奶牛胚胎冷冻保存技术的研究

<正> 自从Whittngham发现经超低温冷冻保存的小鼠胚胎可以成活后,超低温冷冻保存哺乳动物胚胎的方法取得很大进展。目前许多国家都在对不同的胚胎冷冻保护技术进行探讨,如加入冷冻保护剂的种类和浓度、冷冻程序的选择、脱除保护剂的方法等,试图寻找一个胚胎冷冻和解冻的最佳方案。我们从87年开始从事这方面的研究,其目的是探索胚胎冷冻的方法和步骤、寻找适宜于基层生产单位应用的解冻和脱除冷冻保护剂的简易方法。为今后胚胎移植的推广应用打下基础。     

超低温冷冻保存技术在养牛业上的应用

本文概述了防冻剂在5种牛胚胎冷冻保存方法中的应用，即常规冷冻、玻璃化冷冻、一步脱防冻剂冷冻、一步细管法冷冻和半胚冷冻。随着胚胎冷冻和解冻方法的不断改进，不断简化和逐渐适应现场条件，这一技术将会象人工授精一样普及推广。     

“哺乳动物胚胎玻璃化冷冻保存技术研究与应用”取得突破性成果

动物科技学院动物繁殖教研室的自选研究课题“哺乳动物胚胎玻璃化冷冻保存技术的研究与应用”于１９９９年１２月１８日通过鉴定。专家委员会认为:该项目在系统研究哺乳动物胚胎对几种常见抗冻剂的耐受性和细胞膜通透性的基础上,结合抗冻剂的化学特点,研制出在常温下高效、低毒的冷冻保护液ＥＦＳ和ＧＦＳ,并建立了简易、快速、稳定的胚胎玻璃化冷冻技术方法。运用这种技术方法已成功地对小鼠、家兔、绵羊和牛的体内、外受精胚胎及显微操作胚胎进行了玻璃化冷冻保存。冷冻胚胎解冻后的体内、外继续发育率高于国内同类研究水平,达到或超过本…     

绵羊胚胎冷冻保存及移植的研究

本研究的目的在于建立绵羊胚胎的慢速冷冻和玻璃化快速冷冻保存方法,为绵羊胚胎移植技术应用于生产提供保证。结果:慢速冷冻保存,解冻后正常胚胎占72％,移植受体的受胚率33％、产羔率66％。玻璃化快速冷冻保存,解冻后正常胚胎率亦达72％,移植受体3只,产羔4只。     

哺乳动物卵母细胞冷冻保存技术研究进展

哺乳动物卵母细胞冷冻保存在种质资源保存、胚胎工程技术和人类辅助生殖方面具有重要意义。冷冻保存过程所产生的渗透压差导致卵母细胞体积迅速变化,引起微结构损伤甚至死亡。卵母细胞冷冻保存过程中的体积调控成为近年来的研究热点。文章总结了卵母细胞冷冻方法、冷冻载体、抗冻保护剂的种类及卵母细胞体积调控在细胞冷冻保存过程中的作用等方面的研究进展。     

哺乳动物卵母细胞和胚胎冷冻损伤研究进展

哺乳动物卵母细胞和胚胎的冷冻保存在胚胎工程技术方面有重要意义。卵母细胞和胚胎在冷冻保存过程中很容易受到冷冻损伤的危害,甚至会影响细胞超微结构。冷冻损伤包括细胞膜、细胞质、细胞核以及细胞外透明带、卵丘细胞的损伤。阐述了目前在这些方面的研究进展,并探讨了冷冻损伤的机制,以期为今后改善冷冻保存技术提供理论依据。     

鲁西黄牛胚胎冷冻解冻技术程序

<正> 1988～1991年,我们共冷冻保存鲁西黄牛胚胎278枚,先后解冻96枚,对解冻后的90枚胚胎进行了观察,将其中的36枚解冻胚胎(预备试验13枚,正式试验23枚)分别移植36头受体黄牛,有16头受体妊娠(预备试验3头,正式试验13头)。通过胚胎的冷冻、解冻、移植试验,总结出“鲁西黄牛胚胎冷冻解冻技术程序”,现介绍如下:     

