现差异显著的蛋白共565个，其中感染中肠显著上调的蛋白有301个，显著下调的蛋白有264个。差异蛋白GO富集分析显示，感染对中肠细胞的细胞进程、能量代谢、细胞形态、蛋白质复合物、分子结合和催化活性等有显著影响；KEGG通路注释发现富集到氨酰-tRNA生物合成、内质网中的蛋白质加工、不同类型的N-聚糖生物合成显著上调，部分抗氧化相关的蛋白显著上调；而显著下调蛋白富集到氨基酸代谢...     

综述蜜蜂孢子虫病的防治方法

蜜蜂微孢子虫可感染蜜蜂,引起蜜蜂孢子虫病,严重影响蜜蜂的生长繁殖,对养蜂业造成巨大损失,是感染蜜蜂的主要病原微生物之一。结合实验室经验,主要从感染前预防和感染后治疗两方面出发,介绍了蜜蜂孢子虫病的防治方法,为防治蜜蜂孢子虫病提供一个系统而全面的参考。     

东方蜜蜂微孢子虫

蜜蜂孢子虫病通常是指西方蜜蜂被蜜蜂孢子虫(Nosema apis Zander 1909)寄生发生的一种慢性病,在北方由于越冬期间长病情较重.病情严重时,染病蜜蜂往往在冬末和早春在巢内和巢门前及其他地方下痢,使蜜蜂孢子虫孢子污染巢脾、蜂箱、蜜源及水源.     

蜜蜂孢子虫病的检测与防治研究进展

孢子虫病是西方蜜蜂的主要病害之一,其病原包括蜜蜂微孢子虫(Nosema apis)和东方蜜蜂微孢子虫(Nosema ceranae)。本文主要介绍蜜蜂孢子虫病的检测和防治方法的研究进展。     

意蜂群中不同日龄工蜂的东方蜜蜂微孢子虫感染差异比较

东方蜜蜂微孢子虫是蜜蜂中肠上皮细胞内专性寄生单细胞真菌,对蜜蜂健康有较大影响。2011年4-5月,对4群意大利蜂群中0日龄至30日龄工蜂中肠的微孢子虫感染情况进行了调查和比较,结果表明,5日龄以下工蜂中未检出,10日龄后,工蜂的感染率为13.8%,之后逐渐增加;20日龄后感染率极显著增加(P<0.01),平均感染率约70%,并持续维持在高感染水平。20及25日龄的感染蜂中,严重感染的工蜂比例极显著高于轻度感染的比例(P<0.01)。     

浙江金华地区越冬意蜂群大量死亡原因调查与分析

2014年冬,浙江多地意蜂群出现大量死亡。为了探究这一突发事件的原因,我们实地察看了现场、发放了调查问卷,并取样进行了病毒和微孢子虫的检测分析。结果表明,本次突发事件的主要原因可以排除急性农药中毒和急性污染物中毒的可能性。在病毒感染率上,患病蜂群DWV的感染率显著高于健康蜂群,但健康蜂群BQCV的感染率却显著高于患病蜂群。在病毒多重感染水平和病毒滴度上,患病蜂群显著高于健康蜂群;同时,患病蜂群N.ceranae的感染率和感染水平都要显著高于健康蜂群。本研究提示多重病毒感染、DWV和IAPV的高病毒滴度及N.ceranae的感染和这次蜜蜂死亡事件密切相关。鉴于狄斯瓦螨在促进病毒病方面的作用,蜂螨也有可能是蜂群死亡的间接原因之一。此外,本研究同时表明,几乎所有的表面健康蜂群同时感染多种病原,健康情况堪忧。为避免类似死亡事件的发生,一方面需力求降低病原体的感染水平,另一方面可以调整饲养管理方式促进蜜蜂的健康水平,同时减少外界不良因素的刺激。     

家蚕微孢子虫蛋白水解酶的活性检测及质谱鉴定和序列分析

微孢子虫的蛋白水解酶类不仅参与代谢活动,而且可能作为一种潜在的侵染宿主的毒力因子。为了研究家蚕微孢子虫蛋白水解酶的种类及蛋白质结构特点,将家蚕微孢子虫总蛋白经非变性凝胶电泳后与底物酪蛋白孵育,检测到可水解酪蛋白的蛋白酶类的活性。采用质谱法分析该类蛋白酶主要是锌离子依赖型的细胞质型亮氨酰氨肽酶和丝氨酸蛋白酶。细胞质型亮氨酰氨肽酶序列是由1 515个碱基编码的505个氨基酸组成,无信号肽,有2个潜在的锌离子结合部位,属于金属蛋白酶M17家族;丝氨酸蛋白酶具有肽酶S8结构域和跨膜域。通过序列比对发现在兔脑炎微孢子虫、蝗虫微孢子虫、蜜蜂微孢子虫、肠道微孢子虫和比氏肠道微孢子虫中均有这2种酶,且相似度较高,其进化较为保守。     

The growing prevalence of Nosema ceranae in honey bees in Spain, an emerging problem for the last decade

