流行性乙型脑炎病原生态学的研究概况

流行性乙型脑炎也称日本脑炎(简称乙型脑炎或乙脑),是由日本脑炎病毒(JEV)经媒介蚊虫传播的严重的人兽共患病.JEV能侵害人的中枢神经系统,引起病毒性脑炎,具有很高的病死率.JEV的宿主种类众多且自然分布广泛,为了有效地预防乙脑疫情的发生,有必要开展乙脑的病原生态学研究.论文就乙型脑炎的病原学特征、地理分布、自然宿主、...     

流行性乙型脑炎病毒一步法RT-LAMP检测方法的建立

为建立一种简便、快速、灵敏、特异的乙型脑炎病毒(JEV)检测方法,本研究根据GenBank中登录的25株流行性JEV基因组序列,设计3对特异性的环介导等温扩增(LAMP)引物,优化反应体系,建立了一步法反转录-LAMP(RT-LAMP)检测方法。该方法检测时间短,灵敏度比常规RT-PCR方法高,可检测出103TCID50/0.2mL JEV;特异性强,对猪细小病毒、猪圆环病毒、伪狂犬病毒、猪瘟病毒等常见猪病毒均无交叉反应。结果判定时只需要在扩增产物中加入SYBR GreenⅠ染料,就可以直接在可见光或紫外光下观察颜色变化。该方法简便快捷,省时省力,是一种适用于基层实验室快速、准确检测流行性JEV的方法。     

猪流行性乙型脑炎病毒纳米PCR检测方法的建立

根据猪流行性乙型脑炎病毒(JEV)E基因的保守区域设计1对扩增270bp片段的特异性检测引物,将纳米金颗粒添加到PCR反应体系中,同时优化反应条件,建立了高效、灵敏的纳米PCR检测方法。采用该方法灵敏度可达3.26×10~2拷贝/μL,普通PCR方法仅为3.26×10~4拷贝/μL,且与其他病毒没有交叉感染。试验结果表明,该纳米PCR检测方法不仅特异性好,而且其敏感性是普通PCR检测方法的100倍。采用纳米PCR方法和普通PCR方法对临床送检的32份样品进行检测,检测结果纳米PCR检出2份阳性样品,普通PCR检测均为阴性。     

蝙蝠作为流行性乙型脑炎病毒宿主的研究

1986、1988、1990和1997年的7－8月,在云南省共捕获653只蝙蝠,其中棕果蝠（Rousettus leschenaulti)593只,金管鼻蝠（Murina aurata)60只,采集血清及剖取脑组织作病毒分离和抗体检查。用细胞法和乳鼠法分离到6株病毒,带毒率为0．96％,其中从捕自景洪的棕果蝠脑组织中分离到3株,从河口的棕果蝠血清中分离到2株,从捕自耿马的金管鼻蝠脑组织中分离出1株。棕果蝠和金管鼻蝠的带毒率分别为0．84％和1．67％。这6株病毒能引起C6／36和BHK21细胞病变和导致乳小白鼠或3－4周龄小白鼠发病和死亡,并具有典型的嗜神经病毒感染症状,经血凝抑制,补体结合,免疫荧光和中和试验鉴定。新分离的6株病毒均为乙脑病毒（JE virus)。同期用血凝抑制试验对采获的425份棕果蝠血清作乙脑病毒抗体检查。阳性153－份,阳性率为36％,人有较高的感染率,。本次从棕果蝠和金管鼻蝠体内分离出乙脑病毒属具有重要流行病学意义。     

流行性乙型脑炎的研究概况

流行性乙型脑炎主要流行于亚洲及太平洋地区,已成为人类脑炎疾病最主要的病因之一,严重威胁着人类健康。通过对流行性乙型脑炎的病原学、流行病学及应采取的控制策略进行综述,期望能对养猪业界同仁防控该病有所帮助。     

猪流行性乙型脑炎的流行及免疫预防

猪流行性乙型脑炎又称日本乙型脑炎,简称乙脑,是由乙脑病毒引起的一种人兽共患急性传染病。主要是蚊类等吸血昆虫传播,怀孕母猪感染后表现流产、死胎或木乃伊胎,公猪发生睾丸炎,育肥猪持续高热,仔猪常呈脑炎症状。猪乙型脑炎病毒（JEV）对猪的致死率不高,但此病造成怀孕母猪发生繁殖障碍是主要的经济损失,对作为畜牧业支柱产业的养猪业持续增产造成巨大的危害。     

