矮牵牛愈伤组织诱导及原生质体的分离与纯化

研究了影响诱导矮牵牛(Petunia hybrid)形成愈伤组织和分离、纯化其原生质体效率的关键因素。结果表明,矮牵牛无菌苗叶片可在含1.0 mg/L 6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)和0.1 mg/L萘乙酸(NAA)的MS培养基上形成愈伤组织,用酶液(2%纤维素酶R-10 + 0.5%果胶酶Y-23 + 0.3%离析酶R-10,0.5 mol/L甘露醇)对继代培养10~15 d的愈伤组织在黑暗条件下静置酶解12 h,原生质体产量和活性分别达到3.4×10⁶个/g 和83%。     

荔枝TPEC与龙眼EC的电融合参数研究

以荔枝转基因原生质体再生的胚性愈伤组织(TPEC)细胞系和龙眼‘红核子’品种的松散型胚性愈伤组织(EC)为材料,采用PA-4000电融合仪进行原生质体电融合参数的研究.结果表明:荔枝TPEC与龙眼EC原生质体融合的适宜电融合参数为原生质体密度5×105个·mL-1,交流电场频率1.0 MHz、交变电场场强50 V·cm-1,作用时间60 s,直流脉冲强度600 V·cm-1、脉冲持续时间10 ms,脉冲2-3次.在此条件下,融合率可达30%以上.     

龙眼荔枝属间原生质体电融合

由龙眼的幼胚培养诱导、筛选出松散型胚性愈伤组织 ,由之建立了胚性悬浮细胞系 ;用同样的方法建立了荔枝的松散型胚性愈伤组织系 .龙眼的胚性悬浮细胞和荔枝的胚性愈伤组织在含纤维素酶和果胶酶各 10 .0g· L-1的 CPW- 13M的酶解液中酶解 ,经纯化后可得到较为纯净的原生质体 .采用电融合方法进行两种原生质体融合处理 ,获得了适宜的融合参数 ,融合率达 2 0 %以上 .融合产物经初步培养 ,形成了多细胞团     

枇杷原生质体培养形成愈伤组织

把茂木、尾早生、解放钟、长红等枇杷品种的心脏形至完全成熟的胚,离体培养于分别附加一定浓度植物生长调节剂的B_5,MS和改良MS(大量元素减半,简称mMS)的培养基中,诱导产生胚性愈伤组织.这种愈伤组织在添加低浓度的2,4-D的mMS培养基上产生体细胞胚.以初代和继代培养若干代的愈伤组织作为分离原生质体的材料来源.酶解液的主要成分为纤维素酶、离析酶和崩溃酶,附加0.6 mol/L的山梨醇作为渗透压稳定剂,原生质体的最高得率为1.65±0.6×10~7/g.原生质体经液体浅层培养或半固体培养4—5d后,观察到第1次细胞分裂,2周后形成小细胞团.培养2个月后,获得了愈伤组织.     

不同酶液组合及酶解时间对普通红豆草原生质体游离的影响

以普通红豆草的下胚轴、愈伤组织为材料,研究了不同的酶种类及组合、酶液浓度、酶解时间等因子对其原生质体游离的影响.结果表明,愈伤组织作为原生质体游离材料好于下胚轴;红豆草愈伤组织在1.0% cellulose 0.8% Macerase 0.5% macerozyme R-10的酶液中酶解6 h为较理想的原生质体酶解条件.     

红麻下胚轴原生质体的分离与培养

采用暗培养3日龄的红麻无菌苗下胚轴,在0.45 mol·L-1甘露醇的渗透压条件下,以5.0mg·L-1纤维素酶(Cellulose R-10)和5.0mg·L-1果胶酶(Pectinase)酶解12 h,原生质体的产率最高,活力较强.以5.0×104个·mL-1的密度,在改良的KM8P培养基中,附加0.5 mg·L-1 2,4-D和0.5 mg·L-1 6-BA,用微滴法培养,对原生质体的分裂和愈伤组织的形成极为有利.     

