种蛋中禽白血病病毒P27抗原检出率与鸡群禽白血病发病率的相关性研究

本研究旨在观察种鸡群所产种蛋中禽白血病病毒P27抗原检出率与种鸡群发病状况及其下一代鸡群禽白血病发病率的相关性,为鸡群净化和禽白血病预警提供参考依据.对国内海兰褐蛋鸡等品系不同祖代及父母代共7个种鸡场所产种蛋的P27抗原进行了检测,对部分种鸡场的ALV-A/B和ALV-J抗体进行了检测和病毒的分离鉴定,对各种鸡群孵化后下一代鸡群的禽白血病发病状况和客户投诉情况进行了追踪调查.7个种鸡场所产种蛋中P27抗原检出率为0%～12％,P27抗原检出率与种鸡群的发病状况及其子代鸡群的发病状况和客户投诉情况密切相关,即种蛋中P27抗原检出率越高,种鸡群发病情况越严重,下游客户鸡群发病率和投诉率越高.种鸡群的种蛋P27检出率与种鸡群及其孵化后鸡群的禽白血病感染状况具有较好的吻合性,可以作为开展ALV的流行病学调查和禽白血病感染风险评估的重要指标.     

贵阳地区禽白血病的血清学调查

为了解和掌握禽白血病在贵阳地区发生和流行的基本情况,采用禽白血病A、B亚群抗体(ALV-A或B)和J亚群抗体(ALV-J)检测试剂盒,对贵阳市13个养鸡场中的15个肉鸡和商品蛋鸡共481份血清进行禽白血病抗体间接ELISA检测,结果 ALV抗体阳性率达到11.43%(55/481),其中9个鸡群172份血清样本A、B亚群抗体阳性率达到18.60%(32/172),13个鸡群309份血清J亚群抗体阳性率达到7.44%(23/309),结果表明该地区存在禽白血病病毒的感染。     

2017—2019年安徽省部分禽场禽白血病定点监测

为了解安徽省部分禽场禽白血病病毒（avian leucosis virus,ALV）感染情况,2017—2019年,采用ELISA检测试剂盒,对安徽省59个禽场的3 275份血清和2 100份蛋清进行ALV-J抗体、ALV-A/B抗体和p27抗原检测,并对相关结果进行三间分布数据分析。结果显示：2017—2019年ALV-J抗体、ALV-A/B抗体和p27抗原平均抗体阳性率分别为19.36%、7.66%和5.90%;从不同养殖规模看,大型场的ALV-J抗体、ALV-A/B抗体和p27抗原的场阳性率分别为73.91%、73.91%和62.52%,均高于中型场和小型场;从不同场点类型来看,祖代场的ALV-J抗体和p27抗原的个体阳性率最高,分别为21.52%和6.01%,商品代场的ALV-A/B抗体的个体阳性率最高;从不同养殖品种看,黄羽肉鸡ALV-J抗体个体阳性率（26.24%）、鸭ALV-A/B抗体个体阳性率（12.31%）均高于其他禽种。结果表明,安徽省禽白血病流行较为严重,尤其是大型场、祖代场以及肉鸡和鸭的ALV感染风险较高。建议进一步加强对高风险禽场和禽群的禽白血病监测,持续推进禽白血病净化工作。     

玉林市部分规模种禽场三黄鸡禽白血病流行情况调查

为了解玉林市部分种禽场三黄鸡禽白血病流行情况,本研究分别采集了玉林市4个未进行禽白血病净化的小型规模种禽场(场1～场4)和2个已连续多年开展禽白血病净化的中大型规模种禽场(场5～场6)的三黄鸡蛋清和相应鸡血清样品,通过检测禽白血病ALV-p27抗原、ALV-A/B抗体、ALV-J抗体,分析玉林市部分规模种禽场三黄鸡禽白血病的流行情况。结果显示,场1～场4 ALV-p27抗原、ALV-A/B抗体、ALV-J抗体抽样总阳性率分别为13. 62%、15. 02%和72. 77%,混合感染现象严重,以ALV-J亚群感染为主;场5～场6ALV-p27抗原、ALV-A/B抗体、ALV-J抗体抽样总阳性率分别为0. 75%、0. 00%和0. 75%,3项指标均低于禽白血病净化所要求的标准。结果表明禽白血病在玉林市小规模种禽场已经普遍存在,今后要采取措施加强对该病的净化及根除工作,有效控制其蔓延。     