冷冻保护剂种类和胚胎发育阶段对绵羊冷冻胚胎移植受胎率的影响

对冷冻保护剂种类和胚胎发育阶段对绵羊冷冻胚胎受胎率的影响进行了研究。结果表明:分别以乙二醇、甘油为冷冻保护剂冷冻保存绵羊囊胚,解冻后移植受胎率差异不显著,表明冷冻保护剂种类对绵羊冷冻胚胎移植受胎率未有明显影响;以乙二醇为冷冻保护剂,冷冻绵羊不同发育阶段的胚胎,囊胚、扩张囊胚解冻后移植受胎率均明显高于桑椹胚的,囊胚和扩张囊胚之间差异不显著,表明胚胎发育阶段对绵羊冷冻胚胎移植受胎率有显著影响。     

牛胚胎冷冻技术及冷冻保护剂研究进展

胚胎冷冻保存是胚胎移植过程中重要的步骤之一,在地方牛品种遗传资源保护方面具有广泛的应用价值。当前胚胎冷冻技术有3种,一是慢速冷冻法,二是快速冷冻法,三是玻璃化冷冻法,冷冻保护剂可分为细胞内液冷冻保护剂、细胞外液冷冻保护剂与抗冻蛋白。该文综述了国内外牛胚胎冷冻技术及冷冻保护剂的研究进展,旨在为相关从业人员提供技术参考。     

卷叶贝母愈伤组织超低温保存关键技术研究

[目的]建立一套完整、快速和经济的卷叶贝母超低温保存关键技术。[方法]对卷叶贝母愈伤组织超低温保存技术中的预培养时间、保护剂类型和解冻方式进行了研究。[结果]预培养时间、冷冻保护剂类型和解冻方式均是影响卷叶贝母愈伤组织冷冻保存过程中的关键因素。经预培养9 d、由10%二甲基亚砜和0.5 mol/L山梨醇组合的复合冷冻保护剂冷冻、在40℃水浴条件下解冻的卷叶贝母愈伤组织其保存效果最佳,保存后细胞的存活率可达87.39%。[结论]为更好地保护卷叶贝母种质资源提供了参考。     

奶牛受精卵的移植及其冷冻保存新技术的初报

本文叙述了胚胎移植及胚胎冷冻保存新技术的操作过程。其中包括:①激素超排处理;②受精卵收集;③胚胎冷冻保存;④胚胎解冻;⑤胚胎移植等。同时就其操作方法从理论上给以分折讨论。     

奶牛一步细管法冷冻胚胎移植试验

以PBS+20%FCS+1.5 mol/L乙二醇(EG)+0.1 mol/L蔗糖(SU)液作为冷冻液,对122枚奶牛胚胎进行一步细管法冷冻,管内解冻,然后移植给122头受体黄牛,结果有49头供体牛妊娠,受胎率为40.09%,产犊率38.52%.结果表明一步细管法是一种可行性良好的便于在农牧区奶牛胚胎移植中推广的方法.     

秦川牛胚胎冷冻保存效果

为探明秦川牛胚胎冷冻保存技术的可行性,将48头秦川牛母牛进行多次超数排卵处理、人工授精,并于授精后第7天非手术法获得胚胎,把获得的A级胚用不同浓度甘油(1.0~5.0 mol/L)和乙二醇(1.0~5.0mol/L)进行处理,并采用常规冷冻法和快速冷冻法进行冷冻,解冻后进行体外培养和不同发育阶段胚胎(桑椹胚、囊胚和扩张囊胚)移植,统计其存活率、孵化率和妊娠率等。结果表明:秦川牛7日龄胚胎能耐受甘油的浓度为2.0~4.0mol/L,乙二醇为1.0~3.0mol/L;常规冷冻法解冻后胚胎的存活率和孵化率显著(P0.05)高于快速冷冻法,胚胎移植妊娠率和产犊率差异不显著(P0.05);常规冷冻桑椹胚的冻后存活率、孵化率极显著(P0.01)低于囊胚和扩张囊胚,移植妊娠率和产犊率显著(P0.05)低于囊胚和扩张囊胚。     

超速冷冻8-细胞鼠胚

用3.5M和2.5M DMSO作冷冻保护剂进行超速冷冻8-细胞鼠胚。用前者作保护剂的鼠胚,无论在体外培养和体內发育的情况都好于后者。前者中的8-细胞鼠胚解冻后的存活率为78.9％;存活胚胎体外发育到囊胚的比率为83.4％,体內附植率为63.9％,胎儿形成率为43.2％。实验证明,超速冷冻保存胚胎是一种省时、省力、省钱的好方法。     

锥栗种子离体胚超低温保存脱氢酶活性研究

运用超低温 (- 1 96℃ )保存手段 ,通过对锥栗种子离体胚超低温保存后脱氢酶活性的方差分析和 Q检验法多重比较分析 ,对其长期保存的可行性进行研究 ,结果表明 :含水量是影响锥栗种子离体胚超低温保存的重要因素 ,超低温保存应进行适度脱水 .无防冻剂预处理 ,2 0 %含水量 ,缓冻缓解方式条件下 ,离体胚脱氢酶活性最高     

