GDNF对缺气损伤的体外培养新生大鼠背根节神经元的作用

运用体外缺气损伤的细胞模型,研究GDNF对损伤的新生大鼠背根节神经元(DRG)是否有保护作用.采用原代培养的方法,用N1无血清培养基分离培养DRG神经元24 h后,加入含20 μg/mL GDNF的无血清培养液,然后液体石蜡封闭培养液,继续培养4,8,12,24 h,分别做MTT实验检测细胞活性OD值,台盼蓝染色记数,细胞总蛋白测定以及形态学观察突起生长状况.结果表明:①封闭12 h后,GDNF组的DRG细胞存活数同对照组相比有显著升高(P <0.01),其余各时间点均无显著性差异.缺气损伤8 h和12 h后,GDNF组的DRG细胞总蛋白较对照组显著升高 (** P <0.01,* P <0.05),其余各时间点均无显著性差异;②各时间点 DRG细胞活性及突起长度的变化差异均不显著.缺气损伤一定时间后,GDNF对新生大鼠DRG细胞的存活数及细胞总蛋白有明显的保护作用,而对细胞活性及突起的生长则没有明显的促进作用.     

GDNF对海仁酸损伤体外培养新生大鼠背根神经节神经元的影响

N1无血清培养基原代分离培养新生大鼠背根神经节（dorsal root ganglion DRG)神经元，用兴奋性毒素海仁酸（kainic acidKA)损伤体外培养细胞后，加入胶质源性神经营养因子（glial-derived neurotrophic factor,GDNF)作用。最后通过MTT法检测，细胞总蛋白测定，胎盘兰染色计数，形态学观察等方法研究分析GDNF对兴奋性毒素海仁酸损伤后大鼠DRG神经元的活性，存活及突起生长的影响，结果表明：GDNF对体外正常生长的DRG神经元的存活，活性及突起生长没有明显的促进作用。而在海仁酸损伤后，GDNF对其存活和活性有明显的促进作用。但对突起生长没有明显的影响。     

镉对原代培养大鼠肝细胞的损伤作用

用活体肝脏灌注、胶原酶消化法分离大鼠肝细胞并作原代培养,以CdCl2(0～250或500umol/L）处理,测定培养上清液中LDH、ALT、ARG和细胞内GSH-Px、GSH、MDA等的含量,探讨镉对肝细胞的损伤作用和脂质过氧化状况。结果当Cd≥10和5umol/L时,细胞内LDH、ARG泄漏分别明显增加,GSH-Px活力显著受到抑制,GSH含量和MDA产生随着镉的剂量增大而增加（Cd≥50 umol/L）。认为镉对肝细胞的损伤和对细胞膜完整性的破坏,与脂质过氧化有关;镉处理后细胞中GSH增加可能与镉抑制了还原型谷胱甘肽向氧化型谷胱甘肽的转化有关。镉可直接抑制ALT本身的活性,因而认为以细胞内ALT泄漏作为镉诱导细胞损伤的评价指标时要予以注意。     

IL—2对体外培养鸡胚脑纹状体神经元生长发育的影响

观察了不同浓度ＩＬ－２对原代分离培养鸡胚脑纹状体神经元生长发育的影响。结果表明，２０～５００Ｕ／ｍＬＩＬ－２能促进鸡胚脑纹状体神经元的存活，增加神经元胞体的短直径，提高纹状体神经元中ＮＰＹ阳性反应神经元数目，其中５００Ｕ／ｍＬＩＬ－２的作用最明显。而１５００Ｕ／ｍＬＩＬ－２对鸡胚脑纹状体神经元的存活、生长及分化具有抑制作用。由此认为，ＩＬ－２对鸡胚纹状体神经元生长发育可能具有正、负调节作用     