龙岩市地方优良种禽原种场禽白血病p27抗原检测与分析

用酶联免疫吸附试验法对长汀河田鸡原种场、武平象洞鸡原种场、龙岩山麻鸭原种场共686份蛋清样本及801份泄殖腔棉拭子进行禽白血病p27抗原检测。结果为：龙岩山麻鸭的蛋清样本和泄殖腔棉拭子均未检出ALV核酸;鸡蛋清样本阳性率为12.8%（80/626）,明显高于泄殖腔棉拭子阳性率8.9%(66/741);鸡原种场180日龄蛋清样本和泄殖腔棉拭子阳性率均最高,平均阳性率分别为15.0%和11.3%。表明：龙岩市境内地方优良鸡原种场中有禽白血病感染现象。     

禽白血病病毒p27抗原ELISA检测试剂盒的比较与评估

为了更好地进行禽白血病监测与净化,研究使用由蛋清、细胞培养物、胎粪等多种样品组成的样品盘对7种禽白血病病毒（Avian leukosis virus,ALV）p27抗原ELISA检测试剂盒（国产试剂盒DA、DB、DC,进口试剂盒IA、IB、IC、IDEXX）进行比较。结果显示：从分析特性上看,试剂盒分析特异性均较好,未观察到与其他常见禽源病毒的交叉反应;与IDEXX相比,DA、IA的分析敏感性较高,DB、IC其次,DC、IB较低,对于ALV不同亚群,各种试剂盒分析敏感性差异可达2～3个稀释度;从诊断特性上看,与IDEXX相比,DB、DC和IC的诊断敏感性和诊断特异性均高于90%;DA、IA和IB与IDEXX的诊断敏感性和诊断特异性均高于80%;各试剂盒对于不同类型样品（DF-1细胞培养物、蛋清、胎粪）的诊断敏感性和诊断特异性存在差异;从重复性上看,DA和IA的批内变异系数均在15%以内。综上所述,与IDEXX相比,当前国产p27抗原ELISA检测试剂盒DA和DB、进口p27抗原ELISA检测试剂盒IA和IC的各项性能可满足禽白血病净化各阶段对不同类型样品的检测需求。     

禽白血病血清学调查及防治

禽白血病(英文简称AL)是一类与ALV相关的反转录病毒引起的鸡的不同组织良性和恶性肿瘤病的总称。为了了解海东地区家禽白血病的感染情况,用酶联免疫吸附试验(ELISA)对5个县的460份血清进行了检测,检出阳性者90份,阳性率为19.6%。     

河南地区三黄鸡ALV感染的血清学调查

采取河南省3个三黄种鸡场种鸡的泄殖腔棉拭子和蛋清样本,利用ELISA检测ALV-p27;检测血清中ALV-J、ALV-A/B两种抗体,同时采集其血液接种DF-1细胞,培养9 d后检测细胞培养液中ALV-p27。结果表明:3个种鸡场泄殖腔棉拭子抗原阳性率分别为12.36%、8.15%和24.28%;蛋清抗原阳性率分别为7.17%、5.09%和14.44%;ALV-A/B抗体阳性率分别为11.96%、6.52%、33.70%;ALV-J抗体阳性率分别为3.26%、2.17%、22.83%;DF-1细胞培养液中ALV-p27阳性率分别为8.57%、6.67%、18.52%。试验结果为下一阶段各鸡场开展净化工作提供了科学依据。     

不同ELISA检测方法在检测出壳雏鸡禽白血病病毒感染中的应用

通过雏鸡胎粪中群特异性衣壳蛋白27(p27)抗原检测以判定禽白血病病毒(ALV)垂直传播是实施禽白血病净化的关键步骤,为对比不同ALV-p27抗原ELISA试剂盒对我国四类广泛流行的亚群ALV垂直传播的检测效果,本试验设置ALV-A、ALV-B、ALV-J和ALV-K感染组,以无菌生理盐水作为对照组,在8胚龄时以卵黄囊接种的方式感染SPF鸡胚,建立鸡胚携带ALV-A、ALV-B、ALV-J和ALV-K的垂直感染模型。采集各组雏鸡胎粪样品和血浆样品,死亡鸡胚肝脏样品,死亡雏鸡胎粪样品、血浆样品和肝脏样品,其中血浆和肝脏样品需接种鸡胚成纤维细胞系(DF-1细胞)进行病毒分离,各样品以4家公司提供的ALV-p27抗原ELISA试剂盒进行检测,并以实时荧光定量PCR(RT-qPCR)进行平行检测,比较阳性检出率和灵敏度。结果显示,4家公司的ALV-p27抗原ELISA试剂盒对于同一样品的阴阳性判定结果基本一致,但灵敏度存在差异;胎粪样品直接ELISA检测不能将ALV阳性鸡只全部检出,相对于胎粪样品,血浆和肝脏病毒分离样品ELISA检测更具有灵敏度优势。本试验所建立的对比方法不仅有助于评估4家公...     