猪流行性乙型脑炎的防制措施

流行性乙型脑炎又称日本乙型脑炎,简称乙脑,是由流行性乙型脑炎病毒引起的一种蚊媒性人畜共患传染病。属于自然疫源性传染病。多种动物均可感染,其中人、猴、马、驴感染后出现明显的脑炎症状。人工感染潜伏期一般为3～4d。体温升高至40℃～41℃,呈稽留     

伪狂犬病病毒、猪细小病毒和流行性乙型脑炎病毒检测基因芯片的制备

对伪狂犬病病毒（PRV）、猪细小病毒（PPV）和流行性乙型脑炎病毒（JEV）检测基因芯片的制备及该芯片的检测技术进行了研究。选定靶基因最佳点样质量浓度为200 mg/L,用基因芯片点样仪将其点制在氨基化基片上,经干燥、水合、紫外线交联和洗涤后,成功制备了PRV-PPV-JEV检测基因芯片。以CY3荧光素标记的dCTP经PCR扩增制备探针,对芯片的质量进行了评价。结果表明,制备的芯片质量好,探针最佳使用质量浓度为3 000μg/L,芯片系统检测灵敏度可达3μg/L。该芯片可同时检测PRV、PPV和JEV,其灵敏度高、特异性强,芯片可重复使用,室温下至少可保存4个月。     

猪流行性乙型脑炎的诊断与防制

猪乙型脑炎是由乙型脑炎病毒引起的一种动物和人共患的蚊媒病毒性疾病。该病不仅给人类健康带来巨大威胁,也给作为农业支柱产业的畜牧业造成巨大的经济损失。本文主要从乙型脑炎流行病学特点、发病后引起的临床症状、病理变化特征及其诊断方法和防制措施方面进行阐述总结。     

日本乙型脑炎病毒小鼠脑内分布研究

为定位检测日本乙型脑炎病毒(JEV)在试验小鼠脑内分布情况,本研究建立了JEV的小鼠感染模型,取发病死亡小鼠的脑组织制作石蜡切片,利用抗JEV单克隆抗体,采用免疫酶组化方法对抗原进行组织学定位检测。试验结果表明,所建立的间接免疫酶组化方法灵敏度高,特异性好,证明了JEV选择性感染神经元,抗原阳性表达主要集中在脑干、神经节及大脑皮质。     

猪乙型脑炎疫苗的研究现状与发展方向

猪乙型脑炎是一种嗜神经性虫媒病毒引起的人兽共患传染病。疫苗的免疫接种是控制猪乙型脑炎发生的主要手段。阐述了猪乙型脑炎常规疫苗和新型疫苗的研究进展,为进一步研究猪乙型脑炎疫苗提供参考。     

马动脉炎病毒Eva Green荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用

为建立马动脉炎病毒(EAV)的快速检测方法,本研究设计了一对针对EAV Bucyrus株ORF7基因序列的特异性引物,建立了检测EAV的Eva Green荧光定量RT-PCR (qRT-PCR)方法.结果表明,该方法在102拷贝/μL～107拷贝/μL范围内具有良好的线性关系;最低检出量为1015 TCID50/mL病毒,敏感性为常规RT-PCR的100倍,与其他马常见病毒无交叉反应;组内及组间重复性试验的变异系数均小于2％,具有较好的重复性.此外,采用该方法测定了EAV Bucyrus株及其拯救病毒icEAV感染RK-13细胞后的复制动态,并与TCID50方法进行了比较.结果显示icEAV与其亲本病毒接种RK-13细胞后,0h测定病毒TCID50及拷贝数分别为103.33TCID50/mL(1 04 65拷贝/2μL)和10350 TCID50/mL(104 70拷贝/2μL);60 h时,细胞病变达到100％,icEAV及其亲本病毒的TCID50及拷贝数分别为105.67TCID50/mL(107 0拷贝/2μL)和105.57 TCID50/mL(106 98拷贝/2μL),两株病毒在RK-13细胞内的复制效率相似.本研究建立的Eva Green qRT-PCR方法可以为细胞培养物中EAV的检测提供有效的技术手段.     