己烯雌酚对体外培养仓鼠生精细胞毒性作用的研究

为研究己烯雌酚(DES)对仓鼠生精细胞毒性作用机制,试验采用原代培养的仓鼠睾丸生精细胞,用10、30、90μmol/L DES处理,倒置显微镜观察生精细胞生长状况,MTT法测定处理后8 h生精细胞存活率,分光光度法检测细胞培养液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、细胞中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量。结果贴壁培养的生精细胞用DES处理后,细胞活力显著降低,与正常对照组比较差异极显著(P0.01),随着DES剂量的增加,细胞中SOD、GSH-Px含量显著下降,MDA显著上升。说明DES对体外培养生殖细胞毒性作用与ROS密切相关,DES通过降低抗氧化酶水平,增加ROS含量,干扰生精细胞正常功能,表明氧化损伤可能是环境雌激素生殖毒性的作用机制之一。     

大脑皮质神经元培养中胰蛋白酶消化分离技术的探讨

为探讨大脑皮质神经元培养中胰蛋白酶消化分离法的最佳条件, 取新生大鼠大脑皮质组织，在不同的胰蛋白酶消化条件下分离培养神经元，通过细胞形态观察以及染色计数比较不同消化条件对神经元活性的影响。结果表明，0.25％胰蛋白酶，37℃，5 min消化分离的神经元活性较好，细胞产率也较高。在新生大鼠大脑皮质神经元培养时，采用0.25％胰蛋白酶，37℃，5 min可消化分离到单层、生长活性较好的神经元。     

FSH调节仔猪睾丸支持细胞GDNF表达的信号机制

本研究旨在阐明FSH调节睾丸支持细胞GDNF表达的信号机制.以体外培养的仔猪睾丸支持细胞为试验材料,通过加入不同信号通路因子,采用RT-PCR和Western blot等方法研究了FSH对支持细胞GDNF表达的调节.结果:(1)FSH(50 ng· mL-1)处理支持细胞,可迅速激活MEK激酶,随着FSH刺激时间的延长,ERKl/2活性逐渐升高(0～30 min);(2)dbcAMP(100 μmol·L-1)同样能迅速激活MEK激酶,诱导GDNF蛋白、mRNA的表达;ERK1/2活性随dbcAMP刺激时间的延长逐渐升高(0～30 min);(3)加入MEK1/2的抑制剂U0126和PKA的抑制剂H89,则显著抑制了FSH对GDNF的激活作用,GDNF蛋白、mRNA和活性明显下降;(4)加入PKA的抑制剂H89(10 μmol·L-1),则明显抑制了FSH诱导的ERK1/2磷酸化的激活作用.结果表明,FSH可通过cAMP-PKA激活ERK级联调节支持细胞GDNF的表达.     

新生Wistar大鼠心肌细胞的分离培养与鉴定

本试验取新生24 h内的Wistar大鼠心肌组织,无菌剪碎后采用胰酶消化法分离细胞,用含20%胎牛血清的DMEM/F12培养基培养,逐日在倒置相差显微镜下观察。结果于培养后48 h即可观察到部分细胞搏动;72 h后,细胞逐渐展开,搏动频率在60~70次/min,从而初步确立培养的细胞为心肌细胞;进一步采用心肌细胞特异性蛋白(cTnT)抗体和α肌动蛋白(α-actin)单克隆抗体分别对培养的心肌细胞进行免疫荧光及免疫组织化学鉴定,结果均呈阳性。     

猞猁3类组织体外培养细胞的生物学特性分析

为研究体外培养猞猁细胞的生物学特性,深入开展猞猁基因组学及濒危野生动物保护工程,本试验获取猞猁不同组织细胞,用α-MEM培养液进行原代、传代培养,并对培养的细胞进行形态学观察、生长特性检测及核型分析。结果表明,猞猁不同组织细胞具有不同的生物学特性;心脏、躯体及睾丸来源的组织块分别在培养5~6、8~9、11~12 d时开始有成纤维样细胞从中长出,而在进行传代时,这3种组织来源的细胞生长速度没有表现出明显的差异,通常在4~5 d可铺满瓶底;核型分析结果表明,体外培养的猞猁细胞染色体数目为2n=38,为19对,其中18对为常染色体,1对为性染色体。上述结果可为今后猞猁不同组织细胞的深入研究提供试验材料和依据,也将为猞猁的细胞系构建提供参考。     