2009-2010年山东地区蛋鸡禽白血病病原学和血清学调查

为了解山东地区蛋鸡禽白血病( Avian Leukosis,AL)的流行病学情况,从泰安、临沂、青岛、聊城等4个地区的祖代种鸡场及其具有亲缘关系的父母代、商品代鸡场采集1827份血清,其中祖代鸡血清597份、父母代鸡血清710份、商品代鸡血清520份;并采集1209份泄殖腔棉拭子,其中祖代鸡棉拭子597份、父母代鸡棉拭子460份、商品代鸡棉拭子152份.通过ELISA检测试剂盒进行了血清的ALV-J、ALV-AB抗体检测、泄殖腔棉拭子的P27抗原检测.结果显示:祖代鸡ALV-J抗体、ALV-AB抗体、P27抗原的平均阳性率分别为0、0.84％、17.93％,其中不同地区P27抗原阳性率存在较大差异,泰安、聊城、青岛地区P27抗原阳性率分别为52.5％、0.58％、0;父母代鸡ALV-J抗体、ALV-AB抗体、P27抗原的平均阳性率分别为8.45％、3.10％、30.48％,不同地区之间三者差别较大;而商品代鸡ALV-J抗体、ALV-AB抗体、P27抗原的平均阳性率分别为13.46％、8.65％、18.42％,不同地区之间三者也存在较大的差别.祖代、父母代及商品代间抗体或抗原阳性率高低的明显相关性,提示存在垂直感染的可能性.山东地区祖代种鸡未检测到ALV-J抗体,ALV-AB抗体检出率极低,仅为0.84％,但个别祖代鸡场P27抗原的阳性率极高,可能存在免疫耐受感染;父母代、商品代鸡群抗体阳性率和抗原阳性率均比祖代高,说明它们已有ALV-J、ALV-AB的感染;父母代及商品代鸡群ALV-J抗体水平都高于ALV-AB抗体水平,说明山东省内AL以ALV-J感染为主,应注意研究其传播途径,加强检疫净化.     

三黄鸡临床血管瘤病例中分离出A亚群与J亚群禽白血病病毒

为了解禽白血病病毒在广西鸡群中流行情况,采用DF-1细胞接种、细胞培养上清p27抗原检测、PCR扩增,对临床血管瘤型禽白血病的三黄鸡病料进行了病毒分离,并对分离病毒gp85基因进行测序和序列比较。结果表明,从1只病鸡同时分离到了一株A亚群禽白血病病毒(ALV-A)与一株J亚群禽白血病病毒(ALV-J),分别命名为HG01-A株和HG01-J株。ALV-A gp85与7株A亚群氨基酸同源性为85.8%~87.5%,与A亚群美国株MQNCSU同源性最高为87.5%,与A亚群原型株RSA同源性为86.9%。而ALV-J gp85与7株毒株核酸序列同源性为84.0%~93.8%,与广东株XX2-08以及四川株SCSM01同源性最高为93.8%,与英国原型株HPRS103同源性为90.2%。进化分析进一步表明,HG01-A与各参考株亲缘关系较远,HG01-J与SCSM01亲缘关系最近。本研究首次从同一只广西三黄鸡中同时分离到ALV-A及ALV-J,进一步完善了我国地方品种鸡群中禽白血病的流行病学信息。     

禽白血病病毒J亚群(ALV-J)基因表达与抗原定位的研究

本研究通过原位杂交(ISH)和免疫组织化学(IHC)技术检测了组织中ALV-J病毒RNA的表达及定位。原位杂交结果显示：在攻毒后3周时．所检测到的组织大部分已感染病毒；病毒对肝脏、心脏、肾脏的实质细胞、骨髓髓系细胞和卵巢基质中的间质细胞、脾脏红髓内的单核-巨噬细胞有较高的嗜性．在核膜及胞浆内显示出蓝紫色颗粒状的特异性信号，而在法氏囊、胸腺、脑和坐骨神经中检测不到病毒RNA及病毒基因的表达。免疫组化结果与原位杂交相似，在核膜及胞浆内可见蓝紫色阳性信号．瘤组织的信号较强，显示了较强的抗原性。由骨髓和其他组织的结果可推测ALV-J诱导肿瘤可能和病毒基因的插入位点有直接关系，而和病毒在组织内的数量没有直接关系。     

E3泛素连接酶RNF185对A亚群禽白血病病毒体外复制的影响

【目的】环指蛋白185(ring finger protein 185,RNF185)是Ring家族E3泛素连接酶的一员。试验旨在探明鸡源RNF185对A亚群禽白血病病毒(Avian leukemia virus subgroup A,ALV-A)体外复制的影响,为进一步研究鸡源RNF185对ALV-A致病性的影响和介导的致瘤机制提供参考。【方法】参考GenBank中已公布的鸡RNF185基因(登录号：NP＿001007841)序列分别设计RNF185过表达引物和RNF185单链shRNA,通过PCR扩增RNF185基因及合成双链shRNA,将其分别克隆至真核表达载体psi-flag和干扰载体pLKO.1-GFP,并使用PCR、双酶切和测序等方法验证重组质粒。使用Western blotting验证重组质粒的表达和干扰效果,并使用CCK-8试剂盒检测重组质粒对DF-1细胞活性的影响。在RNF185过表达和干扰后的DF-1细胞中分别接种10⁴半数组织感染剂量(TCID₅₀)ALV-A(rHB2015012)病毒液,于接种完成后3、4和5 d收取...     