Microsporidiosis caused by infection with Nosema apis or Nosema ceranae has become one of the most widespread diseases of honey bees and can cause important economic losses for beekeepers. Honey can be contaminated by spores of both species and it has been reported as a suitable matrix to study the field prevalence of other honey bee sporulated pathogens. Historical honey sample collections from the CAR laboratory (Centro Apícola Regional) were analyzed by PCR to identify the earliest instance of emergence, and to determine whether the presence of Nosema spp. in honey was linked to the spread of these microsporidia in honey bee apiaries. A total of 240 frozen honey samples were analyzed by PCR and the results compared with rates of Nosema spp. infection in worker bee samples from different years and geographical areas. The presence of Nosema spp. in hive-stored honey from naturally infected honey bee colonies (from an experimental apiary) was also monitored, and although collected honey bees resulted in a more suitable sample to study the presence of microsporidian parasites in the colonies, a high probability of finding Nosema spp. in their hive-stored honey was observed. The first honey sample in which N. ceranae was detected dates back to the year 2000. In subsequent years, the number of samples containing N. ceranae tended to increase, as did the detection of Nosema spp. in adult worker bees. The presence of N. ceranae as early as 2000, long before generalized bee depopulation and colony losses in 2004 may be consistent with a long incubation period for nosemosis type C or related with other unknown factors. The current prevalence of nosemosis, primarily due to N. ceranae, has reached epidemic levels in Spain as confirmed by the analysis of worker honey bees and commercial honey.     

日粮纤维对猪生长性能、营养代谢及肠道生理的影响

日粮纤维作为饲料的重要组成成分,对猪只的生产性能和健康状况都有积极作用,日粮纤维对猪只采食量、饲料利用率及肠道健康的研究已引起国内外广泛关注。文章综述了日粮纤维对猪只生长性能、营养利用及肠道微生物的影响,为今后探究猪只对饲料中日粮纤维的利用提供参考。     

微孢子虫O-甘露糖糖基化通路相关酶基因序列的比较分析

糖蛋白在免疫识别、信号转导等生命进程中扮演重要角色。为研究微孢子虫糖蛋白及其糖基化类型,采用比较基因组学方法对微孢子虫O-甘露糖糖基化通路进行分析。真核生物的O-甘露糖糖基化通路中有6种主要酶类,包括己糖激酶、磷酸甘露糖酶、GDP甘露糖磷酸化酶、Dol-P甘露糖合成酶、甘露糖转移酶、Dol-P甘露糖蛋白甘露糖转移酶。通过生物信息学方法分析家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)、蜜蜂微孢子虫(Nosema ceranae)、兔脑炎微孢子虫(Encephalitozoon cuniculi)、肠脑炎微孢子虫(Encephalitozoon intestinalis)、比氏肠道微孢子虫(Encephalitozoon bieneusi)和柞蚕微孢子虫(Nosema antheraea)的这6种酶基因编码氨基酸序列特征及结构域类型,发现这些酶的垂直同源基因比较保守,多重序列比对表明在6种微孢子虫之间,6种酶的氨基酸序列相似性比较高,系统进化分析显示同属的微孢子虫多聚为一簇。研究结果表明,N.bombycis、N.ceranae、E.cuniculi、E.intestinalis和N.antheraea 5种微孢子虫的O-甘露糖糖基化的蛋白质修饰通路是完整、保守的,然而在E.bieneusi中,其关键酶Dol-P甘露糖蛋白甘露糖转移酶的氨基酸序列比较短,只有342个氨基酸,缺失了关键结构域PMT,因此可能无法完成O-甘露糖糖基化修饰。以上微孢子虫的O-甘露糖糖基化通路中6种主要酶的序列信息,为后续解析家蚕微孢子虫糖基化通路及对糖蛋白糖基化类型与功能的研究提供了线索。     

家蚕微孢子虫总蛋白两条大分子量主带的LC-MS/MS分析

为了深入认识家蚕微孢子虫高分子量蛋白的主要组成,我们采用LC-MS/MS技术鉴定分析玻璃珠破碎法提取的家蚕微孢子虫总蛋白中85kD以上两条主要蛋白带。我们从H1带(位于150～200kD之间)中成功鉴定出16个蛋白,包括极管蛋白3(PTP3)、极管蛋白2(PTP2)、真核蛋白翻译起始因子(eIF2C2)、延伸因子(EF1-alpha、EF2)、肌动蛋白(actin)等。这暗示两种结构蛋白PTP3与PTP2以及蛋白翻译延伸因子(EF1-alpha、EF2)与肌动蛋白(actin)可能各形成一个复合体。并且用SDS或β-巯基乙醇处理时,这两个复合物是稳定的,表明这些复合物的相互作用力不仅仅是通过二硫键。H2带(85～100kD)鉴定出主要集中在水解酶、蛋白合成与折叠、细胞结构、运动四个方面的20多个的蛋白。从两条蛋白带鉴定出PTP3与PTP2、三磷酸腺苷酶(ATPase)或过渡期内质网三磷酸腺苷酶(ATPase-TER94)、蛋白翻译因子(eIF2C、EF1-alpha、EF2)、HSP70、Actin、M1家族氨肽酶1(M1family aminopeptidase)6类蛋白。基于蛋白分子质量分析,暗示在家蚕微孢子虫中,这6类蛋白都可能是以复合体形式呈现的。研究结果丰富家蚕微孢子虫高分子量蛋白的数据,同时,为研究非二硫键间的蛋白互作提供了有价值的研究线索。     