木薯脆性胚性愈伤组织原生质体培养与植株再生

【目的】建立有效的木薯原生质体再生体系,为原生质体融合以及原生质体转化等研究奠定技术基础。【方法】酶解木薯品种TMS60444 的脆性胚性愈伤组织（FEC）的悬浮系,分离原生质体的产量最高达3.5×106个/g,FDA检测其活性约90%。用TM2G培养基以液体浅层法分别在5×105个/mL和2×105个/mL密度下培养,培养过程中前30 d用0.3 mol•L-1 TM2G新鲜培养基每10 d更换1次,此后每10 d用0.25 mol•L-1 TM2G新鲜培养基更换。原生质体培养45 d后即可挑出1-2 mm大小的愈伤组织分别在MSN培养基上分化胚、CMM上促胚成熟、CEM上茎伸长、MS上生根。【结果】在5×105个/mL的原生质体培养密度下,长出的都是致密型愈伤组织（能分化胚状体）,而在2×105个/mL的密度下培养长出的有致密型愈伤组织,也有空泡型愈伤组织（不能分化胚状体）。本试验共挑出1 479个致密细胞团,分化获得757个子叶胚,已再生完整植株186棵。【结论】本研究分离的原生质体产量和活性有较大提高,对前人所指出的瓶颈问题有所改进,原生质体再生植株效率有较大提高。     

51份龙眼种质的胚性愈伤组织诱导及其离体保存

对福建龙眼的主要栽培品种、地方品种及特异株系共51份种质的幼胚进行培养,诱导胚性愈伤组织作为种质资源离体保存的材料,并进行限制生长保存试验.结果表明:MS+2 mg.L-12,4-D培养基适用于绝大部分品种的不同直径的龙眼幼胚胚性愈伤组织的诱导,平均诱导率为48.3%;直径2-4 mm的幼胚最适宜于胚性愈伤组织诱导.在添加1 mg.L-1活性炭的培养基上进行为期7-10 d的过渡培养,能减少直径<2 mm和直径>6 mm的幼胚因褐变导致的死亡,从而提高愈伤组织诱导率.龙眼胚性愈伤组织在常规继代培养中的周期为20 d左右,且品种间的差异较大.在MS+1 mg.L-12,4-D培养基中附加20 g.L-1甘露醇,于16℃低温下进行限制生长保存,可以使龙眼继代培养周期由原来的20 d延长至60 d.     

不同酶液组合对椪柑原生质体分离的影响

以椪柑愈伤组织和试管苗叶片为试验材料,采用纤维素酶R-10+离析酶R-10的酶液组合Ⅰ和纤维素酶Worthington+离析酶R-10的酶液组合Ⅱ进行原生质体的分离,比较这2种酶液组合对原生质体的酶解时间、产量及活性氧含量的影响。结果表明,酶液组合Ⅱ所需的酶解时间均短于酶液组合Ⅰ;酶液组合Ⅱ所获得的原生质体产量均高于酶液组合Ⅰ,在愈伤组织中前者产量是后者的9. 09倍,在叶片中前者产量是后者的5. 29倍,差异显著;酶液组合Ⅰ的愈伤组织原生质体的活性氧水平是酶液组合Ⅱ的1. 96倍,且差异显著,而对于叶肉原生质体,2种酶液组合之间的差异不显著。因此可见,酶液组合Ⅱ更适合用于椪柑原生质体的分离。     

荔枝转基因悬浮细胞再生松散性胚性愈伤组织的原生质体分离与初步培养

以荔枝优良品种下番枝转gus和hpt基因悬浮细胞再生的松散性胚性愈伤组织(TSFEC)为试材,进行原生质体分离研究及初步培养。结果表明:潮霉素会延长荔枝TSFEC原生质体分离的酶解时间,比一般的酶解时间多2 h,但对原生质体产量和存活率的影响不大;TSFEC培养时间对原生质体分离的影响很大,其中以培养15-20 d时的原生质体产量最大,为(10.1-10.5)×107个.g-1,此时原生质体的活力最高,存活率可以达到93.1%-93.4%;酶解方式对原生质体产量和活力影响都不大,常规的酶解方式酶解的最适宜时间为14 h。     