精原干细胞体外培养及影响因素

影响精原干细胞体外培养的主要因素有温度、饲养层细胞、细胞因子包括分化抑制因子(LIF)和生长因子(SCF和bFGF)等。本文拟对其研究进展和精原干细胞体外培养所涉及到的精原干细胞的鉴定和分离纯化技术的研究进展进行综述。     

Effect of Sanguinarine on Active Capacity of Isolated Rat Uterine Smooth Muscle in vitro and Its Mechanism

The study was aimed to explore the effects of the sanguinarine on activity of isolated rat uterine smooth muscle in vitro. The effect of the sanguinarine on activity of the isolated myometrium of non-pregnant Sprague-Dawley rats eight weeks old was recorded by BL-420F four channels physiological recorder. Four antagonists, atropine sulfate, ranitidine hydrochloride, propranolol hydrochloride and diphenhydramine hydrochloride were used to study their mechanism, respectively. The results showed that sanguinarine and Yuan hu painkillers markedly inhibited the frequency, amplitude and activity of uterine contractions induced by oxytocin injection (P<0.05). The inhibitory effect of sanguinarine on uterine muscle contractions was blocked after using diphenhydramine hydrochloride (H₁-receptor antagonist) and ranitidine hydrochloride (H₂-receptor antagonist). However, after using atropine sulfate (M-receptor antagonist) and propranolol hydrochloride (β-receptor antagonist), sanguinarine also significantly inhibited the contractions of rat uterine smooth muscle (P<0.05). It was concluded that the effect of sanguinarine on activity of uterine smooth muscle in rats was mainly associated with H₁ receptor or H₂ receptor but not M receptor or β receptor.     

血根碱对大鼠离体子宫平滑肌收缩的影响及其机制研究

试验旨在研究血根碱对大鼠离体子宫平滑肌活动的影响。分离8周龄SD雌性未孕大鼠子宫平滑肌,通过BL-420F生物信号采集系统记录子宫平滑肌收缩频率和收缩幅度,计算子宫平滑肌活力。以硫酸阿托品、盐酸普萘洛尔、盐酸苯海拉明及盐酸雷尼替丁为阻断剂,观察血根碱对子宫平滑肌M、β、H₁、H₂受体的关系,探讨血根碱对子宫平滑肌的作用机制。结果显示,血根碱组和元胡止痛片组对缩宫素所致大鼠离体子宫平滑肌收缩频率、收缩幅度和活力均有显著的抑制作用（P<0.05）;应用H₁受体阻断剂苯海拉明和H₂受体阻断剂雷尼替丁后,血根碱对子宫平滑肌抑制作用基本被阻断,而应用M受体阻断剂阿托品,β受体阻断剂普萘洛尔后,血根碱对子宫平滑肌收缩仍具有显著的抑制作用（P<0.05）。综上所述,血根碱对大鼠子宫平滑肌活力具有显著的抑制作用,可能是通过抑制H₁、H₂受体实现,与M、β受体无关。     

酪蛋白酶解物对断奶小鼠肠道生长发育的影响

本试验以小鼠为动物模型，研究了酪蛋白酶解物对断奶小鼠肠道生长发育的影响。结果表明：每天灌注0．25ml浓度为20mg／ml的酪蛋白酶解液可显著提高小鼠小肠DNA、RNA的含量，灌注0．25ml浓度为12mg／ml的酪蛋白酶解液可显著提高小鼠小肠的蛋白质浓度，但对小肠长度、重量及体增重均无显著影响。