不同地域来源的家蚕微孢子虫DNA特异片段序列及同源性分析

利用碱裂解方法抽提到山东株系的家蚕微孢子虫 (Nosemabombycis,N .b)的基因组DNA ,通过PCR技术扩增得到了N .b的一段特异的DNA片段 ,经测序发现 ,该片段大小为 317bp。将其与日本株N .b和广东株N .b的序列比较得知 ,山东株N .b和广东株N .b ,山东株N .b和日本株N .b ,以及广东株N .b和日本株N .b之间的序列同源性分别为 94 .0 0 %、96 .2 1%、92 .11%。进一步聚类分析发现 ,山东株N .b和日本株N .b之间的亲缘关系更接近     

Rapidly quantitative detection of Nosema ceranae in honeybees using ultra-rapid real-time quantitative PCR

BackgroundThe microsporidian parasite Nosema ceranae is a global problem in honeybee populations and is known to cause winter mortality. A sensitive and rapid tool for stable quantitative detection is necessary to establish further research related to the diagnosis, prevention, and treatment of this pathogen.ObjectivesThe present study aimed to develop a quantitative method that incorporates ultra-rapid real-time quantitative polymerase chain reaction (UR-qPCR) for the rapid enumeration of N. ceranae in infected bees.MethodsA procedure for UR-qPCR detection of N. ceranae was developed, and the advantages of molecular detection were evaluated in comparison with microscopic enumeration.ResultsUR-qPCR was more sensitive than microscopic enumeration for detecting two copies of N. ceranae DNA and 24 spores per bee. Meanwhile, the limit of detection by microscopy was 2.40 × 10⁴ spores/bee, and the stable detection level was ≥ 2.40 × 10⁵ spores/bee. The results of N. ceranae calculations from the infected honeybees and purified spores by UR-qPCR showed that the DNA copy number was approximately 8-fold higher than the spore count. Additionally, honeybees infected with N. ceranae with 2.74 × 10⁴ copies of N. ceranae DNA were incapable of detection by microscopy. The results of quantitative analysis using UR-qPCR were accomplished within 20 min.ConclusionsUR-qPCR is expected to be the most rapid molecular method for Nosema detection and has been developed for diagnosing nosemosis at low levels of infection.     

微粒子感染对家蚕过氧化氢代谢的影响

本文探讨了100万N.b/(mm)~3感染五龄起蚕对家蚕过氧化氢代谢的影响,结果表明:①N.b感染后H_2O_2:水平后期显著增加,SOD活性差异不显著,CAT活性显著升高;②硒处理组添食N.b后H_2O_2水平与单纯添食N.b相似,SOD活性在第5、第7天显著升高,CAT活性第2、4、5天显著增加;③磁处理组添食N.b后与单纯添食N.b相比,H_2O_2含量初期显著升高,但从第5天开始显著降低而与对照接近,SOD活性初期显著降低,中后期与单纯N.b处理接近,CAT活性第6、7、9三天显著下降.N.b感染对家蚕H_2O_22代谢的最显著影响是CAT活性上升.     

蝗虫微孢子虫病田间流行的初步调查

在内蒙古乌盟达茂旗蝗害常发区，应用蝗虫微孢子虫（NosemalocustaeCanning）后，主要优势种蝗虫，亚洲小车蝗（Oedaleusasiaticus）、宽须蚁蝗（Myrmeleotettixpalpalis）、白边痂蝗（Bryodemaluctuosum）和皱膝蝗（Angaracrisspp．）等均可感染该病。应用后的当年，混合种群的感染率曲线是双峰型，后一峰值较高，表明该病原物可以自然流行于该地区内的蝗虫种群中。1993年分别对1988年、1989年、1991年和1992年应用蝗虫微孢子虫饵剂处理区进行定点取样调查结果表明：在应用蝗虫微抱子虫治蝗多年后的草场上，蝗虫种群中仍有蝗虫微孢子虫病存在，在有些年份可形成一定规模的流行。主要优势种蝗虫的平均感染率在应用后的不同年份中有差异。田间小区试验结果表明蝗虫微孢子虫的应用剂量也是影响蝗虫微孢子虫病流行曲线变动的重要因素。     

蝗虫微孢子虫病在蝗虫和群间的流行规律研究

在同德县北巴滩进行了不同浓度蝗虫微孢子虫（N.L)小区试验和大面积推广试验，并在1997和1999年对防治效果作了调查，结果表明N.L不仅当年虫口减退率和感病率可达60％和50％以上（30天），而且在1997年、1999年防区内平均感病率仍保持在30％和40％。说明N.L具有较强的水平扩散能力和垂直感染能力，可持续、有效地控制蝗灾的发生。