玻璃化法超低温保存荔枝胚性愈伤组织及其植株再生

采用玻璃化法对荔枝胚性愈伤组织超低温保存及植株再生进行了初步探讨.将继代保存15 d的荔枝胚性愈伤组织转接到预培养基[MS+50 mL.L-1二甲基亚砜(DMSO)+1 mg.L-12,4-D+20 g.L-1蔗糖+6 g.L-1琼脂糖]中,在5℃低温下预培养.将预培养后的愈伤组织于常温下用体积分数为60%玻璃化溶液(2PVS2)装载20 min,再于0℃下用PVS2溶液平衡40 min;换新鲜的PVS2溶液,迅速投入液氮中保存.1周后取出,于40℃温水浴中化冻,弃PVS2,用1.2 mol.L-1蔗糖液+MS基本培养基的洗涤液洗涤3次,再接种到新鲜的培养基中恢复培养,恢复培养后的胚性愈伤组织能正常进行体细胞胚胎发生、成熟和植株再生.     

运动发酵单胞耐酸菌株的诱变筛选及发酵条件的优化

通过对运动发酵单胞菌原始菌株(ZM6)的耐酸驯化、紫外诱变、小型初筛和复筛,获得一株耐酸突变菌株ZM6-3-2.通过突变菌株与出发菌株以及酵母发酵性能的比较表明,ZM6-3-2的发酵蔗汁性能显著优于ZM6菌株和工业生产乙醇的酵母,其最终乙醇质量浓度为56.64 g.L-1,比ZM6菌株的52.18 g.L-1提高了4.46 g.L-1,而且最终乙醇质量浓度、总糖出酒率、总糖利用率均比酵母高出约10%.通过正交试验对该耐酸菌株的发酵培养基进行优化并进行验证,发现含250 g.L-1总糖、10 g.L-1酵母膏、2 g.L-1KH2PO4、0.5 g.L-1(NH4)2SO4、1 g.L-1MgSO4.7H2O,pH 5.5的培养基最有利于ZM6-3-2的发酵,发酵时间短,产乙醇多.     

苏云金芽孢杆菌WB9菌株的分离、生化特性及培养基优化

对来自武夷山自然保护区非耕作区的200个土壤样品进行了苏云金芽孢杆菌的分离,获得12株菌株,分离频率为6.0%.室内感染力测定结果表明WB9菌株对小菜蛾具有高感染力、对甜菜夜蛾具有较高的感染力.生理生化指标测定结果显示WB9与库斯塔克亚种8010的反应表现型相同,仅在个别反应上有强弱差异,由此推测WB9可能属库斯塔克亚种.此外,通过正交试验设计和室内摇瓶培养,获得了优化的WB9工业培养基组合,即30.0 g.L-1玉米淀粉、20.0 g.L-1黄豆饼粉、15.0 g.L-1玉米粉、10.0 g.L-1酵母粉、2.0 g.L-1蛋白胨、15.0 g.L-1玉米浆、5.0 g.L-1CaCO3、0.3 g.L-1MgSO4.7H2O、1.0 g.L-1KH2PO4和0.02 g.L-1ZnSO4.7H2O.     

蔗糖与麦芽糖质量浓度及添加成分对水稻成熟胚培养的效应

以IR54、639、金糯2号、特优63等4个水稻品种的成熟胚为外植体,以MS为基本培养基,研究了蔗糖与麦芽糖质量浓度及不同添加成分对水稻成熟胚培养的影响.结果表明,在这2种糖质量浓度及其配比试验中,在麦芽糖与蔗糖总量为60 g.L-1下,麦芽糖与蔗糖质量浓度比为1∶2时,愈伤组织诱导率、愈伤组织分化率、绿苗分化率均最高;0.5 mg.L-12,4-D和2 mg.L-1KT配合使用,比使用其他激素配比效果好;不同水稻基因型在不同培养基中的诱导效应存在差异.     