猪流行性乙型脑炎的血清学调查

为调查贵州省猪乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus, JEV）的隐性感染率和使用疫苗后的血清抗体水平,采用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）对贵州省规模化养猪场和农村散养户共764头份猪血清样本进行了JEV抗体水平检测。结果表明,未免疫猪群JEV的血清抗体阳性率为13.25%;而免疫猪群中JEV的血清抗体阳性率为82.18%;表明JEV的免疫效果比较理想,但未免疫猪群存在JEV感染,应引起重视。     

福建莆田地区猪圆环病毒病的血清学调查

为了解莆田地区猪圆环病毒病的流行状况,2013—2014年间在莆田笏石、埭头、灵川、仙游地区等部分养猪场(户)共采集了322份未经PCV2疫苗免疫的猪血清样本,采用ELISA(酶联免疫吸附试验)方法对送检血清样品进行PCV2抗体水平检测。结果表明,322份被检血清中检出117份阳性血清,总阳性率为36.33%,其中以6~12周龄的小猪感染率最高,阳性率为55.56%。说明猪圆环病毒病在莆田市多数猪场中存在。     

地方优良鸡种禽白血病病毒感染调查及净化

通过使用针对禽白血病病毒(ALV)AB亚群抗体、J亚群抗体和群特异性抗原p27蛋白的商品化ELISA检测试剂盒,对广西省10个种禽大型龙头企业的5个广西代表性地方品系和3个蛋鸡品系的祖代、父母代种群共7 254只进行流行病学调查。结果显示,种鸡ALV的感染普遍存在,各个品系感染的亚群及其阳性率各不相同;不同日龄鸡只p27抗原检测的跟踪调查发现,鸡只在开产初期和产蛋高峰期的p27抗原检测阳性率均比较高;公、母鸡p27抗原检测的平行比较结果显示,二者的排毒期存在差异,前者的峰值在22周龄和34周龄,后者则在22~30周龄。对种苗产量最大的广西麻(花)鸡和肉鸡产量最大的三黄鸡进行的初步净化研究结果表明,经过应用3种试剂盒并针对流行病学调查发现的规律所进行的净化,3个检测项目的阳性率均有所下降。试验结果为下一阶段各种禽场开展净化工作提供了科学依据。     

鸡IFIT5对J亚群禽白血病病毒在DF-1细胞内复制的影响

【目的】制备鸡干扰素诱导蛋白含三角形四肽重复5(IFIT5)多克隆抗体,以探究IFIT5对J型禽白血病病毒(ALV-J)在鸡胚成纤维细胞(DF-1)内复制的影响。【方法】以感染ALV-J的鸡脾脏组织细胞提取的RNA反转录获得的cDNA作为模板,对IFIT5基因进行PCR扩增,利用重组酶将纯化后的PCR产物和线性化载体进行连接,构建重组质粒pET-28a-IFIT5和pcDNA5-flag-IFIT5并测序。将测序正确的重组质粒pET-28a-IFIT5转化大肠杆菌BL21感受态细胞进行诱导表达,表达的融合蛋白His-IFIT5纯化后免疫6周龄BALB/c雌鼠制备多克隆抗体,通过Western blotting鉴定抗体的特异性,利用间接ELISA测定抗体的效价。将测序正确的重组质粒pcDNA5-flag-IFIT5转染DF-1细胞,24 h后接种ALV-J,通过Western blotting检测DF-1细胞中过表达IFIT5对ALV-J复制的影响。【结果】试验成功扩增到大小为1 440 bp的IFIT5基因,并成功构建重组质粒pET-28a-IFIT5和pcDNA5-flag-IFIT...     

J亚群禽白血病病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立

本研究利用J亚群禽白血病病毒(subgroup J avian leukosis virus,ALV-J)gp85单因子血清纯化后的抗体成功建立了检测ALV-J抗原的双抗体夹心ELISA方法(DAS-ELISA)。结果表明,该方法具有良好的特异性、重复性和稳定性,对ALV-J抗原的最小检出量为0.165 μg/mL。用该法对48份临床血浆样品进行检测,结果与PCR方法的符合率达到85.2%。