超低温保存对苦槠种子和离体胚脱氢酶活性的影响

将苦槠种子、离体胚及离体胚防冻剂处理后用液氮(LN2)进行超低温保存,测定种胚内三苯基甲月s质量浓度,研究其超低温保存效果。结果表明:苦槠离体胚防冻剂处理的三苯基甲月s质量浓度最高,脱氢酶活性最大,其次是离体胚,最小的是种子。3种保存材料的保存效果均受含水量水平显著影响,而当离体胚含水量小于10%时,冷解冻方式对LN2保存效果不明显。对种子而言,12%-15%含水量是适宜的保存含水量,采用缓冻快解,三苯基甲月s质量浓度高,分别是24.93、27.43μg.mL-1;对离体胚而言,10%-15%的含水量是适宜的,但12%含水量水平保存效果最好。添加防冻剂处理后,15%-20%含水量离体胚的三苯基甲月s质量浓度最高,分别达36.98、31.58μg.mL-1;防冻剂在LN2保存过程中起到了明显的保护作用,用10%二甲亚砜处理效果最好。     

兔胚胎玻璃化冷冻的研究

探讨用玻璃化冷冻法保存兔胚胎的效果．结果表明,兔早期囊胚在0．5M海藻糖（93．8％）溶液中的存活率显著高于0．5M蔗糖组（70．0％,P〈0．05）．对照组与不同浓度甘油处理间兔胚胎存活率均差异不显著（P〉0．05）．分别用不同浓度乙二醇玻璃化冷冻兔胚胎,解冻回收后正常胚胎数和囊胚孵化率,对照组与10％,20%EG组之间均差异不显著（P〉0．05）,但对照组,10％,20％EG组均显著高于30％EG组（P〈0．05）．解冻回收后正常胚胎数体内胚胎组（79．4％）显著高于体外胚胎（54．1％,P〈0．05）,囊胚孵化率2组之间差异不显著（P〉0．05）．缓慢冷冻法与玻璃化冷冻法之间胚胎解冻回收后正常胚胎数和囊胚孵化率均差异不显著（P〉0．05）．     

实验大鼠、小鼠胚胎的缓慢冷冻和玻璃化冷冻的比较

对3日龄小鼠胚胎和5日龄大鼠胚胎进行了玻璃化低温保存和缓慢冷冻保存的比较研究,从经过超数排卵的小鼠和大鼠中收集到了1897个8－16细胞的胚胎,经筛选后将I级和Ⅱ级胚计1738个（91．62%）分别进行两种低温保存试验,并对其中的881个冷冻胚胎分阶段进行复苏,复苏率分别为65．03％（小鼠69．59％,大鼠60．46％）和68．45％（小鼠72．61％,大鼠64．29％）,两者间无显著性差异（P＞0．05）。在复苏在胚胎中,选择其中的488个胚胎进行移植试验,结果,玻璃化冷冻保存胚胎的移植的受孕率为39．47％（89／222）,缓慢冷冻保存胚胎的移植的受孕率为42．56％（115／266）,两种低温保存方法经方差检验也无显著性差异（P＞0．05）。     

LN_2保存处理后苦槠种子的膜透性

研究了苦槠种子和离体胚在超低温保存过程中含水量、冷冻方式、解冻方式 ,以及离体胚冰冻保护剂对电导率的影响 .结果表明 :含水量是超低温保存成功的关键 ,适度脱水可大幅度降低苦槠种子和离体胚超低温保存过程中的质膜伤害 ;随着含水量的降低 ,其电导率的变化呈先降后升 ,15 %含水量的电解质外渗率最低 ;而在冰冻保护剂作用下 ,离体胚保存最佳含水量为 10 % ,其质膜所受的伤害比较轻 ,电解质外渗量较小 ,膜修复能力强     

胚胎工程技术及其在畜牧业中的应用

胚胎工程技术研究的目的,是对哺乳动物的胚胎在体外进行人为控制操作,让其继续发育,进而获得优良或珍稀动物个体,并应用这类技术进行基础研究和应用开发性研究。文章主要叙述了胚胎移植、胚胎冷冻保存、胚胎分割、体外受精、性别鉴定及控制、转基因动物、细胞核移植、胚胎干细胞和胚胎嵌合等胚胎工程技术及其在畜牧业中的应用前景。