橡胶树热研8—79原生质体培养再生植株

【目的】优化橡胶树热研8-79原生质体分离和培养条件,建立橡胶树原生质体培养植株高效再生体系,为橡胶树体细胞杂交育种奠定基础。【方法】以橡胶树热研8-79花药愈伤组织建立的胚性细胞悬浮系为试验材料,设计不同酶组合、酶解时间和悬浮细胞继代时间进行原生质体分离,采用不同培养基、看护细胞浓度和接种密度进行原生质体培养,对原生质体分裂发育的小愈伤组织进行体细胞胚诱导及植株再生培养,统计原生质体的产量、分裂频率、体胚数及体胚萌发率。【结果】酶组合为纤维素酶1.50%＋果胶酶0.15%＋离析酶0.50%、酶解时间为12 h时,继代培养第5 d的胚性悬浮细胞达最高产量（3.6 ×107个/mL PCV）;用酶解细胞和看护细胞继代培养基分别作为原生质体液体培养基和看护培养基,比使用KPR培养基更有利于原生质体的分裂,当看护细胞浓度为5%、接种密度为5 ×105个/mL时原生质体的分裂频率最高,达54%。原生质体持续分裂形成肉眼可见的小愈伤组织增殖后经体胚发生途径发育成完整的小植株。【结论】通过优化橡胶树热研8-79胚性悬浮细胞原生质体分离的酶组合、酶解时间、继代培养时间及看护培养过程中培养基组成、看护细胞浓度和接种密度等影响因素,可以建立橡胶树原生质体培养植株高效再生体系。     

Somatic embryogenesis and plant regeneration in glandless upland cotton (<Emphasis Type="Italic">Gossypium hirsutum</Emphasis> L.)

Glandless upland cotton has an important economic value. Embryogenic calli and regenerated plants were obtained from the hypocotyl explants of glandless upland cotton seedlings, cultivar Jisheng1. The results indicated that somatic embryogenesis was significantly influenced by the types of auxin and cytokinin. 2, 4-D was advantageous to induce cotton callus, but embryogenic callus could not be obtained on the 2, 4-D medium. Embryogenic calli were also not obtained on the MSB sold medium with the combination of IBA and BA. However, embryogenic calli were induced when the hypocotyl explants were cultured on the IBA and KT medium. More than 31% of the hypocotyl segments produced embryogenic calli when the MSB medium was supplemented with 1.0 mg·L⁻¹ IBA and 0.5 mg·L⁻¹ KT. Embryogenic calli with somatic embryos could be observed within three months. Somatic embryo germination and maturation occurred on the hormone-free MSB medium with 1.0 g·L⁻¹ Gln and 0.5 g·L⁻¹ Asn. A number of regenerated plants could be obtained in six months. In the present study, a simple and efficient system was established to induce a number of embryogenic calli and regenerate plantlets from hypocotyl explants.     

芳樟离体快繁与离体保存试管苗再生植株培养

以芳樟嫩茎为外植体,进行离体培养快繁技术研究.结果表明:在改良MS+2mg·L-1 6 BA+ 0. 1mg·L-1 NAA固体培养基中诱导不定芽,诱导率高;用附加 0. 2mg·L-1 GA3 或无GA3 的改良MS+2mg·L-1 6 BA+0. 1mg·L-1 IBA固体培养基交替培养,芽苗可大量增殖,繁殖系数高达 10-20倍,而且可以避免褐变和玻璃化现象;保存 2a的试管苗仍然保持再生芽的能力;芽苗用 1 /2MS+0. 8mg·L-1 IBA+ 0. 2mg·L-1 NAA + 20g·L-1蔗糖固体培养基培养,生根、壮苗效果最好.