猪乙型脑炎病毒实验室检测方法研究进展

猪乙型脑炎严重危害着人类健康,给世界养猪业造成了极大经济损失。本文从血清学和病原学方面入手,综述了猪乙型脑炎病毒最新实验室检测方法研究进展,以期为该病的预防与控制提供参考。     

5种脑炎人兽共患病病毒多重RT-PCR检测方法的建立

为建立同时检测流行性乙型脑炎病毒(JEV)、森林脑炎病毒(TBEV)、东方马脑炎病毒(EEEV)、西方马脑炎病毒(WEEV)和基孔肯雅病毒(CHIKV)5种人兽共患脑炎病病毒的多重RT-PCR方法,本研究根据GenBank登录的相关病毒基因序列设计特异引物,通过优化引物组合及PCR反应条件,建立可同时检测5种病毒的方法,扩增片段长度分别为411 bp(JEV)、945 bp(TBEV)、193 bp(EEEV)、545 bp(WEEV)和769 bp(CHIKV);该方法具有良好的特异性,对病毒核酸最低检测拷贝数分别为7.1×103、3.6×103、2.2×103、5.6×103和5.1×103.该方法具有特异性强、灵敏度高、操作简便等优点,为以上5种人兽共患脑炎病病毒提供快速检测手段.     

日本乙型脑炎病毒的分离与鉴定

收集一例疑为乙型脑炎病毒感染的种公猪肿大的睾丸病料,并将其处理制成匀浆过滤后,用乳鼠脑内接毒和细胞接毒相结合的方法盲传并分离病毒,然后设计一对PrM/E基因的特异性引物,采用RT-PCR方法对所分离的病毒进行鉴定,并将其PrM/E基因扩增产物测序,测序结果与乙型脑炎GenBank登陆的SA14-14-2株(AF315119)和SA14株(U14163)进行比较。结果表明,所分离病毒的PrM/E基因序列与JEV强毒株SA14和弱毒株SA14-14-2相应序列同源性分别为98.1%和97.1%,证实分离毒株为乙型脑炎病毒。     

猪日本脑炎病毒RT-PCR检测方法的建立

设计了1对引物,利用RT-PCR技术检测乙型脑炎病毒(JEV)。从GenBank中查出收录的31株猪乙型脑炎病毒E基因的已知序列,用DNA star软件对这31株猪乙型脑炎病毒E基因进行同源性分析,以确定扩增的靶序列。以这段靶区域为模板,利用Primer 5软件设计了1对引物,用减毒株SA14-14-2建立了检测乙脑病毒的RT-PCR方法,经敏感性,特异性试验测定,证明该方法敏感,特异;该法可检出样品稀释至256倍的鼠脑毒,相当于0.06个TCID50,对4株河北地区JEV分离株进行检测,结果所设计引物对4株病毒均能扩增出预期的片段。     

表达乙脑病毒PrM基因重组伪狂犬病病毒的构建

本研究以乙型脑炎病毒SA14—14—2疫苗株基因组RNA为模板，采用RT—PCR一步法扩增了PrM基因的全长cDNA（558 bp），用BamHI和EcoRI双酶切PrM基因的扩增产物，回收目的基因后将其克隆至经同样酶切的伪狂犬病病毒通用转移载体pPgG-uni中，获得了转移载体pPgG-PrM，并对其外源片段进行了测序。序列分析结果表明：与已报道的乙型脑炎病毒SA14强毒株和SA14-14-2疫苗株的核苷酸序列比较，PrM基因的同源性为100％。以伪狂犬病病毒Ea株TK^-／gG^-／LacZ^＋突变株为载体构建了一株表达乙型脑炎病毒PrM基因的重组伪狂犬病病毒TK^-／gG^-／PrM^＋，为进一步开展猪乙型脑炎与伪狂犬病二价基因工程疫苗的研究奠定了基础。     

甘肃省猪日本脑炎血清学调查

为了解甘肃省猪日本脑炎病毒(JEV)的感染情况,采用间接ELISA法对甘肃省部分地区的1258份猪血清样本进行了猪日本脑炎抗体检测。结果显示,抗体总阳性率为73.3%,其中3月龄以下抗体阳性率为63.7%,3月龄以上为78.1%,且抗体滴度高于3月龄以下猪群,通过t检验,二者阳性率存在显著性差异。不同地区中,陇南、天水为最高,甘南最低。甘肃省猪群存在JEV感染,且感染率较高。